Name: coupled assays for monitoring protein refolding in saccharomyces cerevisiae
Uploaded: 2013-07-09T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av et stipend fra National Institutes of Health (NIGMS-074696) til KAM og American Society of Microbiology Robert D. Watkins Graduate Student Research Fellowship til JLA Vi takker også John Glover ved University of Toronto for å gi FFL -GFP kilde plasmid.

En. Bygging av påkjenningen som inneholder FFL-GFP Plasmid For denne studien, ble Saccharomyces cerevisiae stamme BY4741 (MAT a, his3Δ1, leu2Δ0, met15Δ0, ura3Δ0) som brukes sammen med en HSP104 sletting belastning fra gjær knockout samling (Åpen Biosystems / Thermo Scientific). Slettingen ble bekreftet ved hjelp av en Hsp104-spesifikt antistoff for Western blot analyse. FFL-GFP ble uttrykt fra p426MET25-FFL-GFP, ko...

<ol>
	<li>Balch, W. E., Morimoto, R. I., Dillin, A., Kelly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adapting+proteostasis+for+disease+intervention.">Adapting proteostasis for disease intervention.</a> Science. 319, 916-919 (2008).</li><li>Cashikar, A. G., Duennwald, M., Lindquist, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chaperone+pathway+in+protein+disaggregation.+Hsp26+alters+the+nature+of+protein+aggregates+to+facilitate+reactivation+by+Hsp104.">A chaperone pathway in protein disaggregation. Hsp26 alters the nature of protein aggregates to facilitate reactivation by Hsp104.</a> J. Biol. Chem. 280, 23869-23875 (2005).</li><li>Conti, E., Lloyd, L. F., Akins, J., Franks, N. P., Brick, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystallization+and+preliminary+diffraction+studies+of+firefly+luciferase+from+Photinus+pyralis.">Crystallization and preliminary diffraction studies of firefly luciferase from Photinus pyralis.</a> Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 52, 876-878 (1996).</li><li>Gietz, R. D., Schiestl, R. H., Willems, A. R., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+transformation+of+intact+yeast+cells+by+the+LiAc/SS-DNA/PEG+procedure.">Studies on the transformation of intact yeast cells by the LiAc/SS-DNA/PEG procedure.</a> Yeast. 11, 355-360 (1995).</li><li>Glover, J. R., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hsp104,+Hsp70,+and+Hsp40:+a+novel+chaperone+system+that+rescues+previously+aggregated+proteins.">Hsp104, Hsp70, and Hsp40: a novel chaperone system that rescues previously aggregated proteins.</a> Cell. 94, 73-82 (1998).</li><li>Grantcharova, V., Alm, E. J., Baker, D., Horwich, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+protein+folding.">Mechanisms of protein folding.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 11, 70-82 (2001).</li><li>Kim, S., Schilke, B., Craig, E. A., Horwich, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folding+in+vivo+of+a+newly+translated+yeast+cytosolic+enzyme+is+mediated+by+the+SSA+class+of+cytosolic+yeast+Hsp70+proteins.">Folding in vivo of a newly translated yeast cytosolic enzyme is mediated by the SSA class of cytosolic yeast Hsp70 proteins.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 12860-12865 (1998).</li><li>Lum, R., Niggemann, M., Glover, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+and+protein+binding+in+the+axial+channel+of+Hsp104.+Insights+into+the+mechanism+of+protein+unfolding.">Peptide and protein binding in the axial channel of Hsp104. Insights into the mechanism of protein unfolding.</a> J. Biol. Chem. 283, 30139-30150 (2008).</li><li>Marques, S. M., Esteves da Silva, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Firefly+bioluminescence:+a+mechanistic+approach+of+luciferase+catalyzed+reactions.">Firefly bioluminescence: a mechanistic approach of luciferase catalyzed reactions.</a> IUBMB Life. 61, 6-17 (2009).</li><li>Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heat+shock+response:+systems+biology+of+proteotoxic+stress+in+aging+and+disease.">The heat shock response: systems biology of proteotoxic stress in aging and disease.</a> Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 76, 91-99 (2011).</li><li>Nakatsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+the+spectral+difference+in+luciferase+bioluminescence.">Structural basis for the spectral difference in luciferase bioluminescence.</a> Nature. 440, 372-376 (2006).</li><li>Nathan, D. F., Vos, M. H., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+functions+of+the+Saccharomyces+cerevisiae+Hsp90+chaperone.">In vivo functions of the Saccharomyces cerevisiae Hsp90 chaperone.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 12949-12956 (1997).</li><li>Parsell, D. A., Kowal, A. S., Singer, M. A., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+disaggregation+mediated+by+heat-shock+protein+Hsp104.">Protein disaggregation mediated by heat-shock protein Hsp104.</a> Nature. 372, 475-478 (1994).</li><li>Penna, T. C., Ishii, M., Junior, A. P., Cholewa, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+stability+of+recombinant+green+fluorescent+protein+(GFPuv)+at+various+pH+values.">Thermal stability of recombinant green fluorescent protein (GFPuv) at various pH values.</a> Appl. Biochem. Biotechnol. , 113-116 (2004).</li><li>Seliger, H. H., Buck, J. B., Fastie, W. G., McElroy, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spectral+Distribution+of+Firefly+Light.">The Spectral Distribution of Firefly Light.</a> J. Gen. Physiol. 48, 95-104 (1964).</li><li>Shorter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mammalian+disaggregase+machinery:+Hsp110+synergizes+with+Hsp70+and+Hsp40+to+catalyze+protein+disaggregation+and+reactivation+in+a+cell-free+system.">The mammalian disaggregase machinery: Hsp110 synergizes with Hsp70 and Hsp40 to catalyze protein disaggregation and reactivation in a cell-free system.</a> PLoS One. 6, e26319 (2011).</li><li>Tkach, J. M., Glover, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleocytoplasmic+trafficking+of+the+molecular+chaperone+Hsp104+in+unstressed+and+heat-shocked+cells.">Nucleocytoplasmic trafficking of the molecular chaperone Hsp104 in unstressed and heat-shocked cells.</a> Traffic. 9, 39-56 (2008).</li><li>Unno, K., Kishido, T., Hosaka, M., Okada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Hsp70+subfamily,+Ssa,+in+protein+folding+in+yeast+cells,+seen+in+luciferase-transformed+ssa+mutants.">Role of Hsp70 subfamily, Ssa, in protein folding in yeast cells, seen in luciferase-transformed ssa mutants.</a> Biol. Pharm. Bull. 20, 1240-1244 (1997).</li><li>Verghese, J., Abrams, J., Wang, Y., Morano, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+the+heat+shock+response+and+protein+chaperones:+budding+yeast+(Saccharomyces+cerevisiae)+as+a+model+system.">Biology of the heat shock response and protein chaperones: budding yeast (Saccharomyces cerevisiae) as a model system.</a> Microbiol. Mol. Biol. Rev. 76, 115-158 (2012).</li></ol>

I denne artikkelen modellen protein FFL-GFP ble brukt til å vise at gjær disaggregase, bidrar Hsp104 til protein re-solubilisering og reparasjon. Den enzymatiske assayer og mikroskopi differensielt avlest status for den samme substrat protein for å bestemme effektiviteten av utbyttet refolding. Resultater av de enzymatiske assayer utvinning tyder på at ikke bare er den maksimale bedring i hsp104D mutantstammen ineffektiv, men den opprinnelige størrelsen av den etterfølgende belastning var større i den mu...

Hos mennesker neurodegenerative lidelser, inkludert Alzheimers, Parkinsons og Huntingtons sykdommer har vært knyttet til protein misfolding og aggregering 10.. Celler benytter molekylære anstand for å hindre kinetisk fangst av cellulære proteiner til misfolded inaktive strukturer seks. Anstand delta i intrikate interaksjon nettverk i cellen, men det er ikke helt forstått hvordan summen av disse interaksjonene bidrar til organismebiologi proteostasis. En av de viktigste anstand ansvarlig for flertallet av cytosolprotein folding er 70 kD heat shock protein (Hsp70) familie 19. Det har vist seg at i gjær tap av hsp70 avtar evnen til å kaste begynnende heterologt uttrykt FFL og refold den endogene protein, ornitin transcarbamoylase, i 18 vivo, 7. Evnen til å analysere folding med nær sanntid oppløsning vil lette forståelsen av hvordan ekstra cellulære faktorer fortsribute til denne Hsp70-avhengig prosess. I tillegg kan folding / refolding reaksjonene ikke være helt avhengig av at disse bidrar proteiner, så assay skal være følsom nok til å detektere både store og små endringer i kinetikk og effektivitet. Gjærcellen disaggregase, Hsp104, spiller en viktig rolle i å reparere aggregerte misfolded proteiner. Selv Hsp104 homologene har blitt identifisert i sopp og planter, synes denne familien til å være fraværende i metazoans. Det har vært foreslått at andre anstand som de av Hsp110 familien utføre noen av de kjente Hsp104 aktiviteter i pattedyr 16. Hsp104 er en AAA +, heksamere protein kompleks som fungerer i gjær til oppussing protein aggregater, som bidrar til refolding og reparasjon 13. Hsp104, sammen med gjær Hsp70, Ssa1, og gjær-Hsp40, Ydj1, er nødvendig for gjenvinning av denaturert OFF i gjærceller 5, 8. Den lille varmesjokkprotein, Hsp26, har også vist seg å være krav som stillesred for Hsp104-mediert disaggregation av FFL to. OFF er en to-domene protein som binder substratet luciferin i det aktive sete, og etter en konformasjonsendring som krever ATP og oksygen, decarboxylates substratet slippe oxyluciferin, karbondioksyd (CO 2), adenosin-monofosfat (AMP), og lys 11, 9, 3. Den kommersielt tilgjengelige FFL underlaget, D-luciferin, resulterer i lys utslipp mellom 550-570 nm som kan oppdages ved hjelp av en luminometer 15. FFL er utsøkt sensitive til denaturering fra kjemiske eller varme behandlinger og aggregater raskt ved utfoldelse. Når de utsettes for temperaturer mellom 39-45 ° C FFL er reversibelt utfoldet og inaktivert 12. I kontrast, GFP og dets derivater er meget motstandsdyktig mot protein utfolding påkjenninger 14. Derfor fusjon av disse to proteinene gjør FFL å fungere som et eksperimentelt labile delen stand til å sikte funksjonell GFP til intracellulær forekomster som kan visualiseres ved hjelp av fluorescens mikroskopi på både befolkningen og encellede nivåer. Anvendelse av den enzymatiske analyse i en semi-automatisert multimodusfiber plateavleseren kombinert med automatisert enestående mikroskopi tillater simultan evaluering av kinetikk og et utbytte på refolding reaksjoner. I tillegg gir de lettvinte molekylær genetikk av modellen eukaryote Saccharomyces cerevisiae både presis manipulering av protein kvalitetskontroll nettverk og mulighet for oppdagelsen tilnærminger for å identifisere nye spillere som bidrar til mobilnettet stressrespons og proteostasis. I denne studien, vill type (WT) og HSP104 sletting stammer som uttrykker FFL-GFP er underlagt protein denaturering heat shock. FFL-GFP refolding følges opp gjennom både en enzymatisk analyse og mikroskopi som en proxy avlesning for reparasjon av uttrykte proteomet over en restitusjonstid kurset. Sammenlignet med WT celler, viser vi the Hsp104 sletting belastningen er ~ 60% mindre effektiv ved refolding FFL-GFP, støtter tidligere funn etablere en rolle for Hsp104 i reaktivering av denaturert FFL to.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagents</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Synergy MX Microplate Reader</td>
 <td>BioTek</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Olympus IX81-ZDC Confocal Inverted Microscope</td>
 <td>Olympus, Tokyo Japan</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lumitrac 200 white 96-well plates</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SlideBook 5.0 digital microscopy software</td>
 <td>Intelligent Imaging Innovations, Inc. Denver, CO, USA</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tris Base</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP152-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>(LiAc) Lithium Acetate</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L6883</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PEG (polyethelene glycol)</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP233-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP120-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMSO</td>
 <td>Malinckrodt</td>
 <td>4948</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SC</td>
 <td>Sunrise</td>
 <td>1300-030</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SC-URA</td>
 <td>Sunrise</td>
 <td>1306-030</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>cycloheximide</td>
 <td>Acros Organics</td>
 <td>357420050</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>D-luciferin</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L9504</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>low melt agarose</td>
 <td>NuSieve</td>
 <td>50082</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>immersion oil</td>
 <td>Cargille</td>
 <td>16484</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

coupled assays for monitoring protein refolding in saccharomyces cerevisiae

Proteostasis, definert som de samlede prosesser av protein folding / biogenesis, er refolding / reparasjon, og fornedrelse, en delikat mobilnettet balanse som må opprettholdes for å unngå skadelige konsekvenser en. Eksterne eller interne faktorer som forstyrrer denne balansen kan føre til protein aggregering, giftighet og celledød. Hos mennesker er dette en viktig medvirkende faktor til symptomer assosiert med nevrodegenerative sykdommer slik som Huntingtons, Parkinsons, og Alzheimers sykdom 10. Det er derfor essensielt at proteinene som er involvert i opprettholdelse av proteostasis bli identifisert for å utvikle behandlinger for disse ødeleggende sykdommer. Denne artikkelen beskriver teknikker for overvåking in vivo protein folding på nær sanntid oppløsning ved hjelp av modellen protein ildflue luciferase smeltet til grønt fluorescerende protein (FFL-GFP). FFL-GFP er en unik modell kimært protein som FFL-delen er ekstremt følsomme for stress-indusert misfolding og aggregering, som inaktiverer enzymet 12. Luciferase aktivitet blir overvåket ved hjelp av en enzymatisk assay, og GFP-delen tilveiebringer en metode for visualisering av løselige eller aggregert ferdig gulv ved hjelp av mikroskopi. Disse koblede metoder innlemme to parallelle og teknisk uavhengige tilnærminger til å analysere både refolding og funksjonell reaktivering av et enzym etter stress. Aktivitet utvinning kan være direkte korrelert med kinetikk disaggregation og re-solubilisering å bedre forstå hvordan protein kvalitetskontroll faktorer som protein anstand samarbeide for å utføre disse funksjonene. I tillegg kan genet delesjoner eller mutasjoner brukes til å teste bidrag av spesifikke proteiner eller protein subenheter være denne prosessen. I denne artikkelen undersøker vi de bidragene av protein disaggregase 13 Hsp104, kjent for å samarbeide med Hsp40/70/nucleotide utveksling faktor (NEF) refolding system 5, til protein refolding å validere denne tilnærmingen.

Gjær er avhengig av disaggregase, til Hsp104 effektivt refold varme-denaturerte proteiner. Aktiviteten av OFF-GFP ble målt etter en 25 min varmesjokk, ved hjelp av en flash-luminescens analyse figur 1. Resultatene av denne analysen automatiserte vist i figur 2 vist en trinnvis økning i aktivitet over 90 min som til slutt førte til en&gt; 80% utvinning i WT-celler. Den hsp104Δ belastningen gjenvinnes 19% av den opprinnelige aktivitet over samme tidsperiode. Dessuten var omf...

Watch this Scientific Journal Video about Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Denne artikkelen beskriver bruken av et ildflue luciferase-GFP fusjonsprotein for å undersøke<em&gt; In vivo</em&gt; Proteinfolding i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Ved hjelp av denne reagensen, refolding av en modell varmedenaturert protein kan overvåkes samtidig av fluorescens mikroskopi og en enzymatisk analyse for å undersøke rollene til proteostasis nettverkskomponenter i protein kvalitetskontroll.

Sammen Analyser for Monitoring Protein Refolding i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

Research

JoVE Journal

Biology

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

This protocol describes the growth and stimulation, with the fatty acid oleate, of isotopically heavy and light S. cerevisiae cells. Cells are ground ...

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

In this protocol, gene expression in yeast (Saccharomyces cerevisiae) is changed after exposure to oxidative stress induced by the addition of hydrogen ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Uttrykk og rensing av Cystisk fibrose transmembrane Conduktans Regulator Protein i Saccharomyces cerevisiae

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualisering og analyse av mRNA molekyler med fluorescens<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Rensing av Cystisk fibrose transmembrane konduktans Regulator Protein Uttrykt i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Rapid Identifikasjon av kjemiske Genetiske interaksjoner i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Determining the mode of action of bioactive chemicals is of interest to a broad range of academic, pharmaceutical, and industrial scientists. ...

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Vekst-baserte Fastsettelse og Biokjemisk Bekreftelse av Genetiske Krav for proteinnedbrytning i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Regulated protein degradation is crucial for virtually every cellular function. Much of what is known about the molecular mechanisms and genetic ...

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

Regissert Evolution Metode i<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;: Mutant Bibliotek Creation og resirkulering

Directed evolution in Saccharomyces cerevisiae offers many attractive advantages when designing enzymes for biotechnological applications, a process that ...