Name: oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food
Uploaded: 2013-05-06T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal National Institutes of Health (AI079442 e AI091918) assegnati a SEFD

1. Preparazione di Selective Agar media (BHI / L + G) per inibire microbiota intestinale <ol><li> Pesare 26 g di Brain Heart Infusion Agar (Difco), 7,5 g di LiCl e 5,0 g di glicina e posto in un pallone da 1 litro. Aggiungere 500 ml di acqua deionizzata. </li><li> Calore su un agitatore magnetico fino a quando le bolle di agar, mescolando continuamente. Prendete il pallone fuori dal fuoco, lasciare che le bolle si depositano brevemente, e poi riportare a bollore. </li><li> . Autoclave per 30 minuti a 121 ° C sotto 16...

<ol>
	<li>Becker, L. A., Evans, S. N., Hutkins, R. W., Benson, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sigmaB+in+adaptation+of+Listeria+monocytogenes+to+growth+at+low+temperature.">Role of sigmaB in adaptation of Listeria monocytogenes to growth at low temperature.</a> Journal of Bacteriology. 182, 7083-7087 (2000).</li><li>Neunlist, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+salting+and+cold-smoking+on+the+culturability,+viability,+and+virulence+of+Listeria+monocytogenes+strain+Scott+A.">Effect of salting and cold-smoking on the culturability, viability, and virulence of Listeria monocytogenes strain Scott A.</a> Journal of Food Protection. 68, 85-91 (2005).</li><li>Aureli, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+outbreak+of+febrile+gastroenteritis+associated+with+corn+contaminated+by+Listeria+monocytogenes.">An outbreak of febrile gastroenteritis associated with corn contaminated by Listeria monocytogenes.</a> N. Engl. J. Med. 342, 1236-1241 (2000).</li><li>Dalton, C. 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Dis. 35, 943-949 (2002).</li><li>Salamina, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+foodborne+outbreak+of+gastroenteritis+involving+Listeria+monocytogenes.">A foodborne outbreak of gastroenteritis involving Listeria monocytogenes.</a> Epidemiol. Infect. 117, 429-436 (1996).</li><li>Mead, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food-related+illness+and+death+in+the+United+States.">Food-related illness and death in the United States.</a> Emerging Infectious Diseases. 5, 607-625 (1999).</li><li>Wing, E. J., Gregory, S. 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T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+CD8+T+cell+responses+with+Listeria+monocytogenes+infection.">Probing CD8 T cell responses with Listeria monocytogenes infection.</a> Advances in Immunology. 113, 51-80 (2012).</li><li>Disson, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+listeriosis+in+natural+and+genetically+engineered+animals.">Modeling human listeriosis in natural and genetically engineered animals.</a> Nat Protoc. 4, 799-810 (2009).</li><li>Czuprynski, C. J., Faith, N. 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Immunol. 19, 1075-1081 (2007).</li><li>Lecuit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+model+for+listeriosis:+role+of+internalin+in+crossing+the+intestinal+barrier.">A transgenic model for listeriosis: role of internalin in crossing the intestinal barrier.</a> Science. 292, 1722-1725 (2001).</li><li>Pron, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+study+of+the+intestinal+stage+of+listeriosis+in+a+rat+ligated+ileal+loop+system.">Comprehensive study of the intestinal stage of listeriosis in a rat ligated ileal loop system.</a> Infect. Immun. 66, 747-755 (1998).</li><li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design.">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129, 891-902 (2007).</li><li>Ghanem, B. o. u., N, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=InlA+promotes+dissemination+of+Listeria+monocytogenes+to+the+mesenteric+lymph+nodes+during+food+borne+infection+of+mice.">InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice.</a> PLoS Pathogens. , (2012).</li><li>Kowal, M., Buda-Lewandowska, D., Plytycz, B., Styrna, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Day/night+food+consumption+in+mice+is+strain+and+age-dependent.">Day/night food consumption in mice is strain and age-dependent.</a> Folia Biol. (Krakow). 50, 1-3 (2002).</li><li>Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes+-+from+saprophyte+to+intracellular+pathogen.">Listeria monocytogenes - from saprophyte to intracellular pathogen.</a> Nature reviews. Microbiology. 7, 623-628 (2009).</li><li>Camejo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+arsenal+of+virulence+factors+deployed+by+Listeria+monocytogenes+to+promote+its+cell+infection+cycle.">The arsenal of virulence factors deployed by Listeria monocytogenes to promote its cell infection cycle.</a> Virulence. 2, 379-394 (2011).</li></ol>

Topi inbred non sono uniformemente ricettivi a nutrire in ogni momento della giornata, e la loro volontà di mangiare il pane contaminato dipenderà sia dal tipo di ceppo e l&#39;età dei topi 17. Nella nostra esperienza, 6-9 settimane di età B6 topi sono ricettivi per l&#39;alimentazione in ogni momento della giornata, ma i topi BALB non sempre mangiare il pezzo di pane a meno che non viene offerto durante il loro ciclo di buio. Il ciclo di luce della stanza utilizzata per ospitare gli animali può essere a...

Listeria monocytogenes sono facoltativi batteri patogeni intracellulari che causano le infezioni di origine alimentare nell&#39;uomo. I batteri sono resistenti a molti dei processi utilizzati per proteggere il nostro approvvigionamento alimentare, quali l&#39;essiccazione, la salatura, o 1,2 refrigerazione e le infezioni sono in genere legati a trattati, &quot;ready-to-eat&quot; cibi non riscaldati prima del consumo . In diverse epidemie precedenti, la fonte di L. cibo monocytogenes-contaminato è stato identificato, e il gruppo ristretto di individui esposti è stata monitorata attentamente 3-6. In questi esempi, la malattia clinica in individui altrimenti sani varia da un lieve, autolimitante gastroenterite per infezioni intestinali e sistemiche più gravi che ha richiesto ospedalizzazione. L. infezioni monocytogenes in individui immunocompromessi, inclusi sia i neonati e gli anziani, sono stati associati con un alto tasso di mortalità (25-30%), anche con il trattamento antibiotico <sup&gt; 7,8. Poco si sa circa la dose infettiva di L. monocytogenes, oi fattori dell&#39;ospite che governano suscettibilità alle infezioni dopo trasmissione orale, soprattutto a causa della mancanza di un piccolo modello animale che ricapitola questa ampia gamma di risultati infezione. Il modello più diffuso di listeriosi è per via endovenosa (IV) inoculazione di topi. Il modello IV è altamente riproducibile, ed è stato estremamente utile per studiare le risposte delle cellule sia naïve e memory T durante l&#39;infezione 9,10. L&#39;inconveniente del modello iv è che bypassa completamente la fase di infezione intestinale. Dopo la trasmissione di origine alimentare, la mucosa intestinale fornisce una barriera che rallenta presumibilmente e limita il numero di batteri che possono continuamente diffondere ai tessuti periferici. In contrasto, l&#39;intero inoculo può essere trovata nella milza e nel fegato in pochi minuti di somministrazione endovenosa, e questo grande bolo di microrganismi può sopraffare immunitaria innata defenses in questi tessuti. Infezione orale di topi con sonda gastrica è meno comunemente usato, perché grandi dosi (10 9 -10 11 CFU) sono in genere tenuti a raggiungere la colonizzazione intestinale 10. Inoltre, intragastrica (ig) inoculazione con un ago di alimentazione non genera un periodo riproducibile di infezione gastrointestinale prima diffusione sistemica. Alcuni laboratori hanno segnalato che L. monocytogenes raggiungono la milza e il fegato entro 4-12 ore dopo l&#39;infezione (HPI), mentre altri non hanno mostrato alcuna diffusione sistemica fino a 48 HPI 11-15. Questa variazione da laboratorio a laboratorio può essere una conseguenza della natura invasiva ig inoculazione, che può provocare traumi minori alla mucosa dell&#39;esofago, e promuovere la circolazione sanguigna invasione diretta dei batteri. Abbiamo recentemente sviluppato un nuovo modello murino di orale L. infezione monocytogenes che imita da vicino tutte le fasi della malattia umana 16. L&#39;infezione si verifica quando i topi ingerire pezzi di contamminato cibo, un processo che è non-traumatica, e non richiede competenze specialistiche da investigatori laboratorio. Per un periodo discreto di tempo (36-48 ore), L. monocytogenes riproducibile colonizzano solo il tratto gastrointestinale, permettendo così studiare i meccanismi utilizzati dai patogeni Listeria di traslocare attraverso la mucosa intestinale e diffondere ai tessuti periferici. Importante, il modello può essere utilizzato per studiare differenze ospitante innata resistenza alle infezioni. In un precedente studio, abbiamo dimostrato che BALB / c / da / J topi sono stati molto sensibili al cibo listeriosi Borne, con la replica esponenziale di L. monocytogenes che si verificano nello stomaco, milza, fegato e cistifellea 16. In contrasto, C57BL / 6 topi erano resistenti alle infezioni di origine alimentare, con solo colonizzazione transitoria di L. monocytogenes verificano in ciascuno di questi tessuti. Una caratteristica supplementare del modello di origine alimentare che imita da vicino la malattia umana è che la diffusione naturaleal cervello verificato durante le ultime fasi di infezione (5-7 dpi).

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Brain Heart Infusion Agar</td>
 <td>Difco</td>
 <td>BD-241830</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lithium chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L9650</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glycine</td>
 <td>Omnipur</td>
 <td>4840</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>15575-038</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DTT</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>D5545</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase, type IV</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS004089</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DNAse I</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS002007</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Diff-Quik</td>
 <td>Dade-Behring</td>
 <td>B4132-1A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PowerGen 1000 homogenizer</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>14-261-06</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>stainless steel type 304 mesh #80</td>
 <td>Small Parts, Inc.</td>
 <td>CX-0080-C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cytospin</td>
 <td>Statspin</td>
 <td>M801-22</td>
 <td></td>
 </tr>
	 </tbody>
 </table>

oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food

L. monocytogenes sono facoltativi batteri patogeni intracellulari che causano le infezioni di origine alimentare nell&#39;uomo. Molto poco si sa circa la fase gastrointestinale di listeriosi a causa della mancanza di un piccolo modello animale che mima da vicino la malattia umana. Questo articolo descrive un nuovo modello murino per la trasmissione orale di L. monocytogenes. Utilizzando questo modello, i topi nutriti L. monocytogenes-contaminato pane hanno una discreta fase di infezione gastrointestinale, seguito da vari gradi di diffusione sistemica sensibili (BALB / c / da / J) o resistenti (C57BL / 6) ceppi di topi. Durante le ultime fasi di infezione, si osserva la diffusione della cistifellea e del cervello. Il modello di origine alimentare listeriosi è altamente riproducibile, non richiede competenze specialistiche, e può essere utilizzato con un&#39;ampia varietà di isolati batterici e ceppi di topi di laboratorio. Come tale, è il modello ideale per studiare entrambe le strategie utilizzate virulenza di L. monocytogenes </em&gt; promuovere colonizzazione intestinale, così come la risposta dell&#39;ospite invasiva alimenti sopportato infezione batterica.

L. monocytogenes le colonie saranno visibili su piastre di BHI / L + G, dopo 36-48 ore di incubazione a 37 ° C. Le colonie hanno una, a forma di cupola aspetto bianco cremoso liscia (Figura 1A). Crescita sarà inibito per la maggioranza della flora batterica intestinale, ma è comune vedere alcune colonie che non sono L. monocytogenes, in particolare quando placcatura tenue o del colon senza diluizione significativa (Figura 1B). Colonie sospette possono essere conferm...

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Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

Questo documento descrive un nuovo metodo per l&#39;infezione orale di topi usando<em&gt; Listeria monocytogenes</emAlimentare&gt;-contaminato. Il protocollo può essere facilmente adattato per l&#39;uso con altri alimenti patogeni batterici origine.

Trasmissione orale di<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Nei topi tramite ingestione di alimenti contaminati

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the ...

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