Name: isolation, processing and analysis of murine gingival cells
Uploaded: 2013-07-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells at JoVE.com

وأيد هذا البحث من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم إسرائيل (رقم 1418/11) لآه و(رقم 1933-1912) إلى AW، ومؤسسة الإسرائيلية الألمانية للمحققين الشباب (GIF يونغ) إلى الخبر، وأنا د. . صندوق الهبات للبحوث Cabakoff في مدرسة الجامعة العبرية هداسا طب الأسنان لآه وAW.

إعداد مقدما: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PBS + 2٪ FCS </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PBS + 2٪ FCS مع 2 ملغ / مل من كولاجيناز من النوع الثاني و 1 ملغ / مل من الدناز النوع الأول (1 مل لكل عينة) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم الأدوات الجراحية </li><li style=";text-align:right;direct...

<ol>
	<li>Arizon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Langerhans+cells+down-regulate+inflammation-driven+alveolar+bone+loss.">Langerhans cells down-regulate inflammation-driven alveolar bone loss.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 7043-7048 (2012).</li><li>Listgarten, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+periodontitis.">Pathogenesis of periodontitis.</a> J. Clin. Periodontol. 13, 418-430 (1986).</li><li>Kinane, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Causation+and+pathogenesis+of+periodontal+disease.">Causation and pathogenesis of periodontal disease.</a> Periodontol. 25, 8-20 (2000).</li><li>Jotwani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+dendritic+cells+infiltrate+the+T+cell-rich+region+of+oral+mucosa+in+chronic+periodontitis:+in+situ,+in+vivo,+and+in+vitro+studies.">Mature dendritic cells infiltrate the T cell-rich region of oral mucosa in chronic periodontitis: in situ, in vivo, and in vitro studies.</a> J. Immunol. 167, 4693-4700 (2001).</li><li>Graves, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+antagonists+inhibit+the+progression+of+inflammatory+cell+infiltration+toward+alveolar+bone+in+experimental+periodontitis.">Interleukin-1 and tumor necrosis factor antagonists inhibit the progression of inflammatory cell infiltration toward alveolar bone in experimental periodontitis.</a> J. Periodontol. 69, 1419-1425 (1998).</li><li>Kabashima, H., Yoneda, M., Nagata, K., Hirofuji, T., Maeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+presence+of+chemokine+(MCP-1,+MIP-1alpha,+MIP-1beta,+IP-10,+RANTES)-positive+cells+and+chemokine+receptor+(CCR5,+CXCR3)-positive+cells+in+inflamed+human+gingival+tissues.">The presence of chemokine (MCP-1, MIP-1alpha, MIP-1beta, IP-10, RANTES)-positive cells and chemokine receptor (CCR5, CXCR3)-positive cells in inflamed human gingival tissues.</a> Cytokine. 20, 70-77 (2002).</li><li>Moughal, N. A., Adonogianaki, E., Kinane, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Langerhans+cell+dynamics+in+human+gingiva+during+experimentally+induced+inflammation.">Langerhans cell dynamics in human gingiva during experimentally induced inflammation.</a> J. Biol. Buccale. 20, 163-167 (1992).</li><li>Cochran, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+bone+loss+in+periodontal+disease.">Inflammation and bone loss in periodontal disease.</a> J. Periodontol. 79, 1569-1576 (2008).</li><li>Taubman, M. A., Valverde, P., Han, X., Kawai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+response:+the+key+to+bone+resorption+in+periodontal+disease.">Immune response: the key to bone resorption in periodontal disease.</a> J. Periodontol. 76, 2033-2041 (2005).</li><li>Graves, D. T., Kang, J., Andriankaja, O., Wada, K., Rossa, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+host-bacteria+interactions+involved+in+periodontitis.">Animal models to study host-bacteria interactions involved in periodontitis.</a> Front Oral Biol. 15, 117-132 (2012).</li></ol>

الفك العلوي أنسجة اللثة الحصول عليها من ماوس واحدة كافية لتحليل المجموعات الفرعية من السكان من الخلايا الليمفاوية T و B، وكذلك قدرتها على التعبير عن جزيئات الخلية وبين الخلايا كما وصفنا سابقا 1. ومع ذلك، إذا السكان الخلية نادرة ذات أهمية (على سبيل المثال ن)، فمن ?...

اللثة هي الأنسجة الرخوة المحيطة عنق الرحم جزء من الأسنان ويغطي عملية السنخية (الشكل 1). اللثة هو نوع من الغشاء المخاطي المضغ التي يمكن تقسيمها إلى مزيد من ظهارة الغشاء المخاطي والنسيج الضام (المعروف أيضا باسم مخاطية أو الصفيحة المخصوصة). بنية التشريحية للاللثة والأسنان المجاورة يسمح البكتيريا للإقامة وتطوير لوحة (بيوفيلم) التي تتحدى باستمرار الجهاز المناعي المحلية. ونتيجة لذلك، يطور الاستجابة الالتهابية في اللثة، والتي في ظروف معينة يصبح المدمرة - وهي حالة تسمى أمراض اللثة 2. في الأساس، ويمكن تقسيم أمراض اللثة البلاك التي يسببها التهاب اللثة والتهاب اللثة إلى. التهاب اللثة يمثل حالة عكسها من الاستجابة الالتهابية المحلية أن يقتصر على اللثة. التهاب اللثة، من ناحية أخرى، هو عملية تدميرية لا رجعة فيه جهاز مرفق (العظم السنخي، اللثةيتم تدمير الرباط، الملاط واللثة) 3. واقترح اللثة لخدمة المواقع على حد سواء المستجيب كما وحثي خلال أمراض اللثة 4. وقد اقترحت الدراسات أن الإنسان استجابة لوحة الأسنان، وخلايا المستجيب المناعي والجزيئات تسللت بشكل حيوي أو مغادرة اللثة 5-7. وقد تبين هذا النشاط لتلعب دورا رئيسيا في تدمير اللثة 8،9. في حين البيانات التي تولدها هذه الدراسات قدمت معلومات قيمة بخصوص هذه العملية المرضية، والعمل مع الأنسجة البشرية تمتلك القيود الأخلاقية والتقنية والتجريبية الكبرى. تطوير نماذج تجريبية يسمح التجريب السبب والنتيجة عبر استخدام الفئران المعدلة وراثيا والتدخلات في الجسم الحي 10. ونتيجة لذلك، علمنا على الآليات التي تشارك في أمراض اللثة زيادة كبيرة خلال العقدين الماضيين. وحتى مع ذلك، ونظرا لتعقيد أمراض اللثة، وهناكمناقشة جارية بشأن طبيعة الاستجابة المناعية المحلية تسهيل تدمير الأنسجة. هناك أيضا نقص في فهمنا على وظيفة الخلايا المناعية المركزية في اللثة أثناء أمراض اللثة. وبالتالي فمن الضروري دراسة الأحداث التهابات المرضية التي تحدث في النسيج المستهدف لهذا المرض، واللثة.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Comments (optional)</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Company</td>
 <td>Name of the reagent</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>CLS-2</td>
 <td>Worthington Biochemical Corp.</td>
 <td>Collagenase Type II</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>DN25-1G</td>
 <td>SIGMA</td>
 <td>DNAse I</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>E6758-100G</td>
 <td>SIGMA</td>
 <td>EDTA</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>D8537</td>
 <td>SIGMA</td>
 <td>Dulbecco's PBS</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heat Inactivated</td>
 <td>04-121-1</td>
 <td>Biological Industries</td>
 <td>Fetal Bovine Serum </td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>FPE-204-500</td>
 <td>Jet Biofil</td>
 <td>Vacuum-Driven Filter</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>352052</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>5 ml Polystyrene Round-Bottom Tube</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>93070</td>
 <td>SPL Lifesciences</td>
 <td>Cell Strainer 70 &mu;m</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>153066</td>
 <td>NUNC</td>
 <td>Tissue Culture Dish 35&times;10 mm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>554714</td>
 <td>BD</td>
 <td>BD Cytofix/Cytoperm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone N418</td>
 <td>117305</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD11c antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 104</td>
 <td>109819</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD45.2 antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone GK1.5</td>
 <td>100413</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD4 antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 53-6.7</td>
 <td>100733</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD8a antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 17A2</td>
 <td>100214</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD3 antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone G8.8</td>
 <td>118219</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD326 (Ep-CAM) antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 929F3.01</td>
 <td>DDX0362D</td>
 <td>Imgenex</td>
 <td>Anti-mouse CD207 (Langerin) antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 39-10-8</td>
 <td>115010</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse I-Ad (MHC-II) antobody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>LSR II Flow Cytometer</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Tree Star</td>
 <td>FlowJo Software v 7.6.5</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolation, processing and analysis of murine gingival cells

لقد قمنا بتطوير تقنية لعزل بدقة ومعالجة الأنسجة اللثوية الفئران لالتدفق الخلوي والدراسات الجزيئية. اللثة هي النسيج فريدة وهامة لدراسة آليات المناعة لأنها تشارك في الاستجابة المناعية المضيف ضد بيوفيلم عن طريق الفم التي قد تسبب أمراض اللثة. وعلاوة على ذلك، وعلى مقربة من اللثة إلى أنسجة العظم السنخي تمكن تدرس أيضا إعادة تشكيل العظام في ظل ظروف التهابات. لدينا وسيلة تعطي كمية كبيرة من الخلايا المناعية التي تتيح تحليل حتى السكان الخلية نادرة مثل خلايا لانغرهانس وخلايا T التنظيمية كما أثبتنا سابقا 1. الفئران التي تستخدم لدراسة الاستجابات المناعية المحلية المعنية في فقدان العظم السنخي خلال أمراض اللثة هو مفيد بسبب توافر مختلف الأدوات المناعية والتجريبية. ومع ذلك، نظرا لصغر حجم وغير مريح نسبيا الوصول إلى اللثة الفئران، تجنب العديد من الدراسات دراسة ثيق الحرجة في الأنسجة. الطريقة الموضحة في هذا العمل يمكن أن تسهل تحليل اللثة، التي نأمل زيادة التفاهم لدينا على الجهاز المناعي عن طريق الفم ودورها خلال أمراض اللثة.

يتم عرض أمثلة على تحليل التدفق الخلوي في خلايا اللثة. تم تشغيل خلايا اللثة المجمعة من 2 فئران في LSR الثاني تدفق عداد الكريات وتحليلها باستخدام FlowJo البرمجيات. أثبتت الشكل 3A توزيع خلايا اللثة من الفئران السذاجة في الجانب مبعثر (SSC) مقابل مبعثر إلى الأمام (FSC) مؤام...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells at JoVE.com

Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells

توضح هذه الدراسة تقنية فعالة لعزل ومعالجة أنسجة اللثة من تجويف الفم الماوس من أجل إنتاج ثقافة وحيدة الخلية. الخلايا الناتجة يمكن استخدامها كذلك لتحليل التدفق الخلوي والدراسات الجزيئية.

العزلة، معالجة وتحليل خلايا اللثة الفئران

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

تحليل التدفق الخلوي للخلايا المناعية وفي الفئران Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

العزلة، تحديد الهوية، وتنقية خلايا الفئران التوتة طلائي

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

عزل خلايا الفئران العقدة الليمفاوية اللحمية

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

عزل الفئران البريتوني الضامة لتنفيذ جين تحليل التعبير عند تول مثل مستقبلات تحفيز

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من الخلايا المناعية من الدماغ الدماغية ماوس

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من-التسلل الورم خلايا الدم المحيطي وحيدة النواة

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

عزل وتوصيف والفحص الوظيفي لشبكة خلية اللثة المناعي

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

العزلة وتنشيط الخلايا الليمفاوية الفئران

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

العزلة وتدفق Cytometric تحليل الإنسان باطن عنق الرحم غاما دلتا الخلايا التائية

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

الهضم الكبد مورين لتحليل تدفق سيتوميتريك اللمفاوية خلايا غشائي

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...