Name: acquiring fluorescence time-lapse movies of budding yeast and analyzing single-cell dynamics using grafts
Uploaded: 2013-07-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS at JoVE.com

हम सॉफ्टवेयर पर टिप्पणी के लिए एमिली जैक्सन, यहोशू Zeidman, और निकोलस रेन धन्यवाद. इस काम GM95733 (समुद्री मील दूर करने के लिए), BBBE 103,316 और एमआईटी स्टार्टअप धन (समुद्री मील दूर करने के लिए) द्वारा वित्त पोषित किया गया.

1. एक microfluidic चैंबर में बढ़ते एकल खमीर कोशिकाओं के फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी सिनेमा प्राप्त करें <ol><li> एक हौसले बढ़ रही थाली से कोशिकाओं के साथ 1 मिलीलीटर अनुसूचित जाति मीडिया (2% ग्लूकोज और एमिनो एसिड की पूर?...

<ol>
	<li>Locke, J. C. W., Elowitz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+movies+to+analyse+gene+circuit+dynamics+in+single+cells.">Using movies to analyse gene circuit dynamics in single cells.</a> Nature Reviews. Microbiology. 7 (5), 383-392 (2009).</li><li>Rosenfeld, N., Young, J. W., Alon, U., Swain, P. S., Elowitz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Regulation+at+the+Single-Cell+Level.">Gene Regulation at the Single-Cell Level.</a> Science. 307 (5717), 1962-1965 (2005).</li><li>Colman-Lerner, A., Gordon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+cell-to-cell+variation+in+a+cell-fate+decision+system.">Regulated cell-to-cell variation in a cell-fate decision system.</a> Nature. 437 (7059), 699-706 (2005).</li><li>Vega, N. M., Allison, K. R., Khalil, A. S., Collins, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling-mediated+bacterial+persister+formation.">Signaling-mediated bacterial persister formation.</a> Nature Chemical Biology. 8 (5), 431-433 (2012).</li><li>Larson, D. R., Zenklusen, D., Wu, B., Chao, J. A., Singer, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-Time+Observation+of+Transcription+Initiation+and+Elongation+on+an+Endogenous+Yeast+Gene.">Real-Time Observation of Transcription Initiation and Elongation on an Endogenous Yeast Gene.</a> Science. 332 (6028), 475-478 (2011).</li><li>Golding, I., Paulsson, J., Zawilski, S., Cox, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+kinetics+of+gene+activity+in+individual+bacteria.">Real-time kinetics of gene activity in individual bacteria.</a> Cell. 123 (6), 1025-1061 (2005).</li><li>Suter, D. M., Molina, N., Gatfield, D., Schneider, K., Schibler, U., Naef, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+Genes+Are+Transcribed+with+Widely+Different+Bursting+Kinetics.">Mammalian Genes Are Transcribed with Widely Different Bursting Kinetics.</a> Science. 332 (6028), 472-474 (2011).</li><li>Cookson, N. A., Cookson, S. W., Tsimring, L. S., Hasty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle-dependent+variations+in+protein+concentration.">Cell cycle-dependent variations in protein concentration.</a> Nucleic Acids Research. 38 (8), 2676-2681 (2010).</li><li>Zopf, C. J., Quinn, K., Zeidman, J., Maheshri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cycle+dependence+of+transcription+dominates+noise+in+gene+expression.">Cell-cycle dependence of transcription dominates noise in gene expression.</a> , (2013).</li><li>Kaufmann, B. B., Yang, Q., Mettetal, J. T., Van Oudenaarden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heritable+stochastic+switching+revealed+by+single-cell+genealogy.">Heritable stochastic switching revealed by single-cell genealogy.</a> PLoS Biology. 5 (9), e239 (2007).</li><li>Cookson, S., Ostroff, N., Pang, W. L., Volfson, D., Hasty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+dynamics+of+single-cell+gene+expression+over+multiple+cell+cycles.">Monitoring dynamics of single-cell gene expression over multiple cell cycles.</a> Molecular Systems Biology. 1 (1), 2005.0024 (2005).</li><li>Paliwal, S., Iglesias, P. A., Campbell, K., Hilioti, Z., Groisman, A., Levchenko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAPK-mediated+bimodal+gene+expression+and+adaptive+gradient+sensing+in+yeast.">MAPK-mediated bimodal gene expression and adaptive gradient sensing in yeast.</a> Nature. 446 (7131), 46-51 (2007).</li><li>Charvin, G., Cross, F. R., Siggia, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+device+for+temporally+controlled+gene+expression+and+long-term+fluorescent+imaging+in+unperturbed+dividing+yeast+cells.">A microfluidic device for temporally controlled gene expression and long-term fluorescent imaging in unperturbed dividing yeast cells.</a> PloS One. 3 (1), e1468 (2008).</li><li>Gordon, A., Colman-Lerner, A., Chin, T. E., Benjamin, K. R., Yu, R. C., Brent, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+quantification+of+molecules+and+rates+using+open-source+microscope-based+cytometry.">Single-cell quantification of molecules and rates using open-source microscope-based cytometry.</a> Nat. Meth. 4 (2), 175-181 (2007).</li><li>Otsu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Threshold+Selection+Method+from+Gray-Level+Histograms.">A Threshold Selection Method from Gray-Level Histograms.</a> IEEE Trans. Sys. Man. Cyber. 9 (1), 62-66 (1979).</li><li>Goranov, A. I., Cook, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rate+of+cell+growth+is+governed+by+cell+cycle+stage.">The rate of cell growth is governed by cell cycle stage.</a> Genes &amp; Development. 23 (12), 1408-1422 (2009).</li><li>To, T. -. L., Maheshri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+Can+Induce+Bimodality+in+Positive+Transcriptional+Feedback+Loops+Without+Bistability.">Noise Can Induce Bimodality in Positive Transcriptional Feedback Loops Without Bistability.</a> Science. 327 (5969), 1142-1145 (2010).</li><li>O'Neill, E. M., Kaffman, A., Jolly, E. R., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+PHO4+nuclear+localization+by+the+PHO80-PHO85+cyclin-CDK+complex.">Regulation of PHO4 nuclear localization by the PHO80-PHO85 cyclin-CDK complex.</a> Science. 271 (5246), 209-212 (1996).</li><li>Raser, J. M., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+stochasticity+in+eukaryotic+gene+expression.">Control of stochasticity in eukaryotic gene expression.</a> Science. 304 (5678), 1811-1814 (2004).</li></ol>

ऊपर प्रोटोकॉल microfluidics में या सॉफ्टवेयर के विकास में सीमित अनुभव के साथ प्रतिदीप्ति समय श्रृंखला डेटा प्राप्त करने और विश्लेषण करने के लिए एक सरल विधि का वर्णन करता है. यह एक एकल खमीर कोशिकाओं के समय चूक प?...

जीन अभिव्यक्ति की एकल कोशिका विश्लेषण जीन विनियमन के कई पहलुओं के बारे में हमारी समझ को आगे बढ़ाया गया है. प्रवाह cytometry या माइक्रोस्कोपी का उपयोग फ्लोरोसेंट संवाददाता अभिव्यक्ति की स्टेटिक स्नैपशॉट एकल कक्ष अभिव्यक्ति के वितरण पर उपयोगी जानकारी प्रदान करते हैं, लेकिन इतिहास और सीधे जीन अभिव्यक्ति गतिशीलता को सूचित करने के लिए आवश्यक समय श्रृंखला डेटा के विकास की कमी है. प्रतिदीप्ति समय चूक माइक्रोस्कोपी एकल कक्ष माप और उनके इतिहास दोनों को प्राप्त करने के लिए एक साधन प्रस्तुत करता है. विभिन्न प्रयोगात्मक और विश्लेषणात्मक तकनीकों इस प्रकार इस तरह के सेल करने वाली सेल भिन्नता 2,3, बैक्टीरियल persister गठन 4, प्रतिलेखन के रूप में जीन विनियमन सुविधाओं में अंतर्दृष्टि (एक समीक्षा के लिए 1 देखें) प्रदान करने, फ्लोरोसेंट संवाददाता अभिव्यक्ति की फिल्मों प्राप्त और यों के लिए विकसित किया गया है दीक्षा और बढ़ाव 5, 6,7 फोड़ ट्रांसक्रिप्शनल, सेल चक्र निर्भरता 8,9, और आनुवांशिकता 10. हालांकि, OBTaining गुणवत्ता एकल कक्ष प्रतिदीप्ति समय श्रृंखला संवर्धन में महत्वपूर्ण तकनीकी चुनौतियों का एक चलाया हुआ वातावरण में और अधिग्रहण प्रतिदीप्ति फिल्मों के उच्च throughput मात्रा का ठहराव में कोशिकाओं की एक monolayer शामिल है. यहाँ, हम एस के प्रतिदीप्ति फिल्में प्राप्त करने और विश्लेषण करने के लिए एक प्रक्रिया का वर्णन सेल संस्कृति डिवाइस के निर्माण में या सॉफ्टवेयर के विकास में कोई आवश्यक अनुभव (चित्रा 1) के साथ cerevisiae. सबसे पहले, हम विस्तार से एक उदाहरण प्रोटोकॉल एक या एक से अधिक फ्लोरोसेंट संवाददाताओं व्यक्त नवोदित खमीर के लिए प्रतिदीप्ति समय श्रृंखला फिल्मों उत्पन्न करने के लिए. अनुकूलित microfluidic संस्कृति कक्षों का निर्माण किया है और सफलतापूर्वक पहले 11-13 नियोजित किया गया है, हालांकि हम CellAsic (हेवर्ड, सीए) से एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध microfluidic डिवाइस का उपयोग करें. प्रणाली के दायरे monolayer के विकास के लिए कोशिकाओं और छिड़काव पर्यावरण के लगातार नियंत्रण की अनुमति देता है. हम वर्तमान माइक्रोस्कोपी प्रोटोकॉल fluoresc प्राप्त करने के लिए एक सरल साधन हैखिलाडि़यों नवोदित खमीर की फिल्मों, लेकिन किसी भी संशोधित प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल (एक स्वनिर्धारित संस्कृति डिवाइस, वैकल्पिक मीडिया की स्थिति, आदि.) एक खमीर कोशिकाओं के समान प्रतिदीप्ति फिल्म डेटा उपज प्रतिस्थापित किया जा सकता है. अगला, हम समय श्रृंखला डेटा निकालने के लिए एक ग्राफिकल यूजर इंटरफेस (जीयूआई) आधारित MATLAB में सॉफ्टवेयर पैकेज (Mathworks, Natick, एमए), प्रतिदीप्ति समय श्रृंखला का त्वरित विश्लेषण (grafts) के लिए जीयूआई करार दिया है, का उपयोग फिल्मों का विश्लेषण रूपरेखा एकल कक्षों के लिए. Grafts कोशिकाओं segmenting और ट्रैकिंग में और प्रतिदीप्ति तीव्रता और ज्यामितीय जानकारी निकालने में बहुमुखी, खुले स्रोत सॉफ्टवेयर पैकेज सेल आईडी 14 के समान सुविधाएँ है. हालांकि, grafts महत्वपूर्ण अतिरिक्त फीचर्स प्रदान करता है. सबसे पहले, यह विभाजन और डेटा सटीकता, बजाय विश्लेषण के बाद ग़ैर क्षेत्र निशान से सिर्फ सांख्यिकीय gating को सत्यापित करने के लिए ट्रैकिंग के परिणाम की आसान इंटरैक्टिव संपादन प्रदान करता है. इसके अलावा, यह automaticall को विश्लेषण फैलीवाई नामित वंश और नवोदित खमीर की ब्याज की सेल चक्र अंक. माँ और बेटी दो स्वतंत्र सेल क्षेत्रों के लिए फार्म विभाजित जब निर्धारण पूरे सेल (किसी भी जुड़े कली सहित मां) सेल चक्र 8 के दौरान माप का निर्धारण करने के लिए महत्वपूर्ण है. सुइट इन कार्यों को पूरा करने के लिए तीन मॉड्यूल शामिल हैं. केंद्रित और अनफोकस्ड उज्ज्वल क्षेत्र छवियों के बीच इसके विपरीत पर आधारित है, और पहली क्षेत्रों सेल क्षेत्रों उपयोगकर्ता विभाजन मानकों को परिभाषित और नेत्रहीन का परीक्षण करने की अनुमति देता है. दूसरा (. पर उपलब्ध ब्लेयर और क्रोकर एट अल आईडीएल दिनचर्या का Dufresne के MATLAB के कार्यान्वयन का उपयोग,: पटरियों <a href="http://physics.georgetown.edu/matlab/" target="_blank">http://physics.georgetown.edu/MATLAB/</a> ) और समय के माध्यम से सेल क्षेत्रों के उपाय, स्वतः प्रजातियों प्रदान करती है, और दृश्य निरीक्षण के लिए सक्षम बनाता है और त्रुटि सुधार. एक साधारण साजिश रचने जीयूआई क्वेरी एकल कोशिका के गुण को शामिल किया जाता है. तीसरा मॉड्यूल कली उद्भव और विभाजन ती श्रेयएमईएस, और पूरे सेल समय श्रृंखला डेटा के रूप में भी उनकी पहली और दूसरी बार के डेरिवेटिव (के रूप में 9 में चर्चा) outputs. विश्लेषण मॉड्यूल चुनाव के सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर में बाद के अध्ययन के लिए एक अंतरिक्ष सीमांकित पाठ फ़ाइल के रूप में डेटा outputs. इस प्रकार, पैकेज उपयोगकर्ता एक ग्राफिकल इंटरफ़ेस के माध्यम से उच्च गुणवत्ता के साथ समय श्रृंखला डेटा निकालने के लिए सक्षम बनाता है. हम सेल चक्र 9 के एक समारोह के रूप में एक नवोदित खमीर कोशिकाओं में वास्तविक समय प्रतिलेखन दरों में अनुमान लगाने के लिए इस विधि का इस्तेमाल किया है. मॉड्यूल नवोदित खमीर, पैरामीटर या के लिए अनुकूलित किया गया है, यदि आवश्यक हो, स्वतंत्र रूप से उपलब्ध कोड अन्य जीवों और छवि प्रकार के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. विभाजन, ट्रैकिंग, और वंश असाइनमेंट एल्गोरिदम सौंपा इमेजिंग और प्रश्न में जीव के प्रकार के लिए विशिष्ट हो सकता है. मौजूदा एल्गोरिदम बदल दिया है, लेकिन अभी भी उपयोगकर्ता के अनुकूल दृश्य निरीक्षण और विभाजन के सुधार और कहा कि सदा ही occu ट्रैकिंग त्रुटियों की अनुमति देता है कि जीयूआई इंटरफेस बनाए रखने के लिए किया जा सकता हैकिसी भी एल्गोरिथ्म के साथ आर.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y04C Yeast Perfusion Plate</td>
			<td>CellAsic</td>
			<td>Y04C-02</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ONIX Microfluidic Perfusion Platform</td>
			<td>CellAsic</td>
			<td>EV-262</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axio Observer.Z1 Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan-Apochromat 63X/1.40 Oil DIC objective</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>440762-9904-000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cascade II EMCCD camera</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lumen 200 metal-halide arc lamp</td>
			<td>PRIOR Scientific</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triple-bandpass dichroic filter cube and excitation and emission filter set</td>
			<td>Chroma Technology Corp</td>
			<td>set #89006</td>
			<td>Used for YFP (Venus/Citrine), CFP (Cerulean), RFP (mCherry/tdTomato)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAC 5000 controller and filter wheels</td>
			<td>Ludl Electronic Products</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB R2011a</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>64-bit version handles large data files better than 32-bit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acquiring fluorescence time-lapse movies of budding yeast and analyzing single-cell dynamics using grafts

प्रतिदीप्ति समय चूक माइक्रोस्कोपी एकल कोशिका स्तर पर कई जैविक प्रक्रियाओं के अध्ययन में एक शक्तिशाली उपकरण बन गया है. विशेष रूप से, जीन अभिव्यक्ति की अस्थायी निर्भरता चित्रण फिल्मों इसके विनियमन की गतिशीलता में अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं, लेकिन, एकल कक्षों के प्रतिदीप्ति फिल्में प्राप्त करने और विश्लेषण करने के लिए कई तकनीकी चुनौतियों का सामना कर रहे हैं. हम यहां इस तरह के डेटा उत्पन्न करने के लिए एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध microfluidic संस्कृति उपकरण का उपयोग कर एक सरल प्रोटोकॉल, और एक MATLAB आधारित, ग्राफिकल यूजर इंटरफेस (जीयूआई) आधारित सॉफ्टवेयर पैकेज प्रतिदीप्ति छवियों यों को वर्णन. सॉफ्टवेयर क्षेत्रों और पटरियों कोशिकाओं, उपयोगकर्ता नेत्रहीन डेटा में त्रुटियों उपपादरी करने के लिए सक्षम बनाता है, और स्वचालित रूप से वंश और विभाजन के समय प्रदान करती है. जीयूआई आगे पूरे सेल निशान के रूप में भी उनकी पहली और दूसरी बार के डेरिवेटिव के उत्पादन के लिए समय श्रृंखला विश्लेषण करती है. सॉफ्टवेयर एस के लिए डिजाइन किया गया था cerevisiae, इसके प्रतिरूपकता और चंचलता यह टी की अनुमति चाहिएकुछ संशोधनों के साथ अन्य प्रकार की कोशिकाओं का अध्ययन करने के लिए एक मंच के रूप में सेवा ओ.

एक सफलतापूर्वक प्रदर्शन किया और विश्लेषण प्रयोग वास्तविक सौंपा कली उद्भव और विभाजन के समय के साथ ही पूरे कोशिकाओं के लिए ज्यादातर निरंतर समय श्रृंखला निकलेगा. एक उदाहरण के रूप में, हम विकास और वैश्वि?...

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Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

हम प्रतिदीप्ति बढ़ रही खमीर कोशिकाओं के माइक्रोस्कोपी फिल्मों, और एकल कोशिका समय श्रृंखला डेटा निकालने के लिए एक जीयूआई आधारित सॉफ्टवेयर पैकेज प्राप्त करने के लिए एक सरल प्रोटोकॉल उपस्थित थे. विश्लेषण स्वचालित वंश और दृश्य निरीक्षण और ट्रैक किए गए डेटा का मार्गदर्शन curation के साथ एकीकृत विभाजन के समय असाइनमेंट शामिल है.

नवोदित खमीर की प्रतिदीप्ति समय चूक सिनेमा हासिल करना और grafts का उपयोग कर एकल सेल गतिशीलता का विश्लेषण

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

नवोदित खमीर में Replicative लाइफ स्पैन मापने

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

SiRNA अभिकर्मक के बाद समय चूक सूत्रीविभाजन की इमेजिंग

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

समय चूक वीडियो माइक्रोस्कोपी का उपयोग कक्ष रैंडम प्रवासन के मात्रात्मक विश्लेषण

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Budding Yeast Protein Extraction and Purification for the Study of Function, Interactions, and Post-translational Modifications

समारोह का अध्ययन है, सहभागिता, और बाद translational संशोधनों के लिए नवोदित खमीर प्रोटीन निष्कर्षण और शोधन

Homogenization by bead beating is a fast and efficient way to release DNA, RNA, proteins, and metabolites from budding yeast cells, which are notoriously ...

Protein Purification Technique that Allows Detection of Sumoylation and Ubiquitination of Budding Yeast Kinetochore Proteins Ndc10 and Ndc80

Sumoylation और नवोदित खमीर Kinetochore प्रोटीन Ndc10 और Ndc80 की Ubiquitination की जांच की अनुमति देता है कि प्रोटीन शोधन तकनीक

Post-translational Modifications (PTMs), such as phosphorylation, methylation, acetylation, ubiquitination, and sumoylation, regulate the cellular ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

उच्च संकल्प समय चूक इमेजिंग और जीवित मानव नाल की शिरा endothelial कोशिकाओं में microtubule गतिशीलता की स्वचालित विश्लेषण

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Applications of pHluorin for Quantitative, Kinetic and High-throughput Analysis of Endocytosis in Budding Yeast

मात्रात्मक, काइनेटिक और उच्च throughput नवोदित खमीर में endocytosis के विश्लेषण के लिए pHluorin के आवेदन

Green fluorescent protein (GFP) and its variants are widely used tools for studying protein localization and dynamics of events such as cytoskeletal ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Microfluidic उपकरणों का उपयोग करते हुए एकल नवोदित खमीर कोशिकाओं में जीवनकाल और सेलुलर समलक्षणियों की माप के लिए

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast

उच्च संकल्प इमेजिंग और नवोदित खमीर में व्यक्तिगत एस्ट्रल सूक्ष्मनलिका गतिशीलता का विश्लेषण

Dynamic microtubules are fundamental to many cellular processes, and accurate measurements of microtubule dynamics can provide insight into how cells ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

फ्लोरेसेंस लाइव-सेल माइक्रोस्कोपी द्वारा मिट्रोटिक और मीओटिक फिसेशन खमीर न्यूक्लियर डायनामिक्स की परीक्षा

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...