Name: rapid high throughput amylose determination in freeze dried potato tuber samples
Uploaded: 2013-10-14T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid High Throughput Amylose Determination in Freeze Dried Potato Tuber Samples at JoVE.com

De financiering van dit onderzoek werd mede verzorgd door de USDA-ARS Research Associate Program en de USDA Crop Kiemplasma Comite.

1. Amylose Bepaling van Potato knolzetmeel <ol><li> Schil en snijd verse knollen in kleine blokjes. </li><li> Plaats aardappelblokjes in kleine bruine zakken en bewaar overnacht bij -80 ° C. </li><li> Transfer aardappelblokjes aan nylon zakken en voor vriesdrogen. </li><li> Na gevriesdroogde, slijp de aardappel monster tot poeder met behulp van vijzel en stamper of een Wiley Mill. </li><li> In een 50 ml buis, voeg 20-30 mg van de gevriesdroogde, gemalen knol monster. </li><li> Bereid een oplossing van 45% (w / v) per...

<ol>
	<li>Composition Hoover, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=molecular+structure,+and+physicochemical+properties+of+tuber+and+root+starches:+a+review.">molecular structure, and physicochemical properties of tuber and root starches: a review.</a> Carbohydr. 45 (3), 253-267 (2001).</li><li>Bertoft, E., Blennow, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+Potato+Starch.">Structure of Potato Starch.</a> Advances in Potato Chemistry and Technology. , 83-98 (2009).</li><li>Campbell, M. R., Yeager, H., Abdubek, N., Pollak, L., Glover, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+methods+for+amylose+screening+in+maize+starches+from+exotic+backgrounds.">Comparison of methods for amylose screening in maize starches from exotic backgrounds.</a> Cereal Chem. 79, 317-321 (2002).</li><li>Zhu, T., Jackson, D. S., Wehling, R. L., Geera, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+amylose+determination+methods+and+the+development+of+a+dual+wavelength+iodine+binding+technique.">Comparison of amylose determination methods and the development of a dual wavelength iodine binding technique.</a> Cereal Chem. 85, 51-58 (2008).</li><li>Hovenkamp-Hermelink, J., Devries, J., Adamse, P., Jacobsen, E., Witholt, B., Feenstra, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+estimation+of+the+amylose+amylopectin+ratio+in+small+amounts+of+tuber+and+leaf+tissue+of+the+potato.">Rapid estimation of the amylose amylopectin ratio in small amounts of tuber and leaf tissue of the potato.</a> Potato Res. 31, 241-246 (1988).</li><li>Shannon, J. C., Garwood, D. L., Boyer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+and+Physiology+of+Starch+Development.">Genetics and Physiology of Starch Development.</a> Starch. , 23-82 (2009).</li><li>Haase, N. U., Plate, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+potato+starch+in+relation+to+varieties+and+environmental+factors.">Properties of potato starch in relation to varieties and environmental factors.</a> St&#228;rke. 48 (5), 167-171 (1996).</li><li>Johnston, F. B., Urbas, B., Khanzada, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+storage+on+the+size+distribution+and+amylose/amylopectin+ratio+in+potato+starch+granules.">Effect of storage on the size distribution and amylose/amylopectin ratio in potato starch granules.</a> Am. Pot. J. 45, 315-321 (1968).</li><li>Gibson, T. S., Solah, V. A., McCleary, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+procedure+to+measure+amylose+in+cereal+starches+and+flours+with+concanavalin+A.">A procedure to measure amylose in cereal starches and flours with concanavalin A.</a> J. Cereal Sci. 25 (2), 111-119 (1997).</li><li>Sun, S., Matheson, N., Yun, S. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+amylose+content+of+starches+after+precipitation+of+amylopectin+by+concanavalin+A.">Estimation of amylose content of starches after precipitation of amylopectin by concanavalin A.</a> Starch. 42, 302-305 (1990).</li></ol>

Zetmeelgehalte in aardappelknollen varieert doorgaans 20-35% 7,8. Als de meeste waarden buiten dit bereik, deze mogelijke fouten: 1) ruwe gegevens werden gebruikt in plaats van blanked gegevens voor de bouw van de amylose / amylopectine standaard curve 2) ruwe gegevens werden gebruikt in plaats van blanked gegevens voor de bepaling van de amylose / amylopectine-verhoudingen van de aardappel monsters, of 3) het water dat wordt gebruikt voor de analyse was niet zuiver genoeg. We hebben gemerkt dat met gedestill...

Ongeveer 80% van het versgewicht van een aardappel water, vrijwel alle resterende droge stof zetmeel 1. Het merendeel van het zetmeel (70%) bestaat uit amylopectine, terwijl de rest amylose. De verhouding tussen amylose en amylopectine is de belangrijkste eigenschap die de fysische eigenschappen van zetmeel. Amylose is een lineair alfa 1-4 glucose-keten, terwijl amylopectine een lineair alfa 1-4 ketting met alpha 1-6 vertakkingen 2. Werkwijzen zoals jodium binden, differentiële scanning calorimetrie (DSC), hoge prestatie grootte-uitsluitingschromatografie (HPSEC) en concanavaline A interacties ontwikkeld voor bepaling zetmeel in verschillende gewassoorten 3,4. Elk protocol vereist speciale vaardigheden en apparatuur, waardoor het moeilijk te schalen talrijke monsters te kwantificeren tegelijk. De methode die we hier presenteren is een aangepaste protocol van Hovenkamp-Hermelink et al.. 5 dat is een dubbele golflengte jodium bindenmethode van gekleurd zetmeelkorrels. De voordelen van deze methode versus andere amylose omvatten de bepaling van onverwerkt zetmeel zonder zuiveren en het gebruik van de dubbele golflengte systeem de nauwkeurigheid van de werkwijze 4,6 te verhogen.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td> Reagents</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Amylose </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>859656</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Amylopectin </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A8515</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Perchloric Acid 60%</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>311413</td>
 <td>Very hazardous to skin and eyes</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iodine</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>23214TD</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Potassium iodide</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>08625JE</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Plate Reader</td>
 <td>Bio Tek</td>
 <td>ELx800</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

rapid high throughput amylose determination in freeze dried potato tuber samples

Dit protocol beschrijft een hoge doorverbonden colorimetrische methode die is gebaseerd op de vorming van een complex tussen jodium en ketens van glucose moleculen in zetmeel. Jodium vormt complexen met zowel amylose en lange ketens binnen amylopectine. Na de toevoeging van jodium aan een zetmeelmonster, de maximale absorptie van amylose en amylopectine optreedt bij 620 en 550 nm respectievelijk. De amylose / amylopectine verhouding kan worden geschat uit de verhouding tussen de 620 en 550 nm absorptiewaarden en ze te vergelijken met een standaard curve waarbij bepaalde bekende concentraties zijn uitgezet tegen absorptiewaarden. Deze hoge throughput, goedkope methode betrouwbaar en reproduceerbaar, waardoor de evaluatie van grote populaties van aardappel klonen.

De standaardkromme geconstrueerd uit gestanst gegevens van verschillende amylose / amylopectine concentratie oplossingen toont bij benadering absorptie verhoudingen variërend 0,7-1,6 (tabel 1). Een lineaire regressie trendlijn van deze data wordt later gebruikt voor het afleiden van amylose-gehalte in gevriesdroogde aardappel monsters (Figuur 1). De plantaardige productie-omgeving heeft een aantal gevolgen voor de amylose-gehalte in de aardappelknol 7....

Watch this Scientific Journal Video about Rapid High Throughput Amylose Determination in Freeze Dried Potato Tuber Samples at JoVE.com

Rapid High Throughput Amylose Determination in Freeze Dried Potato Tuber Samples

Rapid High Throughput Amylose Bepaling in gevriesdroogde aardappelknol Samples

This protocol describes a high through put colorimetric method that relies on the formation of a complex between iodine and chains of glucose molecules in ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Rapid Colorimetric Assays to Qualitatively Distinguish RNA and DNA in Biomolecular Samples

Snelle Colorimetrische Testen om kwalitatief onderscheid RNA en DNA in Biomoleculaire Monsters

Biochemical experimentation generally requires accurate knowledge, at an early stage, of the nucleic acid, protein, and other biomolecular components in ...

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Ongerichte Metabolomics uit biologische grondstoffen gebruiken UltraPerformance Liquid Chromatography-hoge resolutie massaspectrometrie (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

A High-throughput-compatible FRET-based Platform for Identification and Characterization of Botulinum Neurotoxin Light Chain Modulators

Botulinum neurotoxin (BoNT) is a potent and potentially lethal bacterial toxin that binds to host motor neurons, is internalized into the cell, and ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Radioactief en kwantificering van cellulaire niveaus van fosfoinositiden door High Performance Liquid Chromatography-gekoppeld Flow Scintillation

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Rapid High-throughput Species Identification of Botanical Material Using Direct Analysis in Real Time High Resolution Mass Spectrometry

Rapid High-throughput Species Identificatie van Botanical Material gebruik van Direct Analysis in Real Time met hoge resolutie massaspectrometrie

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, ...

Extraction and Purification of Polyphenols from Freeze-dried Berry Powder for the Treatment of Vascular Smooth Muscle Cells In Vitro

Extraction and Purification of Polyphenols from Freeze-dried Berry Powder for the Treatment of Vascular Smooth Muscle Cells In Vitro

Extractie en zuivering van polyfenolen uit bevroren gedroogde bessenpoeder voor de behandeling van vasculaire gladde spiercellen<em&gt; In Vitro</em

Epidemiological studies indicate that increased flavonoid intake correlates with decreased mortality due to cardiovascular diseases (CVD) in the United ...

Disentangling High Strength Copolymer Aramid Fibers to Enable the Determination of Their Mechanical Properties

Ontwarren hoge sterkte copolymeer aramidevezels om de bepaling van hun mechanische eigenschappen

Traditionally, soft body armor has been made from poly(p-phenylene terephthalamide) (PPTA) and ultra-high molecular weight polyethylene. However, to ...

High-throughput and Comprehensive Drug Surveillance Using Multisegment Injection-Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometry

High-throughput en uitgebreide Drug Surveillance met behulp van spectrometrie van de massa van het Multisegment injectie-capillaire elektroforese

New analytical methods are urgently needed to enable high-throughput, yet comprehensive drug screening, given an alarming opioid and prescription drug ...

Biological Samples Preparation for Speciation at Cryogenic Temperature using High-Resolution  X-Ray Absorption Spectroscopy

Biologische monsters voorbereiding voor soortvorming bij cryogene temperatuur met behulp van hoge-resolutie röntgenabsorptiespectroscopie

The study of elements with X-ray absorption spectroscopy (XAS) is of particular interest when studying the role of metals in biological systems. Sample ...