Name: oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food
Uploaded: 2013-05-06T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food at JoVE.com

Ce travail a été financé par des subventions des National Institutes of Health (AI079442 et AI091918) attribués à SEFD

1. Préparation de la gélose sélective des médias (BHI / L + G) pour inhiber microbiote intestinal <ol><li> Peser 26 g de cerveau-coeur Infusion Agar (Difco), 7,5 g de LiCl et 5,0 g de glycine et le placer dans un ballon de 1 litre. Ajouter 500 ml d&#39;eau désionisée. </li><li> Chauffer sur un agitateur magnétique jusqu&#39;à ébullition d&#39;agar, en remuant continuellement. Prenez le ballon hors du feu, laissez les bulles s&#39;installer brièvement, puis ramener à ébullition. </li><li> . Autoclave pendan...

<ol>
	<li>Becker, L. A., Evans, S. N., Hutkins, R. W., Benson, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sigmaB+in+adaptation+of+Listeria+monocytogenes+to+growth+at+low+temperature.">Role of sigmaB in adaptation of Listeria monocytogenes to growth at low temperature.</a> Journal of Bacteriology. 182, 7083-7087 (2000).</li><li>Neunlist, M. 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Immunol. 19, 1075-1081 (2007).</li><li>Lecuit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+model+for+listeriosis:+role+of+internalin+in+crossing+the+intestinal+barrier.">A transgenic model for listeriosis: role of internalin in crossing the intestinal barrier.</a> Science. 292, 1722-1725 (2001).</li><li>Pron, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+study+of+the+intestinal+stage+of+listeriosis+in+a+rat+ligated+ileal+loop+system.">Comprehensive study of the intestinal stage of listeriosis in a rat ligated ileal loop system.</a> Infect. Immun. 66, 747-755 (1998).</li><li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design.">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129, 891-902 (2007).</li><li>Ghanem, B. o. u., N, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=InlA+promotes+dissemination+of+Listeria+monocytogenes+to+the+mesenteric+lymph+nodes+during+food+borne+infection+of+mice.">InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice.</a> PLoS Pathogens. , (2012).</li><li>Kowal, M., Buda-Lewandowska, D., Plytycz, B., Styrna, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Day/night+food+consumption+in+mice+is+strain+and+age-dependent.">Day/night food consumption in mice is strain and age-dependent.</a> Folia Biol. (Krakow). 50, 1-3 (2002).</li><li>Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes+-+from+saprophyte+to+intracellular+pathogen.">Listeria monocytogenes - from saprophyte to intracellular pathogen.</a> Nature reviews. Microbiology. 7, 623-628 (2009).</li><li>Camejo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+arsenal+of+virulence+factors+deployed+by+Listeria+monocytogenes+to+promote+its+cell+infection+cycle.">The arsenal of virulence factors deployed by Listeria monocytogenes to promote its cell infection cycle.</a> Virulence. 2, 379-394 (2011).</li></ol>

Souris consanguines sont pas uniformément réceptif à l&#39;alimentation, à tous les moments de la journée, et leur volonté de manger le pain contaminé dépendront à la fois sur le type de souche et l&#39;âge des souris 17. Dans notre expérience, 6-9 semaine vieilles souris B6 sont réceptifs à l&#39;alimentation, à tout moment de la journée, mais les souris BALB ne seront pas toujours manger le morceau de pain que si elle est offerte au cours de leur cycle sombre. Le cycle de la lumière de la pi...

Listeria monocytogenes sont facultatives bactéries pathogènes intracellulaires qui causent des infections d&#39;origine alimentaire chez les humains. Les bactéries sont résistantes à la plupart des processus utilisés pour protéger notre approvisionnement alimentaire, comme le séchage, le salage, ou 1,2 de réfrigération et les infections sont généralement liés aux traités », prêt-à-manger&quot; des aliments qui ne sont pas chauffés avant la consommation . Dans plusieurs épidémies précédentes, la source de L. nourriture monocytogenes contaminé a été identifié, et le groupe restreint d&#39;individus exposés a été étroitement surveillé 3-6. Dans ces exemples, la maladie clinique chez les individus en bonne santé varie d&#39;une légère gastro-entérite spontanément à des infections intestinales et systémiques plus graves ayant nécessité une hospitalisation. L. infections monocytogenes chez les individus immunodéprimés, y compris les nouveau-nés et les personnes âgées, ont été associés à un taux de mortalité élevé (25-30%), même avec un traitement antibiotique <sup&gt; 7,8. On en sait peu sur la dose infectieuse pour L. monocytogenes, ou les facteurs de l&#39;hôte qui régissent la susceptibilité à l&#39;infection après la transmission orale, principalement en raison de l&#39;absence d&#39;un petit modèle animal qui récapitule ce large éventail de résultats d&#39;infection. Le modèle le plus largement utilisé de la listériose soit par voie intraveineuse inoculation (iv) de souris. Le modèle IV est hautement reproductible, et a été extrêmement utile pour étudier les réponses des cellules T naïves à la fois et de la mémoire au cours de l&#39;infection par 9,10. L&#39;inconvénient du modèle IV est qu&#39;il contourne complètement la phase intestinale de l&#39;infection. Après la transmission d&#39;origine alimentaire, la muqueuse intestinale constitue une barrière qui ralentit et limite le nombre de bactéries qui peuvent continuellement diffuser vers les tissus périphériques sans doute. En revanche, l&#39;ensemble de l&#39;inoculum peut être trouvé dans la rate et du foie dans les minutes suivant l&#39;administration iv, et ce grand bol d&#39;organismes peut submerger d immunitaire innéefenses dans ces tissus. L&#39;infection orale par gavage des souris est utilisé moins souvent, parce que de fortes doses (10 9 -10 11 CFU) sont généralement nécessaires pour atteindre la colonisation intestinale 10. En outre, intragastrique (ig) inoculation avec une aiguille d&#39;alimentation ne génère pas une période reproductible d&#39;une infection gastro-intestinale avant dissémination systémique. Certains laboratoires ont rapporté que L. monocytogenes atteindre la rate et le foie dans les 4-12 heures après l&#39;infection (HPI), tandis que d&#39;autres n&#39;ont pas montré de propagation systémique jusqu&#39;à 48 HPI 11-15. Cette variation du laboratoire au laboratoire peut être une conséquence de la nature invasive de ig inoculation, ce qui peut entraîner un traumatisme mineur à la muqueuse de l&#39;œsophage, et de promouvoir invasion sanguine directe de la bactérie. Nous avons récemment développé un nouveau modèle de souris de oral L. infection monocytogenes qui imite de près toutes les phases de la maladie humaine 16. L&#39;infection survient lorsque les souris ingèrent des morceaux de contaminé alimentaire, un processus qui est non-traumatique, et ne nécessite pas de compétences spécialisées par des chercheurs de laboratoire. Pendant une période de temps discrète (36-48 h), L. monocytogenes reproductible colonisent seulement le tractus gastro-intestinal, permettant ainsi enquête sur les mécanismes utilisés par les pathogènes Listeria de translocation à travers la muqueuse de l&#39;intestin et de diffuser dans les tissus périphériques. Surtout, le modèle peut être utilisé pour étudier les différences dans la résistance innée de l&#39;hôte à l&#39;infection. Dans une étude précédente, nous avons montré que des souris BALB / c / par / J ont été très sensibles à la listériose d&#39;origine alimentaire, avec la réplication exponentielle de L. monocytogenes qui se produisent dans l&#39;intestin, la rate, le foie et la vésicule biliaire 16. En revanche, les souris C57BL / 6 étaient résistants à l&#39;infection d&#39;origine alimentaire, avec seulement colonisation transitoire de L. monocytogenes se produisant dans chacun de ces tissus. Une autre caractéristique du modèle d&#39;origine alimentaire qui imite de près la maladie humaine, c&#39;est que la diffusion naturelleau cerveau survenue pendant les derniers stades de l&#39;infection (5-7 dpi).

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Brain Heart Infusion Agar</td>
 <td>Difco</td>
 <td>BD-241830</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lithium chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L9650</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glycine</td>
 <td>Omnipur</td>
 <td>4840</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>15575-038</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DTT</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>D5545</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase, type IV</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS004089</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DNAse I</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS002007</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Diff-Quik</td>
 <td>Dade-Behring</td>
 <td>B4132-1A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PowerGen 1000 homogenizer</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>14-261-06</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>stainless steel type 304 mesh #80</td>
 <td>Small Parts, Inc.</td>
 <td>CX-0080-C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cytospin</td>
 <td>Statspin</td>
 <td>M801-22</td>
 <td></td>
 </tr>
	 </tbody>
 </table>

oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food

L. monocytogenes sont facultatives bactéries pathogènes intracellulaires qui causent des infections d&#39;origine alimentaire chez les humains. Très peu est connu au sujet de la phase digestive de listériose en raison de l&#39;absence d&#39;un petit modèle animal qui reproduit fidèlement la maladie humaine. Ce document décrit un nouveau modèle de souris pour la transmission orale de L. monocytogenes. En utilisant ce modèle, les souris nourries L. monocytogenes-pain contaminés ont une phase discrète de l&#39;infection gastro-intestinale, suivie de degrés de dissémination systémique varier dans des souches de souris sensibles (BALB / c / par / J) ou résistants (C57BL / 6). Pendant les derniers stades de l&#39;infection, on observe la diffusion de la vésicule biliaire et le cerveau. Le modèle d&#39;origine alimentaire de la listériose est hautement reproductible, ne nécessite pas de compétences spécialisées, et peut être utilisé avec une grande variété de souches bactériennes et des souches de souris de laboratoire. En tant que tel, il est le modèle idéal pour étudier les stratégies de virulence utilisés par L. monocytogenes </em&gt; pour favoriser la colonisation intestinale, ainsi que la réponse de l&#39;hôte à l&#39;alimentation infection bactérienne supporté invasif.

Colonies de L. monocytogenes seront visibles sur BHI / L + G plaques après 36-48 heures d&#39;incubation à 37 ° C. Les colonies ont un aspect blanc crème en forme de dôme lisse (figure 1A). La croissance sera inhibée pour la majorité de la flore intestinale, mais il n&#39;est pas rare de voir des colonies qui ne sont pas L. monocytogenes, en particulier lorsque le placage de l&#39;intestin grêle ou du colon directement sans dilution significative (figure 1B). L...

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Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

Cet article décrit une nouvelle méthode pour infection orale de souris à l&#39;aide<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Aliments contaminés. Le protocole peut être facilement adapté pour être utilisé avec d&#39;autres bactéries pathogènes d&#39;origine alimentaire.

La transmission orale de<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Chez la souris par l&#39;ingestion d&#39;aliments contaminés

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the ...

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

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