Name: rnai-mediated double gene knockdown and gustatory perception measurement in honey bees (apis mellifera)
Uploaded: 2013-07-25T08:55:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera at JoVE.com

लेखकों प्रयोग की सहायता के लिए आयलैंड Fennern धन्यवाद देना चाहूंगा. इस काम नॉर्वे के अनुसंधान परिषद (180504, 185306 और 191699), बेंच चैरिटेबल ट्रस्ट, और उम्र बढ़ने पर राष्ट्रीय संस्थान (एनआईए P01 AG22500) द्वारा वित्त पोषित किया गया.

भाग 1: आरएनएआई की मध्यस्थता डबल जीन पछाड़ना 1. dsRNA संश्लेषण <ol><li> वीजी, खासियत और मधु मक्खी जीनोम में नहीं है जो एक नियंत्रण जीन एन्कोडिंग हरी प्रतिदीप्ति प्रोटीन (GFP) को लक्षित dsRNAs के डिजाइन प?...

<ol>
	<li>Okamura, K., Ishizuka, A., Siomi, H., Siomi, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+Argonaute+proteins+in+small+RNA-directed+RNA+cleavage+pathways.">Distinct roles for Argonaute proteins in small RNA-directed RNA cleavage pathways.</a> Genes Dev. 18, 1655-1666 (2004).</li><li>Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+RNAi+for+the+masses.">Mammalian RNAi for the masses.</a> Trends Genet. 19, 9-12 (2003).</li><li>Huvenne, H., Smagghe, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+dsRNA+uptake+in+insects+and+potential+of+RNAi+for+pest+control:+a+review.">Mechanisms of dsRNA uptake in insects and potential of RNAi for pest control: a review.</a> J. Insect Physiol. 56, 227-235 (2010).</li><li>Beye, M., Hartel, S., Hagen, A., Hasselmann, M., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+developmental+gene+silencing+in+the+honey+bee+using+a+homeobox+motif.">Specific developmental gene silencing in the honey bee using a homeobox motif.</a> Insect Mol. Biol. 11, 527-532 (2002).</li><li>Amdam, G. V., Simoes, Z. L., Guidugli, K. R., Norberg, K., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+vitellogenin+gene+function+in+adult+honeybees+by+intra-abdominal+injection+of+double-stranded+RNA.">Disruption of vitellogenin gene function in adult honeybees by intra-abdominal injection of double-stranded RNA.</a> BMC Biotechnol. 3, 1 (2003).</li><li>Patel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+making+of+a+queen:+TOR+pathway+governs+diphenic+caste+development.">The making of a queen: TOR pathway governs diphenic caste development.</a> PLoS ONE. 6, e509 (2007).</li><li>Amdam, G. V., Norberg, K., Page, R. E., Erber, J., Scheiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Downregulation+of+vitellogenin+gene+activity+increases+the+gustatory+responsiveness+of+honey+bee+workers+(Apis+mellifera).">Downregulation of vitellogenin gene activity increases the gustatory responsiveness of honey bee workers (Apis mellifera).</a> Behav. Brain Res. 169, 201-205 (2006).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+honey+bee+IRS+gene+biases+behavior+toward+food+rich+in+protein.">Down-regulation of honey bee IRS gene biases behavior toward food rich in protein.</a> PLoS Genet. 6, e1000896 (2010).</li><li>Wang, Y., Brent, C. S., Fennern, E., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gustatory+perception+and+fat+body+energy+metabolism+are+jointly+affected+by+vitellogenin+and+juvenile+hormone+in+honey+bees.">Gustatory perception and fat body energy metabolism are jointly affected by vitellogenin and juvenile hormone in honey bees.</a> PLoS Genet. 8, e1002779 (2012).</li><li>Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injection+of+dsRNA+into+Female+A.+aegypti+Mosquitos.">Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos.</a> J. Vis. Exp. (5), e215 (2007).</li><li>Mussig, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+disruption+of+the+NMDA+receptor+subunit+NR1+in+the+honeybee+brain+selectively+impairs+memory+formation.">Acute disruption of the NMDA receptor subunit NR1 in the honeybee brain selectively impairs memory formation.</a> J. Neurosci. 30, 7817-7825 (2010).</li><li>Stove, V., Smits, K., Naessens, E., Plum, J., Verhasselt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+gene+knock-down+by+a+single+lentiviral+vector+expressing+an+array+of+short+hairpin+RNAs.">Multiple gene knock-down by a single lentiviral vector expressing an array of short hairpin RNAs.</a> Electron J. Biotechnol. 19, 13 (2006).</li><li>Sun, D., Melegari, M., Sridhar, S., Rogler, C. E., Zhu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-miRNA+hairpin+method+that+improves+gene+knockdown+efficiency+and+provides+linked+multi-gene+knockdown.">Multi-miRNA hairpin method that improves gene knockdown efficiency and provides linked multi-gene knockdown.</a> Biotech. 41, 59-63 (2006).</li><li>Ament, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+ultraspiracle+influences+honey+bee+social+behavior+and+behavior-related+gene+expression.">The transcription factor ultraspiracle influences honey bee social behavior and behavior-related gene expression.</a> PLoS Genet. 8, e1002596 (2012).</li><li>Amdam, G. V., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hive+bee+to+forager+transition+in+honeybee+colonies:+the+double+repressor+hypothesis.">The hive bee to forager transition in honeybee colonies: the double repressor hypothesis.</a> J. Theor. Biol. 223, 451-464 (2003).</li><li>Pankiw, T., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+thresholds+to+sucrose+predict+foraging+division+of+labor+in+honeybees.">Response thresholds to sucrose predict foraging division of labor in honeybees.</a> Behav. Ecol. Sociobiol. 47, 265-267 (2000).</li><li>Pankiw, T., Nelson, M., Page, R. E., Fondrk, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+communal+crop:+modulation+of+sucrose+response+thresholds+of+pre-foraging+honey+bees+with+incoming+nectar+quality.">The communal crop: modulation of sucrose response thresholds of pre-foraging honey bees with incoming nectar quality.</a> Behav. Ecol. Sociobiol. 55, 286-292 (2004).</li><li>Jaycox, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+Changes+in+Worker+Honey+Bees+(Apis+mellifera+L.)+after+Injection+with+Synthetic+Juvenile+Hormone+(Hymenoptera:+Apidae).">Behavioral Changes in Worker Honey Bees (Apis mellifera L.) after Injection with Synthetic Juvenile Hormone (Hymenoptera: Apidae).</a> J. Kan. Entomol. Soc. 49, 165-170 (1976).</li><li>Jaycox, E. R., Skowronek, W., Guynn, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+changes+in+worker+honey+bees+(Apis+mellifera)+induced+by+injections+of+a+juvenile+hormone+mimic.">Behavioral changes in worker honey bees (Apis mellifera) induced by injections of a juvenile hormone mimic.</a> Ann. Entomol. Soc. Am. 67, 529-534 (1974).</li><li>Scheiner, R., Pluckhahn, S., Oney, B., Blenau, W., Erber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+pharmacology+of+octopamine,+tyramine+and+dopamine+in+honey+bees.">Behavioural pharmacology of octopamine, tyramine and dopamine in honey bees.</a> Behav. Brain Res. 136, 545-553 (2002).</li><li>Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+a+juvenile+hormone+analogue+on+honey+bee+foraging+behaviour+and+alarm+pheromone+production.">Effects of a juvenile hormone analogue on honey bee foraging behaviour and alarm pheromone production.</a> J. Insect. Physiol. , 277-282 (1985).</li><li>Giurfa, M., Malun, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+mechanosensory+conditioning+of+the+proboscis+extension+reflex+in+honeybees.">Associative mechanosensory conditioning of the proboscis extension reflex in honeybees.</a> Lear Memory. 11, 294-302 (2004).</li><li>Scheiner, R., Page, R. E., Erber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+genotype,+foraging+role,+and+sucrose+responsiveness+on+the+tactile+learning+performance+of+honey+bees+(Apis+mellifera+L.).">The effects of genotype, foraging role, and sucrose responsiveness on the tactile learning performance of honey bees (Apis mellifera L.).</a> Neurobiol. Learn Mem. 76, 138-150 (2001).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDK1+and+HR46+gene+homologs+tie+social+behavior+to+ovary+signals.">PDK1 and HR46 gene homologs tie social behavior to ovary signals.</a> PLoS ONE. 4, e4899 (2009).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+behaviorally+associated+gene+networks+in+worker+honey+bee+ovaries.">Regulation of behaviorally associated gene networks in worker honey bee ovaries.</a> J. Exp. Biology. 215, 124-134 (2012).</li><li>Amdam, G. V., Csondes, A., Fondrk, M. K., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+social+behaviour+derived+from+maternal+reproductive+traits.">Complex social behaviour derived from maternal reproductive traits.</a> Nature. 439, 76-78 (2006).</li><li>Amdam, G. V., Ihle, K. E., Page, R. E., Pfaff, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Hormones, Brain and Behavio. , (2009).</li><li>Guidugli, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitellogenin+regulates+hormonal+dynamics+in+the+worker+caste+of+a+eusocial+insect.">Vitellogenin regulates hormonal dynamics in the worker caste of a eusocial insect.</a> FEBS Letters. 579, 4961-4965 (2005).</li><li>Corona, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=juvenile+hormone,+insulin+signaling,+and+queen+honey+bee+longevity.">juvenile hormone, insulin signaling, and queen honey bee longevity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7128-7133 (2007).</li><li>Sinha, S., Ling, X., Whitfield, C. W., Zhai, C., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+scan+for+cis-regulatory+DNA+motifs+associated+with+social+behavior+in+honey+bees.">Genome scan for cis-regulatory DNA motifs associated with social behavior in honey bees.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 16352-16357 (2006).</li><li>Amdam, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+control+of+the+yolk+precursor+vitellogenin+regulates+immune+function+and+longevity+in+honeybees.">Hormonal control of the yolk precursor vitellogenin regulates immune function and longevity in honeybees.</a> Exp. Gerontol. 39, 767-773 (2004).</li><li>Wang, Q. C., Nie, Q. H., Feng, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference:+antiviral+weapon+and+beyond.">RNA interference: antiviral weapon and beyond.</a> World J. Gastroenterol. 9, 1657-1661 (2003).</li><li>Carmell, M. A., Xuan, Z., Zhang, M. Q., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Argonaute+family:+tentacles+that+reach+into+RNAi,+developmental+control,+stem+cell+maintenance,+and+tumorigenesis.">The Argonaute family: tentacles that reach into RNAi, developmental control, stem cell maintenance, and tumorigenesis.</a> Genes Dev. 16, 2733-2742 (2002).</li><li>Hunt, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+genomics+of+honeybee+foraging+and+nest+defense.">Behavioral genomics of honeybee foraging and nest defense.</a> Naturwissenschaften. 94, 247-267 (2007).</li><li>Pankiw, T., Waddington, K. D., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+sucrose+response+thresholds+in+honey+bees+(Apis+mellifera+L.):+influence+of+genotype,+feeding,+and+foraging+experience.">Modulation of sucrose response thresholds in honey bees (Apis mellifera L.): influence of genotype, feeding, and foraging experience.</a> J. Comp. Physiol. A. 187, 293-301 (2001).</li><li>Pankiw, T., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+pheromones,+hormones,+and+handling+on+sucrose+response+thresholds+of+honey+bees+(Apis+mellifera+L.).">Effect of pheromones, hormones, and handling on sucrose response thresholds of honey bees (Apis mellifera L.).</a> J. Comp. Physiol. A. Neuroethol. Sens. Neural. Behav. Physiol. 189, 675-684 (2003).</li></ol>

हमारे अध्ययन से एक साथ वयस्क कीड़े में दो जीन नीचे दस्तक करने के लिए पहला प्रयास है. हमारे परिणाम dsRNA इंजेक्शन (एक इंजेक्शन और दो ​​दिवसीय इंजेक्शन) के दो रणनीतियों डबल जीन दमन, और वी.जी. और खासियत क?...

शाही सेना हस्तक्षेप (आरएनएआई) यूकेरियोटिक जीवों की एक विस्तृत विविधता में पाया जाता है जो आरएनए आधारित बाद ट्रांसक्रिप्शनल जीन मुंह बंद है. आरएनएआई की प्रक्रिया अंतर्जात या exogenous डबल असहाय शाही सेना (dsRNA) व्यापारियों से शुरू हो रहा है. dsRNA बांध और छोटे टुकड़े (20-25 बीपी) को dsRNA cleaves जो ribonuclease प्रोटीन पासा खेलनेवाला सक्रिय. फिर dsRNA गाइड के छोटे टुकड़े आर्गोनॉट प्रोटीन से पूरक mRNAs की एक पहचान है और दरार, आरएनए प्रेरित मुंह बंद जटिल (आरआईएससी) 1 का एक उत्प्रेरक घटक. स्तनधारियों में, 30 NT के तुलना में अब dsRNAs, शाही सेना टेप 2 की अविशिष्ट गिरावट की ओर जाता है जो एक antiviral प्रतिक्रिया (इंटरफेरॉन प्रतिक्रिया, IFN) को सक्रिय करें. हालांकि, लंबे dsRNAs इस IFN 3 की कमी के बाद से वहाँ कीड़े में प्रभावी और विशिष्ट साबित किया है. लांग dsRNAs विभिन्न कीट प्रजातियों में लक्ष्य जीन के डाउनरेगुलेशन के लिए इस्तेमाल किया गया है. मधुमक्खियां pion में से एक हैंEER कीट जीवों में जो विकास और व्यवहार में कई महत्वपूर्ण जीनों के कार्यों dsRNA 4,5 का उपयोग करके खुलासा किया गया है. कई dsRNA प्रसव के तरीके मधु मक्खियों में प्रदर्शन किया गया है: dsRNA इंजेक्शन मधु मक्खी भ्रूण 4 और वयस्क मधुमक्खियों 7,8 में जीन पछाड़ना के लिए एक प्रभावी तरीका है, जबकि dsRNA खिला कुशलता, मधु मक्खी लार्वा 6 में लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति downregulates. कीड़ों के लिए dsRNA लगाने से प्रदर्शित जीन पछाड़ना प्रभाव क्षणिक और स्थानीय हैं. अध्ययन पेट dsRNA इंजेक्शन और वक्ष dsRNA इंजेक्शन दोनों को प्रभावी ढंग से कीड़े 9,10 के पेट की चर्बी शरीर की कोशिकाओं में लक्ष्य जीन की अभिव्यक्ति को दबाने दिखाया है. DsRNA कोशिकाओं 10 स्नान कर रहे हैं जहां hemolymph से dsRNA लेने के लिए सक्षम हैं, पेट और वक्ष cavities और वसा शरीर की कोशिकाओं में इंजेक्ट किया जाता है. हालांकि, इस तरह के अंडाशय और दिमाग के रूप में अन्य अंगों में जीन या तो द्वारा लक्षित नहीं किया जा सकताउदर या वक्ष इंजेक्शन. मधु मक्खी के मस्तिष्क में जीन को लक्षित करने के लिए, dsRNA के मस्तिष्क इंजेक्शन भी प्रभावी ढंग से स्थानीय मस्तिष्क क्षेत्रों के 11 में लक्ष्य जीन की अभिव्यक्ति को प्रभावित करती है, जो प्रदर्शन किया गया है. यहाँ, हम केवल वयस्क मधु मक्खियों में अधिक आमतौर पर इस्तेमाल किया है, जो पेट dsRNA इंजेक्शन दस्तावेज़. आरएनएआई मुख्य रूप से एक जीन को लक्षित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है और जीन समारोह प्रकट करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण किया गया है. हालांकि, किसी भी जीन दूसरों से अलग नहीं है, यह जटिल विनियामक नेटवर्क में है. एक जैविक प्रक्रिया को समझने के लिए एक महत्वपूर्ण जीन कई जीनों के एक साथ जोड़तोड़ के बजाय एक ही जीन पछाड़ना की आवश्यकता है, जो एक दूसरे के साथ बातचीत कैसे काटना है. स्तनधारी सेल लाइनों में वैज्ञानिकों वितरण प्रणाली 12 या बहु microRNA (miRNA) बाल के लिये कांटा डिजाइन 13 का उपयोग करते हुए एक साथ बाधा दो या तीन जीनों में सफल रहा है. लेकिन कीड़ों में, कई जीन knockdowns अभी भी untested हैं. यहाँ, हम presenएक डबल जीन पछाड़ना प्राप्त कर सकते हैं जो टी अलग इंजेक्शन रणनीतियों. एक जर्दी प्रोटीन अग्रदूत encodes, और किशोर हार्मोन (जे) के लिए एक ख्यात रिसेप्टर encodes और जो ultraspiracle (खासियत) मधु मक्खियों में जेएच 14 के लिए प्रतिक्रियाओं mediating एक प्रतिलेखन कारक के रूप में सेवा कर सकता है जो vitellogenin (वीजी): हम दो जीन लक्ष्य. वी.जी. और झा एक राय पाश 15 में एक दूसरे को विनियमित करने और मधु मक्खी व्यवहार विनियमन 9 में शामिल रहे हैं. डबल जीन पछाड़ना का उपयोग करना, हम उपद्रव वी.जी. दोनों और झा रास्ते, और वे संयुक्त रूप से मधु मक्खी व्यवहार और शरीर विज्ञान और कैसे वी.जी., खासियत और झा 9 बातचीत को प्रभावित कैसे पता चलता है. स्वाद धारणा मधु मक्खी सामाजिक व्यवहार 16 के लिए एक व्यवहार कारक है. उच्च स्वाद धारणा के साथ व्यवहार के विकास, घोंसला मधुमक्खियों behaviorally परिपक्व तेजी से, और आमतौर पर प्रारंभिक जीवन में चारे के संदर्भ में और पराग 16,17 एकत्र करने के लिए पसंद करते हैं. हालांकि नियामक मीटरस्वाद धारणा अंतर्निहित echanisms पढ़ाई स्वाद धारणा आंतरिक ऊर्जा metabolisms के 9, हार्मोनल स्राव 18,19 और biogenetic अमाइन 20 रास्ते से जुड़ा हुआ है पता चला है कि, अभी भी स्पष्ट नहीं कर रहे हैं. वी.जी. और झा दोनों नियमन स्वाद धारणा 7,21 महत्वपूर्ण हार्मोन संबंधी नियामकों हैं. प्रयोगशाला में, मधु मक्खियों में स्वाद धारणा के विभिन्नता अलग sucrose के समाधान के लिए सूंड विस्तार प्रतिक्रिया (प्रति) के परीक्षण के द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है. प्रत्येक मधुमक्खी 0.1 की एक आरोही एकाग्रता श्रृंखला, 0.3, 1, 3, 10, 30% sucrose के द्वारा पीछा पानी की एक छोटी बूंद के साथ उसके एंटीना दोनों छू द्वारा परीक्षण किया जाता है. पानी या सूक्रोज की एक छोटी बूंद प्रत्येक एंटीना को छुआ है जब एक मधुमक्खी पूरी तरह से उसे सूंड फैली अगर सकारात्मक प्रतिक्रिया उल्लेख किया है. समाधान के लिए सकारात्मक प्रतिक्रियाओं की संख्या के आधार पर, प्रत्येक व्यक्ति के स्वाद धारणा स्तर 16 निर्धारित किया जा सकता है. हालांकि, प्रति के आवेदन जी मापने तक सीमित नहीं हैustatory धारणा. प्रति भी ऐसी तुष्टि बनाम भूख के रूप में मधुमक्खियों के चयापचय राज्य का परीक्षण करने के लिए एक प्रभावी तरीका है. सुक्रोज के लिए अधिक से अधिक प्रतिक्रियाओं के साथ मधुमक्खियों सामान्य में hungrier (वैंग और Amdam, अप्रकाशित डेटा) हैं. इसके अलावा, प्रति प्रतिमान मधु मक्खियों में साहचर्य सीखने और स्मृति में भी इस्तेमाल किया जा सकता है. इस मामले में मधुमक्खियों का एक गंध के साथ sucrose पानी की मौजूदगी संबद्ध करने के लिए प्रशिक्षित किया जाएगा. मधुमक्खियों संघ जानने के लिए, गंध की केवल उपस्थिति सूक्रोज 22,23 साथ उन्हें पुरस्कृत बिना एक सकारात्मक सूंड प्रतिक्रिया पैदा कर सकते हैं. इस वीडियो में, हम पिछले एक अध्ययन 9 में वी.जी. और खासियत डबल पछाड़ना के साथ जोड़ा गया है, जो स्वाद धारणा का मूल्यांकन करने के प्रति प्रदर्शन करने के लिए दिखा.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>GE Healthcare PCR beads in 96 well plate</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>27-9557-01</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>QIAquick PCR purification kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28104</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>RiboMax T7 RNA production system</td>
			<td>Promega</td>
			<td>P1300</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Trizol LS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10296028</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Chloroform:Isoamyl alcohol 24:1</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0549</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>isopropyl alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I9516</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hamilton micro syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80301</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>30G BD disposable needles</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84097</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>30960</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Stereo dissection microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>S6D</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Insect pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26000-25</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Wax plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

rnai-mediated double gene knockdown and gustatory perception measurement in honey bees (apis mellifera)

इस वीडियो डबल असहाय शाही सेना (dsRNA) इंजेक्शन का उपयोग कर मधु मक्खियों में एक साथ दो जीन downregulate जो शाही सेना हस्तक्षेप (आरएनएआई) के उपन्यास तकनीक को दर्शाता है. यह भी स्वाद धारणा को मापने के लिए सूंड विस्तार प्रतिक्रिया (प्रति) परख के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है. आरएनएआई की मध्यस्थता जीन पछाड़ना लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति downregulating एक प्रभावी तकनीक है. इस तकनीक को आम तौर पर एक जीन में गड़बड़ी के लिए इस्तेमाल किया, लेकिन यह बातचीत और जीन के बीच संयुक्त प्रभाव का पता लगाने के लिए सीमाएँ हैं. इस वीडियो के पहले भाग में, हम एक साथ दो जीन (डबल जीन पछाड़ना कहा जाता है) नीचे दस्तक करने के लिए दो रणनीतियों उपस्थित थे. हम दोनों रणनीतियों को प्रभावी ढंग से एक नियामक प्रतिक्रिया पाश में हैं जो दो जीन, vitellogenin (वीजी) और ultraspiracle (खासियत), को दबाने में सक्षम हैं दिखा. इस दोहरे जीन पछाड़ना दृष्टिकोण जीन के बीच अंतर्संबंधों टुकड़े करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और आसानी से लागू किया जा सकता हैविभिन्न कीट प्रजातियों. इस वीडियो के दूसरे भाग डबल जीन पछाड़ना के इलाज के बाद मधु मक्खियों में सूंड विस्तार प्रतिक्रिया (प्रति) परख का एक प्रदर्शन है. प्रति परख मधु मक्खियों, एक मधु मक्खी के व्यवहार परिपक्वता है कि कितनी तेजी के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है जिसमें स्वाद धारणा को मापने के लिए एक मानक परीक्षण है. घोंसला मधुमक्खियों के ग्रेटर स्वाद धारणा अक्सर पराग में विशेषज्ञता foraging और foraging की शुरुआत में एक पहले की उम्र के साथ जुड़ा हुआ है, जो वृद्धि हुई व्यवहार के विकास को दर्शाता है. इसके अलावा, प्रति परख मधु मक्खियों में तुष्टि या भूख की चयापचय राज्यों की पहचान करने के लिए लागू किया जा सकता है. अंत में, परख प्रति मधुमक्खियों भी व्यापक रूप से मधु मक्खियों में सीखने और स्मृति के अध्ययन के लिए प्रयोग किया जाता है कंडीशनिंग के लिए अलग गंध उत्तेजनाओं बाँधना के साथ संयुक्त.

एकल इंजेक्शन और दो ​​दिन इंजेक्शन रणनीतियों दोनों काफी मधु मक्खियों में प्रतिलेख के स्तर vg (एक तरह से एनोवा, पी &lt;0.001) (2A चित्रा) और खासियत (एक तरह से एनोवा, पी &lt;0.001) (चित्रा 2B) कम dsRNA के बाद छह ?...

Watch this Scientific Journal Video about RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera at JoVE.com

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera

इस प्रोटोकॉल में, हम एक साथ मधु मक्खियों में दो जीन (डबल जीन पछाड़ना) को दबाने कि दो रणनीतियों का वर्णन है. तो फिर हम मधु मक्खी स्वाद धारणा पर डबल जीन पछाड़ना के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए सूंड विस्तार प्रतिक्रिया (प्रति) परख का उपयोग कैसे प्रस्तुत करते हैं.

मधु मक्खियों में आरएनएआई की मध्यस्थता डबल जीन मारकर गिरा दिया और स्वाद बोध मापन (<em&gt; एपीआई mellifera</em&gt;)

This video demonstrates novel techniques of RNA  interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees  using double-stranded RNA ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees (Apis mellifera)

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

डबल प्रतिदीप्ति बगल में</emताजा ब्रेन धारा में> संकरण

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees (Apis mellifera)

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees Apis mellifera

मधुमक्खियों में सूंड एक्सटेंशन रिस्पांस के शास्त्रीय कंडीशनिंग में व्यवहार भेषजगुण ( एपिस mellifera)

Honeybees (Apis mellifera) are well known for their communication and orientation skills and for their impressive learning capability1,2. Because the ...

Creating Objects and Object Categories for Studying Perception and Perceptual Learning

बोध और परपेचुअल सीखने के अध्ययन के लिए वस्तुओं और वस्तु श्रेणियाँ बनाना

In order to quantitatively study object perception, be it perception by biological systems or by machines, one needs to create objects and object ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

जीर्ण के लिए वयस्क जन्म घ्राण न्यूरॉन्स के चयनात्मक वायरल transduction Vivo में Optogenetic उत्तेजना

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

MPI CyberMotion Simulator: Implementation of a Novel Motion Simulator to Investigate Multisensory Path Integration in Three Dimensions

MPI CyberMotion सिम्युलेटर: एक उपन्यास प्रस्ताव सिम्युलेटर का कार्यान्वयन तीन आयाम में multisensory पथ एकता जांच

Path integration is a process in which self-motion is integrated over time to obtain an estimate of one's current position relative to a starting point 1. ...

Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees (Apis mellifera L.)

Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees Apis mellifera L.

स्पर्श कंडीशनिंग और हनी मधुमक्खियों में antennal नमूनाकरण रणनीति का आंदोलन विश्लेषण (<em&gt; एपीआई mellifera</emएल)

Honey bees (Apis mellifera L.) are eusocial insects and well known for their complex division of labor and associative learning capability1, 2. The worker ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

में घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन्स के पूरा पर्वत immunolabeling<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; एंटीना

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Double-barreled and Concentric Microelectrodes for Measurement of Extracellular Ion Signals in Brain Tissue

मस्तिष्क के ऊतकों में मापन कोशिकी आयन के संकेतों के लिए डबल बैरल और गाढ़ा Microelectrodes

Electrical activity in the brain is accompanied by significant ion fluxes across membranes, resulting in complex changes in the extracellular ...

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees (Bombus terrestris)

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees Bombus terrestris

एक उपन्यास व्यवहार परख व्यक्ति की स्वाद जवाब, स्वतंत्र रूप से चलती Bumble मधुमक्खियों जांच करने के लिए (<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from ...

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

रोका और मुक्त उड़ान मधु मक्खियों की Neuropharmacological हेरफेर,<em&gt; एपीआई mellifera</em

Honey bees demonstrate astonishing learning abilities and advanced social behavior and communication. In addition, their brain is small, easy to visualize ...