Name: coupled assays for monitoring protein refolding in saccharomyces cerevisiae
Uploaded: 2013-07-09T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

وأيد هذا العمل من خلال منحة من المعاهد الوطنية للصحة (NIGMS-074696) لكام والجمعية الأمريكية لعلم الأحياء المجهرية روبرت واتكينز D. طالب دراسات عليا زمالة أبحاث لJLA كما نشكر جون غلوفر في جامعة تورنتو عن توفير FFL -GFP البلازميد مصدر.

1. بناء سلالات تحتوي على FFL-GFP البلازميد لهذه الدراسة، خميرة الخباز سلالة BY4741 (MAT لذلك، his3Δ1، leu2Δ0، met15Δ0، ura3Δ0) كانت تستخدم جنبا إلى جنب مع سلالة الحذف HSP104 من جمع خروج المغلوب الخميرة (فتح النظم البيولوجية / الحر...

<ol>
	<li>Balch, W. E., Morimoto, R. I., Dillin, A., Kelly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adapting+proteostasis+for+disease+intervention.">Adapting proteostasis for disease intervention.</a> Science. 319, 916-919 (2008).</li><li>Cashikar, A. G., Duennwald, M., Lindquist, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chaperone+pathway+in+protein+disaggregation.+Hsp26+alters+the+nature+of+protein+aggregates+to+facilitate+reactivation+by+Hsp104.">A chaperone pathway in protein disaggregation. Hsp26 alters the nature of protein aggregates to facilitate reactivation by Hsp104.</a> J. Biol. Chem. 280, 23869-23875 (2005).</li><li>Conti, E., Lloyd, L. F., Akins, J., Franks, N. P., Brick, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystallization+and+preliminary+diffraction+studies+of+firefly+luciferase+from+Photinus+pyralis.">Crystallization and preliminary diffraction studies of firefly luciferase from Photinus pyralis.</a> Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 52, 876-878 (1996).</li><li>Gietz, R. D., Schiestl, R. H., Willems, A. R., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+transformation+of+intact+yeast+cells+by+the+LiAc/SS-DNA/PEG+procedure.">Studies on the transformation of intact yeast cells by the LiAc/SS-DNA/PEG procedure.</a> Yeast. 11, 355-360 (1995).</li><li>Glover, J. R., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hsp104,+Hsp70,+and+Hsp40:+a+novel+chaperone+system+that+rescues+previously+aggregated+proteins.">Hsp104, Hsp70, and Hsp40: a novel chaperone system that rescues previously aggregated proteins.</a> Cell. 94, 73-82 (1998).</li><li>Grantcharova, V., Alm, E. J., Baker, D., Horwich, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+protein+folding.">Mechanisms of protein folding.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 11, 70-82 (2001).</li><li>Kim, S., Schilke, B., Craig, E. A., Horwich, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folding+in+vivo+of+a+newly+translated+yeast+cytosolic+enzyme+is+mediated+by+the+SSA+class+of+cytosolic+yeast+Hsp70+proteins.">Folding in vivo of a newly translated yeast cytosolic enzyme is mediated by the SSA class of cytosolic yeast Hsp70 proteins.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 12860-12865 (1998).</li><li>Lum, R., Niggemann, M., Glover, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+and+protein+binding+in+the+axial+channel+of+Hsp104.+Insights+into+the+mechanism+of+protein+unfolding.">Peptide and protein binding in the axial channel of Hsp104. Insights into the mechanism of protein unfolding.</a> J. Biol. Chem. 283, 30139-30150 (2008).</li><li>Marques, S. M., Esteves da Silva, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Firefly+bioluminescence:+a+mechanistic+approach+of+luciferase+catalyzed+reactions.">Firefly bioluminescence: a mechanistic approach of luciferase catalyzed reactions.</a> IUBMB Life. 61, 6-17 (2009).</li><li>Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heat+shock+response:+systems+biology+of+proteotoxic+stress+in+aging+and+disease.">The heat shock response: systems biology of proteotoxic stress in aging and disease.</a> Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 76, 91-99 (2011).</li><li>Nakatsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+the+spectral+difference+in+luciferase+bioluminescence.">Structural basis for the spectral difference in luciferase bioluminescence.</a> Nature. 440, 372-376 (2006).</li><li>Nathan, D. F., Vos, M. H., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+functions+of+the+Saccharomyces+cerevisiae+Hsp90+chaperone.">In vivo functions of the Saccharomyces cerevisiae Hsp90 chaperone.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 12949-12956 (1997).</li><li>Parsell, D. A., Kowal, A. S., Singer, M. A., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+disaggregation+mediated+by+heat-shock+protein+Hsp104.">Protein disaggregation mediated by heat-shock protein Hsp104.</a> Nature. 372, 475-478 (1994).</li><li>Penna, T. C., Ishii, M., Junior, A. P., Cholewa, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+stability+of+recombinant+green+fluorescent+protein+(GFPuv)+at+various+pH+values.">Thermal stability of recombinant green fluorescent protein (GFPuv) at various pH values.</a> Appl. Biochem. Biotechnol. , 113-116 (2004).</li><li>Seliger, H. H., Buck, J. B., Fastie, W. G., McElroy, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spectral+Distribution+of+Firefly+Light.">The Spectral Distribution of Firefly Light.</a> J. Gen. Physiol. 48, 95-104 (1964).</li><li>Shorter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mammalian+disaggregase+machinery:+Hsp110+synergizes+with+Hsp70+and+Hsp40+to+catalyze+protein+disaggregation+and+reactivation+in+a+cell-free+system.">The mammalian disaggregase machinery: Hsp110 synergizes with Hsp70 and Hsp40 to catalyze protein disaggregation and reactivation in a cell-free system.</a> PLoS One. 6, e26319 (2011).</li><li>Tkach, J. M., Glover, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleocytoplasmic+trafficking+of+the+molecular+chaperone+Hsp104+in+unstressed+and+heat-shocked+cells.">Nucleocytoplasmic trafficking of the molecular chaperone Hsp104 in unstressed and heat-shocked cells.</a> Traffic. 9, 39-56 (2008).</li><li>Unno, K., Kishido, T., Hosaka, M., Okada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Hsp70+subfamily,+Ssa,+in+protein+folding+in+yeast+cells,+seen+in+luciferase-transformed+ssa+mutants.">Role of Hsp70 subfamily, Ssa, in protein folding in yeast cells, seen in luciferase-transformed ssa mutants.</a> Biol. Pharm. Bull. 20, 1240-1244 (1997).</li><li>Verghese, J., Abrams, J., Wang, Y., Morano, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+the+heat+shock+response+and+protein+chaperones:+budding+yeast+(Saccharomyces+cerevisiae)+as+a+model+system.">Biology of the heat shock response and protein chaperones: budding yeast (Saccharomyces cerevisiae) as a model system.</a> Microbiol. Mol. Biol. Rev. 76, 115-158 (2012).</li></ol>

في هذه المقالة نموذج البروتين كانت تستخدم FFL-GFP تبين أن disaggregase الخميرة، Hsp104 يساهم في البروتين إعادة الانحلالية والإصلاح. المقايسات الأنزيمية والفحص المجهري استجواب تفاضلي حالة من البروتين الركيزة نفسه لتحديد طوي ثانية كفاءة وانتاجية. نتائج فحوصات الانتعاش الأنزيمي...

في البشر وقد تم ربط الاضطرابات العصبية بما في ذلك مرض الزهايمر، وباركنسون، والأمراض هنتنغتون إلى misfolding البروتين والتجميع 10. الخلايا توظيف المحرمين الجزيئية لمنع محاصرة الحركية من البروتينات الخلوية في الهياكل غير نشط تتجمع 6. المشاركة المحرمين في شبكات تفاعل معقدة داخل الخلية، ولكن ليست مفهومة تماما كيف أن مجموع هذه التفاعلات يساهم في proteostasis العضوي. واحد من المحرمين الرئيسية المسؤولة عن غالبية عصاري خلوي للطي البروتين هو بروتين الصدمة الحرارية دينار كويتي 70 (HSP70) الأسرة 19. وقد تبين أنه في فقدان الخميرة النقص HSP70 القدرة على أضعاف الوليدة FFL أعرب heterologously وrefold البروتين الذاتية، الأورنيثين ناقلة الكربامويل، في الجسم الحي 18، 7. والقدرة على تحليل للطي مع القرار في الوقت شبه الحقيقي تيسير فهم كيف إضافية العوامل الخلوية تابعribute لهذه العملية التي تعتمد على HSP70. وبالإضافة إلى ذلك، قد لا تكون قابلة للطي / طوي ثانية التفاعلات تعتمد اعتمادا كليا على هذه البروتينات المساهمة، لذلك يجب أن تكون المقايسات حساسة بما يكفي للكشف عن كلا من التغيرات الكبيرة والصغيرة في حركية وكفاءة. وdisaggregase خلية الخميرة، Hsp104، تلعب دورا حيويا في إصلاح البروتينات تتجمع المجمعة. على الرغم من أن تم التعرف Hsp104 homologs في الفطريات والنباتات، وهذه العائلة ويبدو أن تغيب في metazoans. وقد اقترح أن المحرمين أخرى مثل تلك الأسرة Hsp110 أداء بعض الأنشطة المعروفة Hsp104 في الثدييات 16. Hsp104 هو AAA +، بروتين معقد hexameric الذي يعمل في الخميرة إلى المجاميع البروتين اعادة تشكيلها، والمساهمة في طوي ثانية وإصلاح 13. Hsp104، جنبا إلى جنب مع الخميرة HSP70، SSA1، والخميرة Hsp40، Ydj1، مطلوب للتعافي من FFL التشويه والتحريف في خلايا الخميرة 5 و 8. وقد تبين أن الحرارة الصغيرة بروتين الصدمة، Hsp26، أيضا أن يكون ل requiأحمر لتفصيل Hsp104 بوساطة من FFL 2. FFL هو بروتين ثنائي المجال الذي يربط الركيزة luciferin في موقع نشط وبعد تغيير متعلق بتكوين الذي يتطلب ATP والأكسجين، decarboxylates الركيزة الإفراج oxyluciferin، وثاني أكسيد الكربون (CO 2)، أحادي فسفات الأدينوزين (AMP)، وضوء 11، 9، 3. الركيزة المتاحة تجاريا FFL، D-وسيفيرين، والنتائج في انبعاث الضوء بين 550-570 نانومتر التي يمكن أن يتم الكشف عن باستخدام luminometer 15. FFL حساس بشكل رائع لتمسخ من العلاجات الكيميائية أو الحرارة والمجاميع بسرعة على تتكشف. عندما تتعرض لدرجات حرارة تتراوح بين 39-45 درجة مئوية وتكشفت FFL عكسية والمعطل 12. في المقابل، GFP ومشتقاته هي مقاومة للبروتين تتكشف الضغوط 14 للغاية. فيوجين من هذه البروتينات اثنين يسمح FFL ليعمل وشاردة عطوب تجريبيا قادرة على استهداف وظيفية GFP بين الخلايا الودائع التي يمكن تصور باستخدام المجهر مضان في كل من السكان ومستويات خلية واحدة. تطبيق فحص الأنزيمية في قارئ لوحة المتعدد شبه الآلي إلى جانب المجهر الآلي يسمح التقييم في وقت واحد لم يسبق له مثيل من حركية والعائد من ردود الفعل طوي ثانية. بالإضافة إلى ذلك، علم الوراثة الجزيئي السطحية للنموذج حقيقي النواة خميرة الخباز يسمح على حد سواء التلاعب الدقيق للشبكة مراقبة جودة البروتين وإتاحة الفرصة للنهج القائم على الاكتشاف لتحديد اللاعبين رواية المساهمة في الاستجابة للضغط النفسي الخلوية وproteostasis. في هذه الدراسة، البرية من نوع (WT) وHSP104 الحذف سلالات معربا عن FFL-GFP تخضع لتغيير طبيعة بروتين الصدمة الحرارية. ويتم رصد FFL-GFP طوي ثانية من خلال كل من فحص الأنزيمية والفحص المجهري وقراءات وكيل لإصلاح بروتيوم أعرب أكثر من مرة بالطبع الانتعاش. بالمقارنة مع خلايا WT، وتبين لنا اله Hsp104 سلالة الحذف هو ~ 60٪ أقل كفاءة في طوي ثانية FFL-GFP، ودعم النتائج السابقة إنشاء دور للHsp104 في تنشيط التشويه والتحريف FFL 2.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagents</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Synergy MX Microplate Reader</td>
 <td>BioTek</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Olympus IX81-ZDC Confocal Inverted Microscope</td>
 <td>Olympus, Tokyo Japan</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lumitrac 200 white 96-well plates</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SlideBook 5.0 digital microscopy software</td>
 <td>Intelligent Imaging Innovations, Inc. Denver, CO, USA</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tris Base</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP152-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>(LiAc) Lithium Acetate</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L6883</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PEG (polyethelene glycol)</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP233-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP120-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMSO</td>
 <td>Malinckrodt</td>
 <td>4948</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SC</td>
 <td>Sunrise</td>
 <td>1300-030</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SC-URA</td>
 <td>Sunrise</td>
 <td>1306-030</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>cycloheximide</td>
 <td>Acros Organics</td>
 <td>357420050</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>D-luciferin</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L9504</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>low melt agarose</td>
 <td>NuSieve</td>
 <td>50082</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>immersion oil</td>
 <td>Cargille</td>
 <td>16484</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

coupled assays for monitoring protein refolding in saccharomyces cerevisiae

Proteostasis، الذي يعرف بأنه العمليات مجتمعة من البروتين للطي / النشوء الأحيائي، طوي ثانية / إصلاح، وتدهور، هو توازن دقيق الخلوية التي يجب المحافظة عليها لتجنب العواقب الوخيمة 1. العوامل الخارجية أو الداخلية التي تعطل هذا التوازن يمكن أن يؤدي إلى تجميع البروتين، والسمية وموت الخلايا. في البشر هذا هو أحد العوامل الرئيسية التي تسهم في الأعراض المصاحبة للاضطرابات العصبية مثل هنتنغتون، باركنسون، والأمراض الزهايمر 10. ولذا فمن الضروري أن البروتينات المشاركة في صيانة proteostasis أن يتم تحديدها من أجل تطوير علاجات لهذه الأمراض المنهكة. توضح هذه المقالة التقنيات للرصد في طي البروتين في الجسم الحي في القرار قرب الوقت الحقيقي باستخدام نموذج البروتين luciferase يراعة تنصهر لبروتين الفلورية الخضراء (GFP FFL-). FFL-GFP هو نموذج البروتين خيالية فريدة من نوعها كما شاردة FFL هو حساسة للغاية التوتر الناجم عن مisfolding والتجميع، الذي يثبط نشاط الإنزيم 12. ويتم رصد luciferase النشاط باستخدام مقايسة الأنزيمية، ويوفر شاردة GFP وسيلة لتصور FFL قابل للذوبان أو مجمعة باستخدام المجهر الآلي. هذه الأساليب إلى جانب إدراج نهجين متوازيين ومستقلين من الناحية الفنية لتحليل كل من طوي ثانية وإعادة تنشيط الوظيفية للانزيم بعد الإجهاد. انتعاش النشاط يمكن ربط مباشرة مع حركية التفكيك وإعادة الانحلالية إلى فهم أفضل لكيفية العوامل مراقبة الجودة بروتين مثل البروتين المحرمين التعاون من أجل أداء هذه المهام. وبالإضافة إلى ذلك، الحذف أو طفرات الجينات يمكن استخدامها لاختبار المساهمات بروتينات معينة أو الوحدات الصغرى البروتين لهذه العملية. في هذه المقالة ندرس المساهمات من البروتين disaggregase Hsp104 13، والمعروف أن شريك مع عامل تبادل Hsp40/70/nucleotide (NEF) طوي ثانية نظام 5، طوي ثانية إلى البروتين للتحقق من صحة هذا النهج.

الخميرة تعتمد على disaggregase، Hsp104 إلى refold البروتينات حرارة التشويه والتحريف بكفاءة. تم رصد نشاط FFL-GFP بعد الصدمة الحرارية دقيقة 25، وذلك باستخدام التلألؤ فلاش فحص الشكل 1. وكشفت نتائج هذا الفحص الآلي هو مبين في الشكل 2 الزيادة التدريجية في النشاط أكثر من 90...

Watch this Scientific Journal Video about Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

توضح هذه المقالة استخدام luciferase يراعة-GFP انصهار بروتين للتحقيق<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; طي البروتين في<em&gt; خميرة الخباز</em&gt;. باستخدام هذا الكاشف، طوي ثانية من نموذج البروتين للحرارة التشويه والتحريف يمكن رصدها في وقت واحد بواسطة المجهر مضان وفحص الأنزيمية للتحقيق في أدوار مكونات شبكة proteostasis في مراقبة الجودة البروتين.

فحوصات بالإضافة لرصد طوي ثانية بروتين في<em&gt; خميرة الخباز</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

Research

JoVE Journal

Biology

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

تشريح السكيراء الجعوية زقاق

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

حفز Phosphoproteomics الكمية في الأحماض الدهنية السكيراء الجعوية</em

This protocol describes the growth and stimulation, with the fatty acid oleate, of isotopically heavy and light S. cerevisiae cells. Cells are ground ...

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

تحليل لميكروأري السكيراء الجعوية</em

In this protocol, gene expression in yeast (Saccharomyces cerevisiae) is changed after exposure to oxidative stress induced by the addition of hydrogen ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

والفحص المجهري لالإسفار Mitophagy الرصد في الخميرة السكيراء الجعوية

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

التعبير وتنقية عبر الغشاء التليف الكيسي بروتين منظم المواصلة في خميرة الخباز

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

التصور والتحليل من جزيئات الرنا المرسال عن طريق الإسفار<em&gt; في الموضع</em&gt; التهجين في<em&gt; خميرة الخباز</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

تنقية التليف الكيسي عبر الغشاء المواصلة منظم البروتين المعبر عنه في<em&gt; خميرة الخباز</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

تحديد سرعة التفاعلات الكيميائية الوراثية في<em&gt; خميرة الخباز</em

Determining the mode of action of bioactive chemicals is of interest to a broad range of academic, pharmaceutical, and industrial scientists. ...

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

تحديد القائم على النمو وتأكيد البيوكيميائية من متطلبات الوراثية للتدهور البروتين في<em&gt; خميرة الخباز</em

Regulated protein degradation is crucial for virtually every cellular function. Much of what is known about the molecular mechanisms and genetic ...

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

توجه طريقة تطور في<em&gt; خميرة الخباز</em&gt;: المسخ مكتبة الخلق والفرز

Directed evolution in Saccharomyces cerevisiae offers many attractive advantages when designing enzymes for biotechnological applications, a process that ...