Name: oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food
Uploaded: 2013-05-06T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por becas de los Institutos Nacionales de Salud (AI079442 y AI091918) otorgados a SEFD

1. Preparación de medios de agar selectivos (BHI / L + G) para inhibir la microbiota intestinal <ol><li> Pesar 26 g de cerebro y corazón Infusion Agar (Difco), 7,5 g de LiCl y 5,0 g de glicina y colocar en un matraz de 1 litro. Añadir 500 ml de agua desionizada. </li><li> Calentar en un agitador magnético hasta que hierva el agar, agitando continuamente. Tome el frasco del fuego, deje que las burbujas se establecen brevemente y, a continuación, llevar de nuevo a hervir de nuevo. </li><li> . Autoclave durante 30 m...

<ol>
	<li>Becker, L. A., Evans, S. N., Hutkins, R. W., Benson, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sigmaB+in+adaptation+of+Listeria+monocytogenes+to+growth+at+low+temperature.">Role of sigmaB in adaptation of Listeria monocytogenes to growth at low temperature.</a> Journal of Bacteriology. 182, 7083-7087 (2000).</li><li>Neunlist, M. 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Dis. 35, 943-949 (2002).</li><li>Salamina, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+foodborne+outbreak+of+gastroenteritis+involving+Listeria+monocytogenes.">A foodborne outbreak of gastroenteritis involving Listeria monocytogenes.</a> Epidemiol. Infect. 117, 429-436 (1996).</li><li>Mead, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food-related+illness+and+death+in+the+United+States.">Food-related illness and death in the United States.</a> Emerging Infectious Diseases. 5, 607-625 (1999).</li><li>Wing, E. J., Gregory, S. 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Immunol. 19, 1075-1081 (2007).</li><li>Lecuit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+model+for+listeriosis:+role+of+internalin+in+crossing+the+intestinal+barrier.">A transgenic model for listeriosis: role of internalin in crossing the intestinal barrier.</a> Science. 292, 1722-1725 (2001).</li><li>Pron, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+study+of+the+intestinal+stage+of+listeriosis+in+a+rat+ligated+ileal+loop+system.">Comprehensive study of the intestinal stage of listeriosis in a rat ligated ileal loop system.</a> Infect. Immun. 66, 747-755 (1998).</li><li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design.">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129, 891-902 (2007).</li><li>Ghanem, B. o. u., N, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=InlA+promotes+dissemination+of+Listeria+monocytogenes+to+the+mesenteric+lymph+nodes+during+food+borne+infection+of+mice.">InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice.</a> PLoS Pathogens. , (2012).</li><li>Kowal, M., Buda-Lewandowska, D., Plytycz, B., Styrna, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Day/night+food+consumption+in+mice+is+strain+and+age-dependent.">Day/night food consumption in mice is strain and age-dependent.</a> Folia Biol. (Krakow). 50, 1-3 (2002).</li><li>Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes+-+from+saprophyte+to+intracellular+pathogen.">Listeria monocytogenes - from saprophyte to intracellular pathogen.</a> Nature reviews. Microbiology. 7, 623-628 (2009).</li><li>Camejo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+arsenal+of+virulence+factors+deployed+by+Listeria+monocytogenes+to+promote+its+cell+infection+cycle.">The arsenal of virulence factors deployed by Listeria monocytogenes to promote its cell infection cycle.</a> Virulence. 2, 379-394 (2011).</li></ol>

Ratones consanguíneos no son uniformemente receptiva a la alimentación en todo momento del día, y su disposición a comer el pan contaminado dependerán tanto de la cepa de tipo y la edad de los ratones 17. En nuestra experiencia, 6-9 semanas de edad ratones B6 son receptivos a la alimentación en cualquier momento del día, pero los ratones BALB no comen constantemente la pieza de pan a menos que se ofrece durante su ciclo oscuro. El ciclo de luz de la habitación se utiliza para albergar a los animales p...

Listeria monocytogenes son facultativos patógenos bacterianos intracelulares que causan las infecciones transmitidas por los alimentos en los seres humanos. Las bacterias son resistentes a muchos de los procesos que se utilizan para proteger nuestro suministro de alimentos, tales como el secado, la salazón, o 1,2 refrigeración y las infecciones son generalmente vinculados a los alimentos procesados ​​y &quot;listos para comer&quot; que no son calentados antes de su consumo . En varios brotes anteriores, la fuente de L. alimentos monocytogenes-contaminada se identificó, y el grupo restringido de los individuos expuestos se controló estrechamente 3-6. En estos ejemplos, la enfermedad clínica en individuos por lo demás sanos varió desde una leve gastroenteritis autolimitada a las infecciones intestinales y sistémicas más graves que requirieron hospitalización. L. infecciones monocytogenes en los individuos inmunocomprometidos, incluyendo tanto los recién nacidos y los ancianos, se han asociado con una alta tasa de mortalidad (25-30%), a pesar del tratamiento antibiótico <shasta&gt; 7,8. Poco se sabe sobre la dosis infecciosa de L. monocytogenes, o los factores del huésped que rigen la susceptibilidad a la infección después de la transmisión oral, debido principalmente a la falta de un modelo animal pequeño que recapitula esta amplia gama de los resultados de infección. El modelo más ampliamente utilizado de la listeriosis es la inoculación intravenosa (iv) de los ratones. El modelo IV es altamente reproducible, y ha sido extremadamente útil para estudiar las respuestas de células T, tanto naïve y de memoria durante la infección 9,10. El inconveniente del modelo IV es que se evita por completo la fase intestinal de la infección. Después de la transmisión transmitidas por los alimentos, la mucosa intestinal proporciona una barrera que, presumiblemente, se ralentiza y limita el número de bacterias que pueden difundir continuamente a los tejidos periféricos. Por el contrario, todo el inóculo se puede encontrar en el bazo y el hígado en cuestión de minutos de la administración iv, y esta gran bolo de organismos puede abrumar d inmune innatoefenses en estos tejidos. La infección oral de los ratones por sonda se utiliza con menor frecuencia, ya que las dosis grandes (10 9 -10 11 CFU) suelen ser necesarios para lograr la colonización intestinal 10. Además, la inoculación intragástrica (IG) con una aguja de alimentación no genera un período reproducible de infección gastrointestinal antes de la diseminación sistémica. Algunos laboratorios han informado de que L. monocytogenes alcanzan el bazo y el hígado dentro de 4-12 horas después de la infección (hpi), mientras que otros no mostraron diseminación sistémica hasta 48 hpi 11-15. Esta variación de laboratorio a laboratorio puede ser una consecuencia de la naturaleza invasiva de la inoculación ig, lo cual puede resultar en menor trauma en el revestimiento del esófago, y promover la circulación sanguínea invasión directa de las bacterias. Recientemente hemos desarrollado un modelo de ratón de la novela oral de L. infección monocytogenes que imita muy de cerca todas las fases de la enfermedad humana 16. La infección se produce cuando los ratones ingieren trozos de contaminado alimentos, un proceso que es no traumática, y no requiere de habilidades especiales por los investigadores de laboratorio. Durante un período discreto de tiempo (36-48 horas), L. monocytogenes reproducible sólo colonizan el tracto gastrointestinal, permitiendo de este modo la investigación de los mecanismos utilizados por patógena Listeria a trasladar a través de la mucosa intestinal y difundir a los tejidos periféricos. Es importante destacar que, el modelo se puede utilizar para estudiar las diferencias en la resistencia innata huésped a la infección. En un estudio anterior, hemos demostrado que BALB / c / A / J ratones fueron altamente susceptibles a la listeriosis transmitida por los alimentos, con la replicación exponencial de L. monocytogenes que ocurren en el intestino, el bazo, el hígado, la vesícula biliar y 16. En contraste, los ratones C57BL / 6 fueron resistentes a la infección transmitida por alimentos, con sólo la colonización transitoria de L. monocytogenes se producen en cada uno de estos tejidos. Una característica adicional del modelo transmitidas por los alimentos que imita la enfermedad humana es que la difusión naturalesal cerebro se produjo durante las últimas etapas de la infección (dpi 5-7).

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Brain Heart Infusion Agar</td>
 <td>Difco</td>
 <td>BD-241830</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lithium chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L9650</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glycine</td>
 <td>Omnipur</td>
 <td>4840</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>15575-038</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DTT</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>D5545</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase, type IV</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS004089</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DNAse I</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS002007</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Diff-Quik</td>
 <td>Dade-Behring</td>
 <td>B4132-1A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PowerGen 1000 homogenizer</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>14-261-06</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>stainless steel type 304 mesh #80</td>
 <td>Small Parts, Inc.</td>
 <td>CX-0080-C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cytospin</td>
 <td>Statspin</td>
 <td>M801-22</td>
 <td></td>
 </tr>
	 </tbody>
 </table>

oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food

L. monocytogenes son facultativos patógenos bacterianos intracelulares que causan las infecciones transmitidas por los alimentos en los seres humanos. Muy poco se sabe acerca de la fase gastrointestinal de listeriosis debido a la falta de un modelo animal pequeño que imita la enfermedad humana. Este documento describe un modelo de ratón novedoso para la transmisión oral de L. monocytogenes. Usando este modelo, los ratones alimentados con L. monocytogenes-contaminada pan tiene una fase discreta de infección gastrointestinal, seguido por diversos grados de propagación sistémica en cepas de ratones susceptibles (BALB / c / Por / J) o resistentes (C57BL / 6). Durante las últimas etapas de la infección, se observa la difusión de la vesícula biliar y el cerebro. El modelo transmitidas por los alimentos de la listeriosis es altamente reproducible, no requiere habilidades especializadas, y se puede utilizar con una amplia variedad de cepas bacterianas y las cepas de ratón de laboratorio. Como tal, es el modelo ideal para estudiar tanto las estrategias de virulencia utilizados por L. monocytogenes </em&gt; para promover la colonización intestinal, así como la respuesta del huésped a la alimentación dado infección bacteriana invasiva.

L. monocytogenes colonias serán visibles en BHI / L + G placas después de 36 a 48 h de incubación a 37 ° C. Las colonias tienen un aspecto liso, con forma de cúpula de color blanco cremoso (Figura 1A). El crecimiento se inhibe durante la mayoría de la microbiota intestinal, pero es común para ver algunas colonias que no son L. monocytogenes, particularmente cuando placas intestino delgado o el colon directamente sin dilución significativa (Figura 1B). Colonias ...

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Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

Este documento describe un nuevo método para la infección oral de ratones utilizando<em&gt; Listeria monocytogenes</emAlimentación&gt; contaminados. El protocolo puede adaptarse fácilmente para su uso con alimentos otros patógenos bacterianos transmitidas.

La transmisión oral de<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; En ratones a través de la ingestión de alimentos contaminados

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the ...

Research

JoVE Journal

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