Name: oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food
Uploaded: 2013-05-06T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food at JoVE.com

Este trabalho foi financiado por subvenções dos Institutos Nacionais de Saúde (AI079442 e AI091918) concedidos a SEFD

1. Preparação de meios de agar selectivas (BHI / L + L) para inibir a microbiota intestinal <ol><li> Pesar 26 g Cérebro Heart Infusion Agar (Difco), 7,5 g LiCl e 5,0 g de glicina e coloque em um frasco de 1 litro. Adicionar 500 ml de água desionizada. </li><li> Aquecer em um agitador magnético até que as bolhas de agar, agitando continuamente. Pegue o frasco fora do fogo, deixe que as bolhas resolver brevemente e, em seguida, trazer de volta a ferver novamente. </li><li> . Autoclave durante 30 minutos a 121 ° C...

<ol>
	<li>Becker, L. A., Evans, S. N., Hutkins, R. W., Benson, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sigmaB+in+adaptation+of+Listeria+monocytogenes+to+growth+at+low+temperature.">Role of sigmaB in adaptation of Listeria monocytogenes to growth at low temperature.</a> Journal of Bacteriology. 182, 7083-7087 (2000).</li><li>Neunlist, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+salting+and+cold-smoking+on+the+culturability,+viability,+and+virulence+of+Listeria+monocytogenes+strain+Scott+A.">Effect of salting and cold-smoking on the culturability, viability, and virulence of Listeria monocytogenes strain Scott A.</a> Journal of Food Protection. 68, 85-91 (2005).</li><li>Aureli, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+outbreak+of+febrile+gastroenteritis+associated+with+corn+contaminated+by+Listeria+monocytogenes.">An outbreak of febrile gastroenteritis associated with corn contaminated by Listeria monocytogenes.</a> N. Engl. J. Med. 342, 1236-1241 (2000).</li><li>Dalton, C. 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Dis. 35, 943-949 (2002).</li><li>Salamina, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+foodborne+outbreak+of+gastroenteritis+involving+Listeria+monocytogenes.">A foodborne outbreak of gastroenteritis involving Listeria monocytogenes.</a> Epidemiol. Infect. 117, 429-436 (1996).</li><li>Mead, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food-related+illness+and+death+in+the+United+States.">Food-related illness and death in the United States.</a> Emerging Infectious Diseases. 5, 607-625 (1999).</li><li>Wing, E. J., Gregory, S. 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Immunol. 19, 1075-1081 (2007).</li><li>Lecuit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+model+for+listeriosis:+role+of+internalin+in+crossing+the+intestinal+barrier.">A transgenic model for listeriosis: role of internalin in crossing the intestinal barrier.</a> Science. 292, 1722-1725 (2001).</li><li>Pron, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+study+of+the+intestinal+stage+of+listeriosis+in+a+rat+ligated+ileal+loop+system.">Comprehensive study of the intestinal stage of listeriosis in a rat ligated ileal loop system.</a> Infect. Immun. 66, 747-755 (1998).</li><li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design.">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129, 891-902 (2007).</li><li>Ghanem, B. o. u., N, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=InlA+promotes+dissemination+of+Listeria+monocytogenes+to+the+mesenteric+lymph+nodes+during+food+borne+infection+of+mice.">InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice.</a> PLoS Pathogens. , (2012).</li><li>Kowal, M., Buda-Lewandowska, D., Plytycz, B., Styrna, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Day/night+food+consumption+in+mice+is+strain+and+age-dependent.">Day/night food consumption in mice is strain and age-dependent.</a> Folia Biol. (Krakow). 50, 1-3 (2002).</li><li>Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes+-+from+saprophyte+to+intracellular+pathogen.">Listeria monocytogenes - from saprophyte to intracellular pathogen.</a> Nature reviews. Microbiology. 7, 623-628 (2009).</li><li>Camejo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+arsenal+of+virulence+factors+deployed+by+Listeria+monocytogenes+to+promote+its+cell+infection+cycle.">The arsenal of virulence factors deployed by Listeria monocytogenes to promote its cell infection cycle.</a> Virulence. 2, 379-394 (2011).</li></ol>

Camundongos isogênicos não são uniformemente receptivo a alimentação em todos os momentos do dia, e sua vontade de comer o pão contaminado vai depender tanto da cepa e da idade dos camundongos 17. Em nossa experiência, 6-9 semanas de idade camundongos B6 são receptivos a alimentar a qualquer hora do dia, mas camundongos BALB não vai comer de forma consistente o pedaço de pão a menos que seja oferecido durante o seu ciclo de escuro. O ciclo de luz da sala utilizada para abrigar os animais podem ser ...

Listeria monocytogenes são facultativos patógenos intracelulares que causam infecções de origem alimentar em humanos. As bactérias são resistentes a muitos dos processos utilizados para proteger a fonte de alimento, tais como a secagem, a salga, ou 1,2 refrigeração e infecções são normalmente ligados a transformados, &quot;pronto-a-comer&quot; alimentos que não são aquecidos antes de serem consumidos . Em vários surtos anteriores, a fonte de L. Listeria alimentos contaminados foi identificado, e o grupo restrito de indivíduos expostos foi cuidadosamente monitorizados 3-6. Nesses exemplos, a doença clínica em indivíduos saudáveis ​​variou de um leve, auto-limitante gastroenterite a infecções intestinais e sistêmicas mais graves que necessitaram de internação hospitalar. L. infecções monocytogenes em indivíduos imunes comprometidos, incluindo os recém-nascidos e pessoas idosas, têm sido associadas com uma elevada taxa de mortalidade (25-30%), mesmo com o tratamento antibiótico <sse&gt; 7,8. Pouco se sabe sobre a dose infecciosa para L. monocytogenes, ou os fatores do hospedeiro que determinam a susceptibilidade à infecção após a transmissão oral, principalmente devido à falta de um modelo animal de pequeno porte que recapitula esta vasta gama de resultados de infecção. O modelo mais largamente utilizado é de listeriose a inoculação intravenosa (iv) de ratinhos. O modelo IV é altamente reprodutível, e tem sido extremamente útil para estudar as respostas de células T tanto naive e de memória durante a infecção 9,10. A desvantagem do modelo IV é que contorna completamente a fase de infecção intestinal. Depois de comida transmissão transmitidas, na mucosa intestinal proporciona uma barreira que, presumivelmente, retarda e limita o número de bactérias que podem disseminar continuamente para os tecidos periféricos. Em contraste, a totalidade do inoculo podem ser encontrados no baço e no fígado dentro de minutos após a administração iv, e este grande bolus de organismos podem sobrecarregar d imune inataefenses nestes tecidos. A infecção oral de ratos por gavagem é menos usada, uma vez que grandes doses (10 9 -10 11 CFU) são normalmente necessários para alcançar colonização intestinal 10. Além disso, a inoculação intragástrica (IG) com uma agulha de alimentação não gera um período reprodutível de infecção gastrointestinal antes da disseminação sistémica. Alguns laboratórios relataram que L. monocytogenes atingir o baço e fígado dentro de 4-12 horas após a infecção (hpi), enquanto outros não mostraram disseminação sistêmica até 48 hpi 11-15. Esta variação de laboratório para laboratório pode ser uma consequência da natureza invasiva da ig inoculação, o que pode resultar em menor trauma para o revestimento do esófago, e promover a circulação sanguínea invasão directa das bactérias. Recentemente, desenvolveu um novo modelo de mouse oral, L. infecção por Listeria que imita de perto todas as fases da doença humana 16. A infecção ocorre quando os ratinhos ingerir pedaços de contaminados comida, um processo que não é traumático, e não requer habilidades especializadas por investigadores do laboratório. Durante um período limitado de tempo (36-48 horas), L. Listeria reprodutivelmente apenas colonizar o trato gastrointestinal, permitindo assim a investigação dos mecanismos utilizados pelo patogénico Listeria para translocar através da mucosa intestinal e disseminar para tecidos periféricos. É importante ressaltar que o modelo pode ser usado para estudar as diferenças na resistência inata do hospedeiro à infecção. Em um estudo anterior, mostramos que BALB / c / por / J camundongos foram altamente suscetíveis à listeriose transmitida por alimentos, com a replicação exponencial de L. Listeria que ocorrem no intestino, o baço, o fígado, vesícula biliar e 16. Em contraste, os ratinhos C57BL / 6 foram resistentes à infecção transmitida por alimentos, com apenas a colonização de L. transiente Listeria ocorrendo em cada um destes tecidos. Uma característica adicional do modelo de origem alimentar que imita a doença humana é que a disseminação naturaispara o cérebro ocorreu durante as fases posteriores da infecção (dpi 5-7).

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Brain Heart Infusion Agar</td>
 <td>Difco</td>
 <td>BD-241830</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lithium chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L9650</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glycine</td>
 <td>Omnipur</td>
 <td>4840</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>15575-038</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DTT</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>D5545</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase, type IV</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS004089</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DNAse I</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS002007</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Diff-Quik</td>
 <td>Dade-Behring</td>
 <td>B4132-1A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PowerGen 1000 homogenizer</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>14-261-06</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>stainless steel type 304 mesh #80</td>
 <td>Small Parts, Inc.</td>
 <td>CX-0080-C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cytospin</td>
 <td>Statspin</td>
 <td>M801-22</td>
 <td></td>
 </tr>
	 </tbody>
 </table>

oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food

L. monocytogenes são facultativos patógenos intracelulares que causam infecções de origem alimentar em humanos. Muito pouco se sabe sobre a fase de listeriose gastrointestinal, devido à falta de um modelo animal de pequeno porte que imita a doença humana. Este artigo descreve um novo modelo do rato para a transmissão oral de L. monocytogenes. Usando esse modelo, ratos alimentados com L. Listeria contaminado pão tem uma fase discreta de infecção gastrointestinal, seguido por diversos graus de disseminação sistémica em estirpes de ratinho susceptíveis (BALB / c / por / J) ou resistentes (C57BL / 6). Durante as últimas fases da infecção, a divulgação da vesícula biliar e do cérebro é observada. O modelo de listeriose de origem alimentar é altamente reprodutível, não requer conhecimentos especializados, e pode ser usado com uma grande variedade de isolados de bactérias e estirpes de ratinho de laboratório. Como tal, é o modelo ideal para estudar a virulência ambas as estratégias utilizadas por L. monocytogenes </in&gt; para promover a colonização intestinal, assim como a resposta do hospedeiro à alimentação infecção bacteriana ter invasivo.

L. monocytogenes colónias será visível em placas de L + BHI / L, após 36-48 horas de incubação a 37 ° C. As colónias têm, em forma de cúpula aparência branca suave e cremosa (Figura 1A). O crescimento será inibido durante a maior parte da microbiota intestinal, mas é comum ver algumas colónias que não são L. monocytogenes, particularmente quando plaqueamento intestino delgado ou cólon directamente sem diluição significativa (Figura 1B). Colónias sus...

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Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

Este artigo descreve um novo método para a infecção oral de camundongos, usando<em&gt; Listeria monocytogenes</emFood&gt; contaminados. O protocolo pode ser facilmente adaptado para utilização com outros agentes patogénicos bacterianos transmitidas pela comida.

Transmissão Oral de<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Em camundongos através de ingestão de alimentos contaminados

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the ...

Research

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