Name: isolation, processing and analysis of murine gingival cells
Uploaded: 2013-07-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells at JoVE.com

Bu araştırma AW, AHH genç araştırmacılar (GIF Young) için Alman İsrail Vakfı ve Dr ben İsrail Bilim AHH için Vakfı (No 1418/11) ve (No 1933/12) hibe tarafından desteklenmiştir . AHH ve AW için Diş Hekimliği İbrani Üniversitesi-Hadassah Okulu&#39;nda Cabakoff Araştırma Vakfı Fonu.

Önceden hazırlayın: <ul><li> PBS +% 2 FCS </li><li> Kollajenaz tip II ve DNAz Tip I, 1 mg / ml (örnek başına 1 mi) içinde 2 mg / ml &#39;si ile PBS +% 2 FCS </li><li> Steril cerrahi aletler </li><li> 0.5 M EDTA </li></ul> 1. Üst Dişeti Eksizyon Tekniği <ol><li> Onaylı IACUC rehberlik kullanarak fareler Euthanize. </li><li> Yanaklar ve keskin / künt düz makas ile mandibula ramus dahil olmak üzere ağız boşluğunun her iki kesin. </li><li> Çene aşağı çekin. </li><li> Stan...

<ol>
	<li>Arizon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Langerhans+cells+down-regulate+inflammation-driven+alveolar+bone+loss.">Langerhans cells down-regulate inflammation-driven alveolar bone loss.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 7043-7048 (2012).</li><li>Listgarten, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+periodontitis.">Pathogenesis of periodontitis.</a> J. Clin. Periodontol. 13, 418-430 (1986).</li><li>Kinane, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Causation+and+pathogenesis+of+periodontal+disease.">Causation and pathogenesis of periodontal disease.</a> Periodontol. 25, 8-20 (2000).</li><li>Jotwani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+dendritic+cells+infiltrate+the+T+cell-rich+region+of+oral+mucosa+in+chronic+periodontitis:+in+situ,+in+vivo,+and+in+vitro+studies.">Mature dendritic cells infiltrate the T cell-rich region of oral mucosa in chronic periodontitis: in situ, in vivo, and in vitro studies.</a> J. Immunol. 167, 4693-4700 (2001).</li><li>Graves, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+antagonists+inhibit+the+progression+of+inflammatory+cell+infiltration+toward+alveolar+bone+in+experimental+periodontitis.">Interleukin-1 and tumor necrosis factor antagonists inhibit the progression of inflammatory cell infiltration toward alveolar bone in experimental periodontitis.</a> J. Periodontol. 69, 1419-1425 (1998).</li><li>Kabashima, H., Yoneda, M., Nagata, K., Hirofuji, T., Maeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+presence+of+chemokine+(MCP-1,+MIP-1alpha,+MIP-1beta,+IP-10,+RANTES)-positive+cells+and+chemokine+receptor+(CCR5,+CXCR3)-positive+cells+in+inflamed+human+gingival+tissues.">The presence of chemokine (MCP-1, MIP-1alpha, MIP-1beta, IP-10, RANTES)-positive cells and chemokine receptor (CCR5, CXCR3)-positive cells in inflamed human gingival tissues.</a> Cytokine. 20, 70-77 (2002).</li><li>Moughal, N. A., Adonogianaki, E., Kinane, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Langerhans+cell+dynamics+in+human+gingiva+during+experimentally+induced+inflammation.">Langerhans cell dynamics in human gingiva during experimentally induced inflammation.</a> J. Biol. Buccale. 20, 163-167 (1992).</li><li>Cochran, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+bone+loss+in+periodontal+disease.">Inflammation and bone loss in periodontal disease.</a> J. Periodontol. 79, 1569-1576 (2008).</li><li>Taubman, M. A., Valverde, P., Han, X., Kawai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+response:+the+key+to+bone+resorption+in+periodontal+disease.">Immune response: the key to bone resorption in periodontal disease.</a> J. Periodontol. 76, 2033-2041 (2005).</li><li>Graves, D. T., Kang, J., Andriankaja, O., Wada, K., Rossa, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+to+study+host-bacteria+interactions+involved+in+periodontitis.">Animal models to study host-bacteria interactions involved in periodontitis.</a> Front Oral Biol. 15, 117-132 (2012).</li></ol>

Tek bir fareden elde edilen üst çeneye gingival dokular, daha önce tarif edildiği gibi 1 hücre dışı ve hücre içi molekülleri ifade etmek için T ve B lenfositlerinin alt gruplar, hem de bunların özelliği analiz etmek için yeterlidir. Bununla birlikte, eğer nadir hücre popülasyonlarının (örneğin DC için) ilgilendiren, 2-3 fareler havuzu dokulara önerilir. Unutmayın ki, tercih, bu mümkündür sonra damak ve diş eti dokuları ve tüketim diş eti (adım 1.8-1.9 bir değişiklik) her ik...

Gingiva diş serviks kısmı çevreleyen yumuşak doku ve alveol (Şekil 1) kapsar. Dişeti daha mukozal epitel ve bağ dokusu (aynı zamanda submukozaya ya da lamina propria olarak da bilinir) ayrılabilir çiğneme mukoza türüdür. Dişeti ve komşu dişlerin anatomik yapısı bakteriler sürekli yerel bağışıklık sistemi meydan plak (biyofilm) ikamet ve geliştirmek için olanak sağlar. Periodontal hastalıkların 2 olarak adlandırılan bir durum - Sonuç olarak, enflamatuar yanıt, bazı durumlarda zararlı olur dişeti, gelişir. Temel olarak, plak indüklenen Periodontal patolojilerin gingivitis ve periodontitis ayrılabilir. Dişeti iltihabı dişeti ile sınırlı yerel inflamatuar yanıt bir geri durumu temsil eder. Periodontitis, diğer taraftan, geri dönüşü olmayan bir yıkıcı bir süreç olduğu bağlanma cihaz (alveol kemiği, periodontalbağ, sement ve diş eti) 3 yok edilir. Dişeti periodontal hastalıklar 4 sırasında olduğu gibi efektör ve endüktif her iki site hizmet etmek için önerilmiştir. İnsan çalışmalar dental plak yanıt olarak, immün efektör hücreleri ve molekülleri dinamik sızmış veya kalkış dişeti 5-7 olduğunu ileri sürmüşlerdir. Bu aktivite, periodontal yıkım 8,9 önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir. Insan dokuları ile çalışan, bu patolojik sürecin ilgili değerli bilgiler sağlanan çalışmalar tarafından oluşturulan veri büyük, etik, teknik ve deneysel sınırlamalar sahip ise. Transgenik fareler istihdam yoluyla ve in vivo müdahaleler 10 neden-sonuç deneylerine izin deneysel modellerin geliştirilmesi. Sonuç olarak, periodontal hastalık ile ilgili mekanizmalar bilgimizi son yirmi yılda önemli ölçüde artmıştır. Buna rağmen, periodontal hastalıkların karmaşıklığı nedeniyle, oradadoku yıkımı kolaylaştıran yerel immün yanıt niteliği ile ilgili devam eden bir tartışma. Periodontal hastalıklar sırasında dişeti merkezi bağışıklık hücrelerinin işlevini anlayışımızda eksikliği vardır. Bu hastalık, gingivanın hedef dokuda oluşan patolojik inflamatuar etkinliklerini inceleme amaçlı olarak bu nedenle çok önemlidir.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Comments (optional)</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Company</td>
 <td>Name of the reagent</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>CLS-2</td>
 <td>Worthington Biochemical Corp.</td>
 <td>Collagenase Type II</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>DN25-1G</td>
 <td>SIGMA</td>
 <td>DNAse I</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>E6758-100G</td>
 <td>SIGMA</td>
 <td>EDTA</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>D8537</td>
 <td>SIGMA</td>
 <td>Dulbecco's PBS</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heat Inactivated</td>
 <td>04-121-1</td>
 <td>Biological Industries</td>
 <td>Fetal Bovine Serum </td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>FPE-204-500</td>
 <td>Jet Biofil</td>
 <td>Vacuum-Driven Filter</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>352052</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>5 ml Polystyrene Round-Bottom Tube</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>93070</td>
 <td>SPL Lifesciences</td>
 <td>Cell Strainer 70 &mu;m</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>153066</td>
 <td>NUNC</td>
 <td>Tissue Culture Dish 35&times;10 mm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td>554714</td>
 <td>BD</td>
 <td>BD Cytofix/Cytoperm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone N418</td>
 <td>117305</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD11c antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 104</td>
 <td>109819</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD45.2 antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone GK1.5</td>
 <td>100413</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD4 antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 53-6.7</td>
 <td>100733</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD8a antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 17A2</td>
 <td>100214</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD3 antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone G8.8</td>
 <td>118219</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse CD326 (Ep-CAM) antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 929F3.01</td>
 <td>DDX0362D</td>
 <td>Imgenex</td>
 <td>Anti-mouse CD207 (Langerin) antibody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Clone 39-10-8</td>
 <td>115010</td>
 <td>Biolegend</td>
 <td>Anti-mouse I-Ad (MHC-II) antobody</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>LSR II Flow Cytometer</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Tree Star</td>
 <td>FlowJo Software v 7.6.5</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolation, processing and analysis of murine gingival cells

Biz tam olarak izole ve akım sitometri ve moleküler çalışmalar için fare dişeti doku işlemek için bir teknik geliştirdik. Dişeti bu periodontal hastalıklara neden olabilir sözlü biyofilm karşı konağın immün yanıtı yer olduğu için bağışıklık mekanizmaları incelemek için eşsiz ve önemli bir dokudur. Ayrıca, alveoler kemik dokusu için dişetinin yakın da enflamatuvar durumlarda kemik yeniden eğitim sağlayan. Bizim yöntemi daha önce 1 gösterdiği gibi Langerhans hücreleri ve T düzenleyici hücreleri gibi daha nadir hücre popülasyonlarının analizi sağlayan bağışıklık hücrelerinin büyük miktarda verir. Periodontal hastalıklar sırasında alveol kemik kaybı dahil yerel immün yanıtları incelemek için istihdam fareler nedeniyle çeşitli immünolojik ve deneysel araçların durumu avantajlıdır. Bununla birlikte, kendi küçük boyutu ve fare dişeti için nispeten uygunsuz erişim nedeniyle, birçok çalışma thi incelenmesi kaçınılmalıdırs kritik doku. Bu çalışmada açıklanan yöntemi umarım periodontal hastalıklar sırasında sözlü bağışıklık sistemi ve rolünü bizim understating artacak dişeti analizi, kolaylaştırabilir.

Dişeti hücreleri üzerinde akım sitometri analizi örnekleri sunulmaktadır. 2 farelerin toplanmış Dişeti hücreleri bir LSR II akış sitometresinde çalıştırın ve FlowJo yazılımı kullanılarak analiz edildi. Şekil 3A bir yan dağılım (SSC) karşı ileri dağılım (FSC) arsa içinde naif farelerden alınan dişeti hücrelerinin dağılımı göstermiştir. Tespit etmek Ayırıcı stratejisi, (i) lenfositler (ii) monositler / dendritik hücreler ve (iii) granülosit belirtilir. Karşıl...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells at JoVE.com

Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells

Bu çalışma, bir tek hücre kültürü üretmek için fare ağız boşluğundan gingival dokular izole etmek ve işlemek için etkili bir yöntem açıklanır. Ortaya çıkan hücreler bir başka akış sitometri analizi ve klinik çalışmalar için kullanılabilir.

Murin Dişeti Hücre İzolasyonu, İşleme ve Analiz

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Bağışıklık Hücreleri murin aorta içinde Sitometrisi Analizi

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

İzolasyon, tanımlama ve Murin Thymic Epitel Hücreleri saflaştırılması

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Kemirgen Lenf Düğümü Stromal Hücrelerinin İzolasyonu

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Fare Periton Makrofagların izolasyonu Toll-benzeri reseptörler Uyarım üzerine Gen İfadesi Analizi Yapacak

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

İskemik Fare Beyin gelen Bağışıklık Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

İzolasyon ve Glioma-sızmakta periferik kan mononükleer hücrelerinin Akışı Sitometrik Analizi

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

İzolasyon, Karakterizasyonu ve Dişeti Bağışıklık Hücre Ağı Fonksiyonel Sınav

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

İzolasyon ve murin lenfositlerin aktivasyonu

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

İnsan Endoservikal Gamma Delta T Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

Lenfatik endotel hücreleri akış sitometrik çözümlenmesi için fare karaciğer sindirim

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...