Name: coupled assays for monitoring protein refolding in saccharomyces cerevisiae
Uploaded: 2013-07-09T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

Bu çalışma KAM ve Ayrıca OFF sağlamak için Toronto Üniversitesi&#39;nde John Glover teşekkür JLA için Mikrobiyoloji Robert D. Watkins Yüksek Lisans Araştırma Bursu bir American Society Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIGMS-074.696) bir hibe ile desteklenmiştir GFP kaynak plazmid.

1. Plazmid OFF-GFP İçeren Suşlarının İnşaatı Bu çalışma için, Saccharomyces cerevisiae suşu BY4741 (MAT bir, his3Δ1, leu2Δ0, met15Δ0, ura3Δ0) maya nakavt toplama (Açık Biyosistem / Thermo Scientific) bir HSP104 silme suşu ile birlikte kullanılmıştır. Silme Western blot analizi için bir Hsp104 spesifik antikor kullanılarak doğrulandı. OFF-GFP yazarlara talep üzerine Toronto 17 Ünive...

<ol>
	<li>Balch, W. E., Morimoto, R. I., Dillin, A., Kelly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adapting+proteostasis+for+disease+intervention.">Adapting proteostasis for disease intervention.</a> Science. 319, 916-919 (2008).</li><li>Cashikar, A. G., Duennwald, M., Lindquist, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chaperone+pathway+in+protein+disaggregation.+Hsp26+alters+the+nature+of+protein+aggregates+to+facilitate+reactivation+by+Hsp104.">A chaperone pathway in protein disaggregation. Hsp26 alters the nature of protein aggregates to facilitate reactivation by Hsp104.</a> J. Biol. Chem. 280, 23869-23875 (2005).</li><li>Conti, E., Lloyd, L. F., Akins, J., Franks, N. P., Brick, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystallization+and+preliminary+diffraction+studies+of+firefly+luciferase+from+Photinus+pyralis.">Crystallization and preliminary diffraction studies of firefly luciferase from Photinus pyralis.</a> Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 52, 876-878 (1996).</li><li>Gietz, R. D., Schiestl, R. H., Willems, A. R., Woods, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+transformation+of+intact+yeast+cells+by+the+LiAc/SS-DNA/PEG+procedure.">Studies on the transformation of intact yeast cells by the LiAc/SS-DNA/PEG procedure.</a> Yeast. 11, 355-360 (1995).</li><li>Glover, J. R., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hsp104,+Hsp70,+and+Hsp40:+a+novel+chaperone+system+that+rescues+previously+aggregated+proteins.">Hsp104, Hsp70, and Hsp40: a novel chaperone system that rescues previously aggregated proteins.</a> Cell. 94, 73-82 (1998).</li><li>Grantcharova, V., Alm, E. J., Baker, D., Horwich, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+protein+folding.">Mechanisms of protein folding.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 11, 70-82 (2001).</li><li>Kim, S., Schilke, B., Craig, E. A., Horwich, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folding+in+vivo+of+a+newly+translated+yeast+cytosolic+enzyme+is+mediated+by+the+SSA+class+of+cytosolic+yeast+Hsp70+proteins.">Folding in vivo of a newly translated yeast cytosolic enzyme is mediated by the SSA class of cytosolic yeast Hsp70 proteins.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 12860-12865 (1998).</li><li>Lum, R., Niggemann, M., Glover, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+and+protein+binding+in+the+axial+channel+of+Hsp104.+Insights+into+the+mechanism+of+protein+unfolding.">Peptide and protein binding in the axial channel of Hsp104. Insights into the mechanism of protein unfolding.</a> J. Biol. Chem. 283, 30139-30150 (2008).</li><li>Marques, S. M., Esteves da Silva, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Firefly+bioluminescence:+a+mechanistic+approach+of+luciferase+catalyzed+reactions.">Firefly bioluminescence: a mechanistic approach of luciferase catalyzed reactions.</a> IUBMB Life. 61, 6-17 (2009).</li><li>Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heat+shock+response:+systems+biology+of+proteotoxic+stress+in+aging+and+disease.">The heat shock response: systems biology of proteotoxic stress in aging and disease.</a> Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 76, 91-99 (2011).</li><li>Nakatsu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+the+spectral+difference+in+luciferase+bioluminescence.">Structural basis for the spectral difference in luciferase bioluminescence.</a> Nature. 440, 372-376 (2006).</li><li>Nathan, D. F., Vos, M. H., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+functions+of+the+Saccharomyces+cerevisiae+Hsp90+chaperone.">In vivo functions of the Saccharomyces cerevisiae Hsp90 chaperone.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 12949-12956 (1997).</li><li>Parsell, D. A., Kowal, A. S., Singer, M. A., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+disaggregation+mediated+by+heat-shock+protein+Hsp104.">Protein disaggregation mediated by heat-shock protein Hsp104.</a> Nature. 372, 475-478 (1994).</li><li>Penna, T. C., Ishii, M., Junior, A. P., Cholewa, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+stability+of+recombinant+green+fluorescent+protein+(GFPuv)+at+various+pH+values.">Thermal stability of recombinant green fluorescent protein (GFPuv) at various pH values.</a> Appl. Biochem. Biotechnol. , 113-116 (2004).</li><li>Seliger, H. H., Buck, J. B., Fastie, W. G., McElroy, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Spectral+Distribution+of+Firefly+Light.">The Spectral Distribution of Firefly Light.</a> J. Gen. Physiol. 48, 95-104 (1964).</li><li>Shorter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mammalian+disaggregase+machinery:+Hsp110+synergizes+with+Hsp70+and+Hsp40+to+catalyze+protein+disaggregation+and+reactivation+in+a+cell-free+system.">The mammalian disaggregase machinery: Hsp110 synergizes with Hsp70 and Hsp40 to catalyze protein disaggregation and reactivation in a cell-free system.</a> PLoS One. 6, e26319 (2011).</li><li>Tkach, J. M., Glover, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleocytoplasmic+trafficking+of+the+molecular+chaperone+Hsp104+in+unstressed+and+heat-shocked+cells.">Nucleocytoplasmic trafficking of the molecular chaperone Hsp104 in unstressed and heat-shocked cells.</a> Traffic. 9, 39-56 (2008).</li><li>Unno, K., Kishido, T., Hosaka, M., Okada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Hsp70+subfamily,+Ssa,+in+protein+folding+in+yeast+cells,+seen+in+luciferase-transformed+ssa+mutants.">Role of Hsp70 subfamily, Ssa, in protein folding in yeast cells, seen in luciferase-transformed ssa mutants.</a> Biol. Pharm. Bull. 20, 1240-1244 (1997).</li><li>Verghese, J., Abrams, J., Wang, Y., Morano, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+the+heat+shock+response+and+protein+chaperones:+budding+yeast+(Saccharomyces+cerevisiae)+as+a+model+system.">Biology of the heat shock response and protein chaperones: budding yeast (Saccharomyces cerevisiae) as a model system.</a> Microbiol. Mol. Biol. Rev. 76, 115-158 (2012).</li></ol>

Bu yazıda modeli protein FFL-GFP maya disaggregase, Hsp104 protein yeniden-solübilizasyon ve onarım katkıda göstermek için kullanılmıştır. Enzimatik deneyler ve diferansiyel olarak mikroskobik yeniden katlama etkinliği ve verimi belirlemek için, aynı alt-tabaka proteini durumunu sorguya. Enzimatik kurtarma testlerinin sonuçları, verimsiz hsp104D mutant soyu içinde maksimum iyileşme değil sadece olduğunu göstermektedir, ancak açılımı stres başlangıç ​​büyüklüğü mutant suşu <s...

İnsanlarda Alzheimer, Parkinson ve Huntington hastalıkları gibi nörodejeneratif hastalıklar yanlış katlanması ve protein agregasyonu 10 ile bağlantılı olmuştur. Hücreler katlanan aktif yapıları 6 içine hücresel proteinlerin kinetik yakalama önlemek için moleküler şaperonlar kullanır. Chaperones hücre içinde karmaşık etkileşim ağları katılmak, ancak tamamen bu etkileşimlerin toplamı organizma proteostasis nasıl katkıda anlaşılamamıştır. Sitozolik protein katlanması çoğunluğu sorumlu başlıca chaperones biri 70 kD ısı şok proteini (Hsp70) aile 19&#39;dur. Bu, gösterilmiştir ki, Hsp70 azalır maya kaybı olgunlaşmamış heterolog bir şekilde eksprese OFF katlamak ve in vivo 18, 7, endojen proteinin, ornitin transcarbamoylase, yeniden kapatmak için yeteneği. Yakın-gerçek zamanlı çözünürlüğü ile katlama analiz yeteneği anlaşılmasını kolaylaştırmak nasıl ek hücresel faktörler devamBu Hsp70 bağımlı işlemine destek olmaktır. Buna ek olarak, katlama / reaksiyonlar refolding bu katkı proteinler tamamen bağımlı olmayabilir, bu nedenle testleri kinetik ve verimlilik büyük ve küçük değişiklikler hem saptamak için yeterli olmalıdır. Maya hücre disaggregase, Hsp104, toplu katlanan proteinleri tamir hayati bir rol oynar. Hsp104 homologlar mantar ve bitki tespit edilmiş olmasına rağmen, bu aile metazoans yok gibi görünmektedir. Bu tür Hsp110 ailesinin gibi diğer chaperones memeliler 16 bilinen Hsp104 faaliyetlerin bazı gerçekleştirmek ileri sürülmüştür. Hsp104 bir AAA +, heksamerik protein kompleksi olduğunu değişiklik protein agrega için maya fonksiyonları, refolding ve onarım 13 katkıda. Hsp70 maya, Ssa1, ve maya Hsp40, Ydj1 birlikte Hsp104, maya hücreleri 5, 8 denatüre OFF geri kazanımı için gereklidir. Küçük ısı şok proteini, Hsp26, aynı zamanda requi olduğu gösterilmiştirOFF 2 Hsp104 aracılı ayrıştırma için kırmızı. Ffl alt tabaka, aktif sahada lusiferin ve ATP ve oksijen, decarboxylates gerektiren bir konformasyonel değişimin ardından bağlanan bir iki-domenli bir proteindir oxyluciferin, karbon dioksit (CO2), adenozin monofosfat (AMP) ve ışık 11, serbest substrat 9, 3. Ticari olarak temin edilebilen OFF substrat, D-luciferase bir luminometrede 15 kullanılarak tespit edilebilir 550-570 nm arasında ışık yayılması ile sonuçlanır. OFF açılımı üzerine kimyasal veya ısıl işlemler ve hızla agrega gelen denatürasyon için zarif duyarlıdır. 39-45 arasında sıcaklıklara maruz kaldığında ° C OFF geri dönüşümlü gelişeceğini ve inaktif 12 olduğunu. Bunun tersine GFP ve türevleri gerilme 14 açılımı proteini için son derece dayanıklıdır. Bu nedenle, bu iki proteinin füzyon fonksiyonel G hedefleme yeteneğine sahip bir deneysel olarak oynak parçası olarak işlev sağlar OFFFP nüfus ve tek bir hücre düzeyde hem de floresan mikroskobu kullanarak görüntülenebilir mevduat hücre içi. Otomatik mikroskobu ile birleştiğinde bir yarı-otomatik modlu plaka okuyucu enzimatik test uygulanması kinetik ve reaksiyon refolding getirisi görülmemiş eş zamanlı değerlendirilmesi sağlar. Buna ek olarak, ökaryot modeli, Saccharomyces cerevisiae kolay moleküler genetik hassas protein kalitesi kontrol ağ manipülasyon ve hücresel stres tepkisi ve proteostasis katkıda bulunan yeni bir oyuncu tespit etmek Buluşa dayalı yaklaşımlar için fırsat hem de sağlar. Bu çalışmada, III-GFP ifade vahşi tip (WT) ve HSP104 silme suşları protein denatüre ısı şokuna tabi tutulur. OFF-GFP refolding bir iyileşme süresi boyunca ifade proteom tamiri için bir proxy okuma olarak bir enzimatik tahlil ve mikroskopi hem aracılığıyla izlenir. WT hücrelere karşılaştırıldığında, biz th göstermekE Hsp104 silme gerginlik denatüre OFF 2 reaktivasyonu içinde Hsp104 için bir rol kurulması önceki bulguları destekleyen, FFL-GFP refolding de ~% 60 daha az verimlidir.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagents</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Synergy MX Microplate Reader</td>
 <td>BioTek</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Olympus IX81-ZDC Confocal Inverted Microscope</td>
 <td>Olympus, Tokyo Japan</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lumitrac 200 white 96-well plates</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SlideBook 5.0 digital microscopy software</td>
 <td>Intelligent Imaging Innovations, Inc. Denver, CO, USA</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tris Base</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP152-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>(LiAc) Lithium Acetate</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L6883</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PEG (polyethelene glycol)</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP233-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>BP120-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMSO</td>
 <td>Malinckrodt</td>
 <td>4948</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SC</td>
 <td>Sunrise</td>
 <td>1300-030</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SC-URA</td>
 <td>Sunrise</td>
 <td>1306-030</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>cycloheximide</td>
 <td>Acros Organics</td>
 <td>357420050</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>D-luciferin</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L9504</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>low melt agarose</td>
 <td>NuSieve</td>
 <td>50082</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>immersion oil</td>
 <td>Cargille</td>
 <td>16484</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

coupled assays for monitoring protein refolding in saccharomyces cerevisiae

Protein katlanması / biyogenezi kombine süreçler olarak tanımlanan Proteostasis, refolding / onarım ve bozulması, zararlı sonuçlara 1 önlemek için korunması gerekir hassas bir hücresel dengedir. Bu dengeyi bozabilir iç ve dış faktörler protein toplama, toksisite ve hücre ölümüne yol açabilir. İnsanlarda bu, Huntington, Parkinson ve Alzheimer hastalıkları gibi nörodejeneratif hastalıkların 10 ile ilişkili semptomlar için önemli bir katkıda bulunan bir faktördür. Bu proteostasis bakım katılan proteinler bu zayıflatan hastalıklar için tedavi geliştirmek amacıyla tespit edilmesi bu nedenle önemlidir. Bu makale yeşil flüoresan protein (FFL-GFP) erimiş modeli protein ateşböceği lusiferaz kullanarak yakın gerçek zamanlı çözünürlükte in vivo protein katlanması izleme teknikleri anlatılmaktadır. OFF kısmı strese bağlı m son derece hassas olduğu için OFF-GFP eşsiz bir model kimerik proteindirenzim 12 inaktive isfolding ve toplama,. Lusiferaz aktivitesi, bir enzimatik deney kullanılarak izlenir, ve GFP kısmı otomatik mikroskopi kullanılarak çözülebilir ya da toplu OFF görüntülenmesi için bir yöntem temin edilmektedir. Bu birleştiğinde yöntemler refolding ve stres sonra enzimin fonksiyonel reaktivasyonu hem analiz etmek için iki paralel ve teknik olarak bağımsız yaklaşımlar içermektedir. Faaliyet kurtarma doğrudan daha iyi protein chaperones gibi protein kalite kontrol faktörler bu işlevleri gerçekleştirmek için işbirliği nasıl anlamak için ayrıştırma ve yeniden çözünmüş kinetiği ile ilişkili olabilir. Buna ek olarak, gen silme ya da mutasyon bu işlem için özel protein veya protein alt birimlerinin katılım test etmek için de kullanılabilir. Bu yazıda bu yaklaşım doğrulamak için protein refolding için, sistemi 5 refolding Hsp40/70/nucleotide değişim faktörü (NEF) ile ortak bilinen protein disaggregase Hsp104 13, katkıları inceleyin.

Maya disaggregase bağlıdır, Hsp104 verimli ısı denatüre proteinlerin yeniden kapatmak için. OFF-GFP faaliyeti bir parlaklık flaş testi Şekil 1 kullanarak, bir 25 dakika ısı şok sonrası izlenmiştir. Şekil 2&#39;de gösterilen bu otomatik test sonuçları, sonuçta WT hücrelerinde&gt;% 80 düzelme sağladı 90 dakika boyunca aktivitesinde kademeli bir artış saptandı. Hsp104Δ gerginlik aynı zaman dilimi içinde, orijinal aktivitesinin% 19 iyileşti. Ayrıca, ...

Watch this Scientific Journal Video about Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae at JoVE.com

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Bu makalede, araştırmak için bir ateş böceği lusiferaz-GFP füzyon proteini tanımının kullanımını tarif eder<em&gt; In vivo</emIçinde&gt; protein katlanması<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Bir model ısıyla denatüre edilmiş proteinin yeniden katlanması, bu tepkin madde kullanılarak floresan mikroskop ve protein kalite kontrol proteostasis ağ bileşenlerinin rollerini araştırmak için bir enzimatik deneyi ile aynı anda kontrol edilebilir.

İzlenmesi protein refolding için birleştiğinde Tahliller<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

Research

JoVE Journal

Biology

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Diseksiyonu Saccharomyces cerevisiae Asci

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Yağ Asidi Kantitatif Phosphoproteomics Uyarılmış Saccharomyces cerevisiae</em

This protocol describes the growth and stimulation, with the fatty acid oleate, of isotopically heavy and light S. cerevisiae cells. Cells are ground ...

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Mikroarray Analizi için Saccharomyces cerevisiae</em

In this protocol, gene expression in yeast (Saccharomyces cerevisiae) is changed after exposure to oxidative stress induced by the addition of hydrogen ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

Maya İzleme Mitophagy Floresan Mikroskopi Testi Saccharomyces cerevisiae

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Yılında Kistik Fibrozis Transmembran İletkenlik Regülatörü Protein İfadesi ve Arıtma Saccharomyces cerevisiae

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Floresan kullanarak mRNA Moleküllerin Görselleştirme ve Analiz<em&gt; Yerinde</emIn&gt; Hibridizasyon<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Olarak ifade edilmiştir kistik fibroz transmembran kondüktans regülatörü Protein Saflaştırılması<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Rapid Identification of Chemical Genetic Interactions in Saccharomyces cerevisiae

Kimyasal Genetik Etkileşimleri Hızlı Kimlik<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Determining the mode of action of bioactive chemicals is of interest to a broad range of academic, pharmaceutical, and industrial scientists. ...

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in Saccharomyces cerevisiae

Büyüme-tabanlı Belirlenmesi ve Protein Parçalanabilirliklerinin Genetik Talepler biyokimyasal Onay<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Regulated protein degradation is crucial for virtually every cellular function. Much of what is known about the molecular mechanisms and genetic ...

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

Evrim Yöntemi yönettiği<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;: Mutant Kütüphane Oluşturma ve Tarama

Directed evolution in Saccharomyces cerevisiae offers many attractive advantages when designing enzymes for biotechnological applications, a process that ...