Name: rapid high throughput amylose determination in freeze dried potato tuber samples
Uploaded: 2013-10-14T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid High Throughput Amylose Determination in Freeze Dried Potato Tuber Samples at JoVE.com

O financiamento para esta pesquisa foi fornecido em parte pelo Programa de Pesquisa Associado USDA-ARS e do Comitê de culturas de Germoplasma do USDA.

1. Determinação de amilose de batata Tuber Amido <ol><li> Descasque e corte os tubérculos frescos em cubos pequenos. </li><li> Coloque cubos de batata em pequenos sacos castanhos e armazenar durante a noite a -80 ° C. </li><li> Transfira os cubos de batata para sacos de nylon e por liofilização. </li><li> Depois de liofilizado, moer a amostra de batata em pó utilizando almofariz e pilão ou um Wiley Mill. </li><li> Num tubo de 50 ml, adicionar 20-30 mg da, amostra tubérculo solo seco por congelação. </li><li...

<ol>
	<li>Composition Hoover, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=molecular+structure,+and+physicochemical+properties+of+tuber+and+root+starches:+a+review.">molecular structure, and physicochemical properties of tuber and root starches: a review.</a> Carbohydr. 45 (3), 253-267 (2001).</li><li>Bertoft, E., Blennow, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+Potato+Starch.">Structure of Potato Starch.</a> Advances in Potato Chemistry and Technology. , 83-98 (2009).</li><li>Campbell, M. R., Yeager, H., Abdubek, N., Pollak, L., Glover, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+methods+for+amylose+screening+in+maize+starches+from+exotic+backgrounds.">Comparison of methods for amylose screening in maize starches from exotic backgrounds.</a> Cereal Chem. 79, 317-321 (2002).</li><li>Zhu, T., Jackson, D. S., Wehling, R. L., Geera, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+amylose+determination+methods+and+the+development+of+a+dual+wavelength+iodine+binding+technique.">Comparison of amylose determination methods and the development of a dual wavelength iodine binding technique.</a> Cereal Chem. 85, 51-58 (2008).</li><li>Hovenkamp-Hermelink, J., Devries, J., Adamse, P., Jacobsen, E., Witholt, B., Feenstra, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+estimation+of+the+amylose+amylopectin+ratio+in+small+amounts+of+tuber+and+leaf+tissue+of+the+potato.">Rapid estimation of the amylose amylopectin ratio in small amounts of tuber and leaf tissue of the potato.</a> Potato Res. 31, 241-246 (1988).</li><li>Shannon, J. C., Garwood, D. L., Boyer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+and+Physiology+of+Starch+Development.">Genetics and Physiology of Starch Development.</a> Starch. , 23-82 (2009).</li><li>Haase, N. U., Plate, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+potato+starch+in+relation+to+varieties+and+environmental+factors.">Properties of potato starch in relation to varieties and environmental factors.</a> St&#228;rke. 48 (5), 167-171 (1996).</li><li>Johnston, F. B., Urbas, B., Khanzada, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+storage+on+the+size+distribution+and+amylose/amylopectin+ratio+in+potato+starch+granules.">Effect of storage on the size distribution and amylose/amylopectin ratio in potato starch granules.</a> Am. Pot. J. 45, 315-321 (1968).</li><li>Gibson, T. S., Solah, V. A., McCleary, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+procedure+to+measure+amylose+in+cereal+starches+and+flours+with+concanavalin+A.">A procedure to measure amylose in cereal starches and flours with concanavalin A.</a> J. Cereal Sci. 25 (2), 111-119 (1997).</li><li>Sun, S., Matheson, N., Yun, S. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+amylose+content+of+starches+after+precipitation+of+amylopectin+by+concanavalin+A.">Estimation of amylose content of starches after precipitation of amylopectin by concanavalin A.</a> Starch. 42, 302-305 (1990).</li></ol>

Teor de amilose em tubérculos de batata geralmente varia de 20-35% 7,8. Se a maioria dos valores estão do lado de fora deste intervalo, considerar estes erros possíveis: 1) Os dados brutos foram usados ​​em vez de dados inibidas para a construção da curva padrão de amilose / amilopectina, 2) Os dados brutos foram usados ​​em vez de dados inibidas para a determinação do teor de amilose / proporções de amilopectina das amostras de batata, ou 3) a água utilizada para a análise não foi sufici...

Cerca de 80% do peso fresco de um tubérculo da batata é água; quase toda a matéria seca remanescente é de amido 1. A maior parte do amido (70%) é composto de amilopectina, enquanto que o restante é amilose. A relação entre a amilose e amilopectina é a propriedade mais importante que influencia as propriedades físicas do amido. Amilose é um alfa 1-4 cadeia glicose linear, enquanto a amilopectina é uma cadeia alfa 1-4 linear com alfa 1-6 ramos 2. Métodos tais como iodo de ligação, calorimetria diferencial de varrimento (DSC), cromatografia de exclusão de tamanho de elevado desempenho (HPSEC) e concanavalina A interacções têm sido desenvolvidos para a determinação de amido em diferentes espécies de plantas 3,4. Cada protocolo requer habilidades e equipamentos especiais, o que torna difícil para escalar até quantificar numerosas amostras de cada vez. O método que apresentamos aqui é um protocolo modificado de Hovenkamp-Hermelink et al. 5, que é uma associação de iodo comprimento de onda duplométodo baseado em grânulos de amido coradas. As vantagens deste método em relação a outras incluir a determinação do teor de amilose de amido em bruto sem purificação e a utilização do sistema de duplo comprimento de onda para aumentar a precisão do método 4,6.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td> Reagents</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Amylose </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>859656</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Amylopectin </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A8515</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Perchloric Acid 60%</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>311413</td>
 <td>Very hazardous to skin and eyes</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iodine</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>23214TD</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Potassium iodide</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>08625JE</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Plate Reader</td>
 <td>Bio Tek</td>
 <td>ELx800</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

rapid high throughput amylose determination in freeze dried potato tuber samples

Este protocolo descreve um elevado através do método colorimétrico de colocar que se baseia na formação de um complexo entre o iodo e cadeias de moléculas de glucose em amido. Iodo forma complexos com tanto amilose e amilopectina em longas cadeias. Após a adição de iodo a uma amostra de amido, o máximo de absorção de amilose e amilopectina ocorre a 620 e 550 nm, respectivamente. A proporção de amilose / amilopectina pode ser estimada a partir da razão dos valores de absorvância de 620 e 550 nm e comparando-os com uma curva padrão em que as concentrações específicas conhecidas são traçados em função de valores de absorção. Esta alta taxa de transferência, método barato é confiável e reprodutível, permitindo a avaliação de grandes populações de clones de batata.

A curva padrão construída a partir de dados inibidas de soluções de concentração de amilose / amilopectina diferentes mostra proporções aproximadas de absorvância entre 0,7 e 1,6 (Tabela 1). Uma linha de tendência de regressão linear a partir destes dados é utilizada mais tarde para inferir o teor de amilose no liofilizadas amostras de batata (Figura 1). O ambiente de produção da planta tem algum efeito sobre o teor de amilose do tubérculo <su...

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Rapid High Throughput Amylose Determination in Freeze Dried Potato Tuber Samples

Rápidas alto rendimento amilose Determinação em amostras liofilizadas tubérculo

This protocol describes a high through put colorimetric method that relies on the formation of a complex between iodine and chains of glucose molecules in ...

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