Name: transplantation into the anterior chamber of the eye for longitudinal, non-invasive in vivo imaging with single-cell resolution in real-time
Uploaded: 2013-03-10T14:00:00
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Riconosciamo Drs. Camillo Ricordi, Antonello Pileggi, R. Damaris Molano, Stephan Speier e Daniel Nyqvist per le discussioni fruttuose. Ringraziamo anche Eleut Hernandez e Diego Espinosa-Heidmann per l&#39;assistenza tecnica, e Mike e Margaret Valdes Formoso aiuto con registrazione video. Byron Maldonado registrare, modificare e prodotto il video finale. Sostegno alla ricerca è stato fornito dal Diabetes Research Institute Foundation ( <a href="http://www.DiabetesResearch.org" target="_blank">www.DiabetesResearch.org</a> ), il NIH / NIDDK / NIAID (F32DK083226 di MHA, NIH RO3DK075487 ad AC; U01DK089538 a PO.B.). Sostegno alla ricerca addizionale PO.B stato fornito mediante fondi del Karolinska Institutet, il Consiglio svedese della ricerca, la Fondazione Diabete svedese, il Erling Persson-Family Foundation, la Famiglia Knut e Alice Wallenberg Foundation, la Skandia Insurance Company Ltd., VIBRANT ( FP7-228933-2), programma di ricerca strategica nel diabete al Karolinska Institutet, la Novo Nordisk Foundation e Fondazione Berth von Kantzow di.

La seguente procedura viene eseguita sotto la stereoscopio in due fasi, la prima fase consiste nel caricare le isolette nella cannula e la seconda fase è il trapianto effettivo nel ACE. Tutte le procedure eseguite su animali sono stati approvati dalla cura degli animali e del comitato istituzionale uso (IACUC) dell&#39;Università di Miami. 1. Isolotti Caricamento in Cannula per trapianto <ol><li> Centro gli isolotti in piastra di coltura, facendo girare il piatto nei circoli restringimen...

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	<li>Weigert, R., Sramkova, M., Parente, L., Amornphimoltham, P., Masedunskas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy:+a+novel+tool+to+study+cell+biology+in+living+animals.">Intravital microscopy: a novel tool to study cell biology in living animals.</a> Histochem. Cell Biol. 133 (5), 481-491 (2010).</li><li>Leibiger, I. B., Caicedo, A., Berggren, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+in+vivo+imaging+of+pancreatic+?-cell+function+and+survival+-+a+perspective.">Non-invasive in vivo imaging of pancreatic ?-cell function and survival - a perspective.</a> Acta Physiol. (Oxf). , (2011).</li><li>Wang, Y., Maslov, K., Kim, C., Hu, S., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+photoacoustic+and+fluorescence+confocal+microscopy.">Integrated photoacoustic and fluorescence confocal microscopy.</a> IEEE Trans Biomed. Eng. 57 (10), 2576-2578 (2010).</li><li>Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Going+deeper+than+microscopy:+the+optical+imaging+frontier+in+biology.">Going deeper than microscopy: the optical imaging frontier in biology.</a> Nat. Methods. 7, 603-614 (2010).</li><li>Aswathy, R. G., Yoshida, Y., Maekawa, T., Kumar, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near-infrared+quantum+dots+for+deep+tissue+imaging.">Near-infrared quantum dots for deep tissue imaging.</a> Anal. Bioanal Chem. 397 (4), 1417-1435 (2010).</li><li>Ghoroghchian, P. P., Therien, M. J., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+fluorescence+imaging:+a+personal+perspective.">In vivo fluorescence imaging: a personal perspective.</a> Wiley Interdiscip Rev. Nanomed Nanobiotechnol. 1 (2), 156-167 (2009).</li><li>Prescher, A., Mory, C., Martin, M., Fiedler, M., Uhlmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+FTY720+treatment+on+postischemic+pancreatic+microhemodynamics.">Effect of FTY720 treatment on postischemic pancreatic microhemodynamics.</a> Transplant Proc. 42 (10), 3984-3985 (2010).</li><li>Leblond, F., Davis, S., Vald&#233;s, P., Pogue, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+whole-body+fluorescence+imaging:+Review+of+instruments,+methods+and+applications.">Pre-clinical whole-body fluorescence imaging: Review of instruments, methods and applications.</a> J. Photochem. Photobiol. B. 98 (1), 77-94 (2010).</li><li>Toso, C., Vallee, J. P., Morel, P., Ris, F., Demuylder-Mischler, S., Lepetit-Coiffe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+magnetic+resonance+imaging+of+pancreatic+islet+grafts+after+iron+nanoparticle+labeling.">Clinical magnetic resonance imaging of pancreatic islet grafts after iron nanoparticle labeling.</a> Am. J. Transplant. 8 (3), 701-706 (2008).</li><li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li><li>Wang, B. G., Konig, K., Halbhuber, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+microscopy+of+deep+intravital+tissues+and+its+merits+in+clinical+research.">Two-photon microscopy of deep intravital tissues and its merits in clinical research.</a> J. Microsc. 238 (1), 1-20 (2010).</li><li>Denk, W., Delaney, K. R., Gelperin, A., Kleinfeld, D., Strowbridge, B. W., Tank, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+and+functional+imaging+of+neurons+using+2-photon+laser+scanning+microscopy.">Anatomical and functional imaging of neurons using 2-photon laser scanning microscopy.</a> J. Neurosci. Methods. 54 (2), 151-162 (1994).</li><li>Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choreography+of+cell+motility+and+interaction+dynamics+imaged+by+two-photon+microscopy+in+lymphoid+organs.">Choreography of cell motility and interaction dynamics imaged by two-photon microscopy in lymphoid organs.</a> Annu. Rev. Immunol. 26, 585-626 (2008).</li><li>Khorshidi, M. A., Vanherberghen, B., Kowalewski, J. M., Garrod, K. R., Lindstrom, S., Andersson-Svahn, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+transient+migration+behavior+of+natural+killer+cells+imaged+in+situ+and+in+vitro.">Analysis of transient migration behavior of natural killer cells imaged in situ and in vitro.</a> Integr. Biol. (Camb). 3 (7), 770-778 (2011).</li><li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoimaging:+studying+immune+system+dynamics+using+two-photon+microscopy.">Immunoimaging: studying immune system dynamics using two-photon microscopy.</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2011, pdb.top99 (2011).</li><li>Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+the+innate+and+adaptive+immune+responses+underlying+allograft+rejection+by+two-photon+microscopy.">Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy.</a> Nat. Med. , (2011).</li><li>Fan, Z., Spencer, J., Lu, Y., Pitsillides, C., Singh, G., Kim, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+tracking+of+'color-coded'+effector,+natural+and+induced+regulatory+T+cells+in+the+allograft+response.">In vivo tracking of 'color-coded' effector, natural and induced regulatory T cells in the allograft response.</a> Nat. Med. 16 (6), 718-722 (2010).</li><li>Sabek, O., Gaber, M. W., Wilson, C. M., Zawaski, J. A., Fraga, D. W., Gaber, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+human+islet+vascularization+using+a+dorsal+window+model.">Imaging of human islet vascularization using a dorsal window model.</a> Transplant Proc. 42 (6), 2112-2114 (2010).</li><li>Coppieters, K., Martinic, M. M., Kiosses, W. B., Amirian, N., von Herrath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+the+in+vivo+imaging+of+autoimmune+diabetes+development+in+the+pancreas+by+two-photon+microscopy.">A novel technique for the in vivo imaging of autoimmune diabetes development in the pancreas by two-photon microscopy.</a> PLoS One. 5 (12), e15732 (2010).</li><li>Martinic, M. M., von Herrath, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+the+pancreas+during+development+of+diabetes.">Real-time imaging of the pancreas during development of diabetes.</a> Immunol Rev. 221, 200-213 (2008).</li><li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+2-Photon+Imaging+of+Blood+Flow+in+the+Neocortex+through+a+Cranial+Window.">A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window.</a> J. Vis. Exp. (12), e678 (2008).</li><li>Palmer, G. M., Fontanella, A. N., Shan, S., Hanna, G., Zhang, G., Fraser, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+optical+molecular+imaging+and+analysis+in+mice+using+dorsal+window+chamber+models+applied+to+hypoxia,+vasculature+and+fluorescent.">In vivo optical molecular imaging and analysis in mice using dorsal window chamber models applied to hypoxia, vasculature and fluorescent.</a> 6 (9), 1355-1366 (2011).</li><li>Jain, R. K., Munn, L. L., Fukumura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+tumour+pathophysiology+using+intravital+microscopy.">Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy.</a> Nat. Rev. Cancer. 2 (4), 266-276 (2002).</li><li>Taylor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+response+of+capillary+endothelium+to+changes+in+intravascular+pressure,+as+seen+in+the+rabbit's+ear+chamber.">The response of capillary endothelium to changes in intravascular pressure, as seen in the rabbit's ear chamber.</a> Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 31 (5), 533-543 (1953).</li><li>Shan, S., Sorg, B., Dewhirst, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+rodent+mammary+window+of+orthotopic+breast+cancer+for+intravital+microscopy.">A novel rodent mammary window of orthotopic breast cancer for intravital microscopy.</a> Microvasc. Res. 65 (2), 109-117 (2003).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., Cabrera, O., Yu, J., Molano, R. D., Pileggi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+in+vivo+imaging+of+pancreatic+islet+cell+biology.">Noninvasive in vivo imaging of pancreatic islet cell biology.</a> Nat. Med. 14 (5), 574-578 (2008).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., Kohler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye.">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat. Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li><li>Falck, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site+of+production+of+oestrogen+in+the+ovary+of+the+rat.">Site of production of oestrogen in the ovary of the rat.</a> Nature. 184, 1082 (1959).</li><li>Bickford-Wimer, P., Granholm, A. C., Bygdeman, M., Hoffer, B., Olson, L., Seiger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+fetal+cerebellar+and+cortical+tissue+transplanted+to+the+anterior+eye+chamber+of+athymic+rats:+electrophysiological+and+structural+studies.">Human fetal cerebellar and cortical tissue transplanted to the anterior eye chamber of athymic rats: electrophysiological and structural studies.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84 (16), 5957-5961 (1987).</li><li>Adeghate, E., Donath, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+findings+in+long-term+pancreatic+tissue+transplants+in+the+anterior+eye+chamber+of+rats.">Morphological findings in long-term pancreatic tissue transplants in the anterior eye chamber of rats.</a> Pancreas. 5 (3), 298-305 (1990).</li><li>Abdulreda, M. H., Faleo, G., Molano, R. D., Lopez-Cabezas, M., Molina, J., Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution,+noninvasive+longitudinal+live+imaging+of+immune+responses.">High-resolution, noninvasive longitudinal live imaging of immune responses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. , (2011).</li><li>Unutmaz, D., Xiang, W., Sunshine, M. J., Campbell, J., Butcher, E., Littman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primate+lentiviral+receptor+Bonzo/STRL33+is+coordinately+regulated+with+CCR5+and+its+expression+pattern+is+conserved+between+human+and+mouse.">The primate lentiviral receptor Bonzo/STRL33 is coordinately regulated with CCR5 and its expression pattern is conserved between human and mouse.</a> J. Immunol. 165 (6), 3284-3292 (2000).</li><li>Pileggi, A., Molano, R. D., Berney, T., Cattan, P., Vizzardelli, C., Oliver, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme+oxygenase-1+induction+in+islet+cells+results+in+protection+from+apoptosis+and+improved+in+vivo+function+after+transplantation.">Heme oxygenase-1 induction in islet cells results in protection from apoptosis and improved in vivo function after transplantation.</a> Diabetes. 50 (9), 1983-1991 (2001).</li></ol>

Isole pancreatiche murine sono state isolate mediante digestione con collagenasi seguita da purificazione su gradienti di densità, come descritto in precedenza 33. Isole isolate sono state coltivate durante la notte prima del trapianto. Mentre questo può non essere necessario, si raccomanda di consentire gli isolotti di recuperare dalla procedura di isolamento. Questo è fondamentale quando il trapianto viene eseguito nei pazienti diabetici in quanto garantirà il trapianto di sopravvivere / isole robuste. ...

I progressi nella microscopia intravitale hanno rivelato fenomeni fisiologici non previsto da studi in vitro 1. Questo mette in evidenza la sfida di tradurre i risultati ottenuti con convenzionali metodi in vitro nell&#39;animale vivente. Negli ultimi dieci anni, la visualizzazione dei tessuti negli animali vivi è stata notevolmente migliorata dai progressi tecnologici in modalità di imaging 2, 3, 4, 5, 6. Questo ha stimolato la necessità di approcci di imaging in vivo con applicazione realizzabile in modelli animali sperimentali per consentire la visualizzazione longitudinale dei tessuti bersaglio non invasivo. Le tecniche di imaging come la risonanza magnetica e la tomografia ad emissione di positroni o bioluminescenza hanno permesso non invasiva per immagini di organi / tessuti in profondità all&#39;interno del corpo 7-8, 9. Ma queste tecniche non possono realizzare singola cella di risoluzione a causa di segnali di fondo e alla bassa risoluzione spaziale, nonostante l&#39;uso of materiali ad alto contrasto o di tessuto-specifica 4 luminescenza. Questo è stato affrontato con l&#39;avvento di due fotoni microscopia a fluorescenza confocale 10. Due-fotone microscopia abilitato studi di imaging intravitale per visualizzare e quantificare gli eventi cellulari con dettagli senza precedenti 11, 12. Questo ha portato alla caratterizzazione dei principali processi biologici in salute e malattia 13, 14, 15, 16. Mentre pionieristici studi di imaging intravitale sono principalmente &quot;imitato&quot; in condizioni in vivo nel tessuto asportato (linfonodi ad esempio), altri studi hanno utilizzato poco invasive per tessuti bersaglio di immagini esposte in situ 17, 18, ​​19, 20, 21. Altri studi hanno utilizzato anche modelli a camera &quot;finestra&quot; per aggirare le limitazioni connesse con approcci invasivi e la risoluzione limitata di imaging in vivo 22, 23, 24, 25. Nel modello camera di finestra, una camera con una finestra trasparente viene impiantato chirurgicamente nella pelle con diffelocalità affitto (pelle dorsale o l&#39;orecchio, mammaria cuscinetto adiposo, fegato, ecc) su l&#39;animale (ad esempio topo, ratto, coniglio). Anche se questo approccio consente in modo chiaro ad alta risoluzione di immagini in vivo, che richiede un intervento chirurgico invasivo per impiantare la camera e non può essere in grado di ospitare studi di imaging longitudinale su diverse settimane o mesi 22. È stato recentemente dimostrato che la combinazione di alta risoluzione microscopia confocale con una procedura minimamente invasiva, ossia trapianto nella camera anteriore dell&#39;occhio (ACE) fornisce una &quot;finestra naturale corpo&quot; come un potente e versatile in vivo imaging piattaforma 26, 27. Trapianto nel ACE è stato usato negli ultimi decenni per studiare aspetti biologici di una varietà di tessuti 28, 29, 30, e la sua combinazione con la recente imaging ad alta risoluzione abilitato studiando la fisiologia delle isole pancreatiche con singola cella di risoluzione non- invasiva e longitudinalmente &lt;sup&gt; 26, 27. Questo approccio è stato utilizzato per studiare le risposte autoimmuni durante lo sviluppo di diabete di tipo 1 in modelli animali (dati non pubblicati). E &#39;stato anche utilizzato per studiare lo sviluppo del pancreas, così come, negli studi di funzione renale da trapianto in gemme pancreatiche l&#39;asso o singoli glomeruli renali, rispettivamente (dati non pubblicati). Un recente rapporto di questo approccio ulteriormente dimostrato la sua applicazione per studiare la risposta immunitaria dopo trapianto di isole pancreatiche 31. Importante, questo studio ha dimostrato che il trapianto nella camera anteriore dell&#39;occhio fornisce una finestra naturale del corpo per eseguire: (1) longitudinale, non invasiva dei tessuti trapiantati in vivo; (2) in vivo per valutare cytolabeling fenotipo cellulare e la vitalità in situ, (3) monitoraggio in tempo reale di infiltrare cellule immunitarie nel tessuto bersaglio, e (4) intervento locale per l&#39;applicazione topica o iniezione intraoculare. Qui, Siamo demonstrate come eseguire il trapianto nella camera anteriore dell&#39;occhio utilizzando isole pancreatiche.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Descrizione / Commenti </td></tr><tr><td> IsoTHESIA (isoflurano) </td><td> Buttler Animal Health di alimentazione </td><td> 11695-6775-2 </td><td> 99,9% isoflurano / ml </td></tr><tr><td> Ketaset (ketamina HCL) </td><td> Fort Dodge Animal Health </td><td> 0856-2013-01 </td><td> Alternative anestesia iniettabile </td></tr><tr><td> Beprenex (buprenorfina HCL) </td><td> Reckitt Benckiser Health Care (UK) Ltd. </td><td> 12496-075-7-1 </td><td> 0,3 mg / ml </td></tr><tr><td> Eritromicina unguento oftalmico USP, 0,5% </td><td> Akron </td><td> 17478-070-35 </td><td> Applicato profilassi per gli occhi trapiantati </td></tr><tr><td> Di sodio cloruro 0,9% (Saline) </td><td> Hospira Inc. </td><td> 0409-7983-03 </td><td> Per iniezione endovenosa. Sterile </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Gibco </td><td> 10010-023 </td><td> 1X. Sterile </td></tr><tr><td> CMRL media 1066 </td><td> Cellgro </td><td> 98-304-CV </td><td> Completato, CIT modifica. Mezzi preferiti per isole </td></tr></tbody></table>

transplantation into the anterior chamber of the eye for longitudinal, non-invasive in vivo imaging with single-cell resolution in real-time

Intravitale immagini è emerso come uno strumento indispensabile nella ricerca biologica. Nel processo, tecniche di imaging sono state sviluppate molte differenti per studiare processi biologici negli animali non invasivo. Tuttavia, un grande limite tecnico in vigore le modalità di imaging intravitale è l&#39;incapacità di combinare non invasivo, l&#39;imaging longitudinale con cella singola capacità di risoluzione. Mostriamo qui come il trapianto nella camera anteriore dell&#39;occhio elude tale limitazione significativa che offre una piattaforma versatile sperimentale che permette di non invasivo, l&#39;imaging longitudinale con risoluzione cellulare in vivo. Dimostriamo la procedura di trapianto nel topo e di fornire risultati rappresentativi utilizzando un modello con rilevanza clinica, in particolare trapianto di isole pancreatiche. Oltre a consentire la visualizzazione diretta in una varietà di tessuti trapiantati nella camera anteriore dell&#39;occhio, questo approccio fornisce una piattaforma per ghialonefarmaci n eseguendo a lungo termine di follow-up e il monitoraggio nei tessuti bersaglio. Grazie alla sua versatilità, tessuto / trapianto di cellule nella camera anteriore dell&#39;occhio non solo terapie di trapianto benefici, si estende ad altre applicazioni in vivo per studiare processi fisiologici e fisiopatologici quali trasduzione del segnale e nel cancro o sviluppo della malattia autoimmune.

Ci sono alcuni parametri che definiscono un trapianto &quot;buono&quot;. Un trapianto buona è quella che procede senza sanguinamento quando si effettua l&#39;incisione come si può vedere nel video. Sanguinamento è impedito / minimizzato penetrare solo la punta del bisturi (aghi) nel ACE (Figura 3a). Questo aiuterà anche a prevenire il contatto e la puntura dell&#39;iride. Essa garantirà inoltre una piccola incisione che guarirà molto bene senza causare opacità della cornea nel tempo (figu...

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Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

Un nuovo approccio che combina il trapianto intraoculare e la microscopia confocale permette longitudinale, non invasivo imaging in tempo reale con singola cella di risoluzione all&#39;interno di tessuti innestati<em&gt; In vivo</em&gt;. Dimostriamo come trapiantare isole pancreatiche nella camera anteriore dell&#39;occhio mouse.

Trapianto nella camera anteriore dell&#39;occhio per longitudinale, non invasiva<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging con Single-cella di risoluzione in tempo reale

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

High-frequency High-resolution Echocardiography: First Evidence on Non-invasive Repeated Measure of Myocardial Strain, Contractility, and Mitral Regurgitation in the Ischemia-reperfused Murine Heart

Ad alta frequenza ad alta risoluzione Ecocardiografia: Prima Prova a non invasiva misura ripetuta di deformazione miocardica, contrattilità, e rigurgito mitralico in Ischemia-riperfuso Cuore Murine

Ischemia-reperfusion (IR) was surgically performed in murine hearts which were then subjected to repeated imaging to monitor temporal changes in ...

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Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

Imaging non invasivo di acuta Alloinnesto rigetto dopo trapianto renale Rat Utilizzo<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

The number of patients with end-stage renal  disease, and the number of kidney allograft recipients continuously increases.  Episodes of acute cellular ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

Sviluppo di un audio-based ambiente di gioco virtuale per assistere con doti di navigazione in the Blind

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemioterapia-indotta vascolare Tossicità - in tempo reale<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging di Vessel Impairment

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Valutazione non invasiva della efficacia di nuove terapie per patologie intestinali Utilizzando Serial Imaging endoscopica Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Incapsulamento termogenico preadipocytes al trapianto nel tessuto adiposo Depositi tessuti

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Extended Time-lapse Intravital Imaging of Real-time Multicellular Dynamics in the Tumor Microenvironment

Esteso Time-lapse Imaging intravitale del Real-time multicellulare Dynamics nel microambiente tumorale

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and ...

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Longitudinale<em&gt; In Vivo</em&gt; Imaging del Cerebrovasculature: Rilevanza per le malattie del sistema nervoso centrale

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Ri-Arterialized trapianto parziale di fegato del ratto con un in vivo vaso-Oriented 70% Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...