Name: induction and analysis of epithelial to mesenchymal transition
Uploaded: 2013-08-27T12:00:00
Duration: 10 min 37 s
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लेखकों उपयोगी चर्चा और पांडुलिपि की समीक्षा के लिए जूलिया Hatler और मार्टिन Ramsden (आर एंड डी सिस्टम) को स्वीकार करना होगा.

1. EMT की प्रेरण <ol><li> एक पानी के स्नान में 37 डिग्री सेल्सियस तक गर्म संस्कृति मीडिया. इस्तेमाल किया संस्कृति मीडिया ब्याज की अपनी कोशिकाओं के मानक संस्कृति के लिए इस्तेमाल किया मीडिया के रूप में ही है. उदाहरण के लिए, A549 मानव फेफड़ों कार्सिनोमा सेल लाइन 10% भ्रूण गोजातीय सीरम और 2mm glutamine के साथ पूरक Kaighn के F12 में उगाया जाता है. </li><li> एक हदबंदी समाधान (जैसे TrypLE एक्सप्रेस) का उपयोग ब्याज की फसल कोशिकाओं. </li><li> एक 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में पूर्व गर्म संस्कृति मीडिया में कोशिकाओं को निलंबित. </li><li> 5 मिनट के लिए 400 XG पर सेल निलंबन अपकेंद्रित्र. </li><li> ध्यान से बर्बादी कंटेनर में गिरने से सतह पर तैरनेवाला हटायें. </li><li> पूर्व गर्म संस्कृति मीडिया में सेल गोली निलंबित. </li><li> Trypan ब्लू का उपयोग व्यवहार्य कोशिकाओं की गणना. सेल निलंबन का एक नमूना निकालें और 0.4% Trypan ब्लू समाधान में पतला. एक hemocytometer पर पतला नमूना के 10 μl प्लेस और व्यवहार्य कोशिकाओं (नीला बारी नहीं है कि सेल) गिनती. सेल डी निर्धारित करने के लिए कोशिकाओं की गिनती का प्रयोग करेंअपने समाधान में ensity. </li><li> टिशू कल्चर पर प्लेट कोशिकाओं 2 सेमी प्रति 0.9-1.0 x 10 4 कोशिकाओं पर प्लेटों या बोतल का इलाज किया. उदाहरण के लिए, 0.5 x 10 6 कोशिकाओं 1X EMT उत्प्रेरण मीडिया अनुपूरक (6 मिलीग्राम Media 100 मिमी प्रति प्लेट) युक्त संस्कृति मीडिया में एक 100 मिमी प्लेट में चढ़ाया. </li><li> संस्कृति एक 37 डिग्री सेल्सियस / 5% सीओ 2 इनक्यूबेटर में कोशिकाओं चढ़ाया. दैनिक सेल आकारिकी मॉनिटर. </li><li> तीन दिन चढ़ाना के बाद, मीडिया को हटाने और 1X EMT उत्प्रेरण मीडिया अनुपूरक युक्त ताजा पूर्व गर्म संस्कृति मीडिया के साथ की जगह. एक 37 डिग्री सेल्सियस / 5% सीओ 2 इनक्यूबेटर में संस्कृति के लिए आगे बढ़ें. </li><li> पांच दिनों चढ़ाना के बाद, कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए तैयार हैं. सेल आकारिकी औंधा प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा कल्पना है. </li></ol> 2. Immunocytochemistry द्वारा प्रोटीन अभिव्यक्ति के विश्लेषण <ol><li> 95% इथेनॉल युक्त एक पेट्री डिश में coverslips रखकर एक 24 अच्छी तरह से थाली के लिए बाँझ 12 मिमी coverslips तैयार करें. धीरे हमें इथेनॉल से coverslips निकालेंएक सुई और घुमावदार संदंश और लौ बाँझ आईएनजी. 24 अच्छी तरह से थाली में से एक कुएं में बाँझ coverslip जगह. शेष coverslips के साथ दोहराएँ. </li><li> 1.7 - खंड 1.1 में वर्णित के रूप में सेल निलंबन की तैयारी. </li><li> प्लेट 1.6 x 10 4 कोशिकाओं / अच्छी तरह से 0.5 मिलीलीटर 1X EMT उत्प्रेरण मीडिया अनुपूरक युक्त पूर्व गर्म संस्कृति मीडिया में. </li><li> आगे बढ़ें और वर्गों 1.9 में वर्णित के रूप में कोशिकाओं को खिलाने - 1.11. </li><li> पांच दिनों चढ़ाना के बाद, मीडिया को हटाने और कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए 1X फॉस्फेट buffered खारा (पीबीएस) में 300 μl / अच्छी तरह से 4% paraformaldehyde के साथ कोशिकाओं को ठीक. </li><li> लगानेवाला निकालें और कोशिकाओं 1X पीबीएस, 500 μl / अच्छी तरह से 2x कुल्ला. </li><li> अवरुद्ध बफर के 400 μl / अच्छी तरह से कोशिकाओं को सेते कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए (1% गोजातीय सीरम albumin (BSA), 10% सामान्य गधा सीरम, और 0.3% ट्राइटन X-100 युक्त 1X पीबीएस). </li><li> निर्माताओं में प्राथमिक एंटीबॉडी में सेते कमरे temperatur में 3 घंटे के लिए अवरुद्ध बफर की अच्छी तरह से 400 μl / में एकाग्रता की सिफारिश कीई या रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर सीधे एक fluorochrome संयुग्मित एक प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग करते समय, अंधेरे में नमूने सेते हैं. </li><li> प्रत्येक धोने के 5 मिनट के लिए 0.1% BSA युक्त 1X पीबीएस के 500 μl / अच्छी तरह से कोशिकाओं तीन बार धोएं. सीधे एक fluorochrome संयुग्मित एक प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग करते समय, 2.12 कदम के लिए सीधे आगे बढ़ना. </li><li> अंधेरे में कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए 1% BSA युक्त 1X पीबीएस के 400 μl / अच्छी तरह से में निर्माता की सिफारिश की एकाग्रता पर माध्यमिक एंटीबॉडी में कोशिकाओं को सेते हैं. </li><li> प्रत्येक धोने के 5 मिनट के लिए 0.1% BSA युक्त 1X पीबीएस के 500 μl / अच्छी तरह से कोशिकाओं तीन बार धोएं. </li><li> अगर वांछित, DAPI समाधान के साथ नाभिक counterstain. </li><li> विआयनीकृत पानी में कोशिकाओं कुल्ला और coverslips बढ़ते मीडिया का उपयोग कर एक स्लाइड पर नीचे का सामना माउंट. </li></ol>

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	<li>Kalluri, R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basics+of+epithelial-mesenchymal+transition.">The basics of epithelial-mesenchymal transition.</a> Journal of Clinical Investigation. 119, 1420-1428 (2009).</li><li>Thiery, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-mesenchymal+transitions+in+tumour+progression.">Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progression.</a> Nature Reviews Cancer. 2, 442-454 (2002).</li><li>Heuberger, J., Birchmeier, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+of+cadherin-mediated+cell+adhesion+and+canonical+Wnt+signaling.">Interplay of cadherin-mediated cell adhesion and canonical Wnt signaling.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2, 1-23 (2010).</li><li>Onder, T. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+by+transforming+growth+factor-&#946;1+of+epithelial+to+mesenchymal+transition+is+a+rare+event+in+vitro.">Induction by transforming growth factor-&#946;1 of epithelial to mesenchymal transition is a rare event in vitro.</a> Breast Cancer Research. 6, 215-231 (2004).</li><li>De Falco, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD44+proteolysis+increases+CREB+phosphorylation+and+sustains+proliferation+of+thyroid+cancer+cells.">CD44 proteolysis increases CREB phosphorylation and sustains proliferation of thyroid cancer cells.</a> Cancer Research. 72, 1449-1458 (2012).</li><li>Xie, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+Erk+pathway+is+required+for+TGF-&#946;1-induced+EMT+in+vitro.">Activation of the Erk pathway is required for TGF-&#946;1-induced EMT in vitro.</a> Neoplasia. 6, 603-610 (2004).</li><li>Bachelder, R. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+changes+in+receptor+tyrosine+kinase+phosphorylation+using+antibody+arrays.">Profiling changes in receptor tyrosine kinase phosphorylation using antibody arrays.</a> J. Vis. Exp. , (2012).</li></ol>

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EMT शामिल होने के लिए पिछला तरीकों आम तौर पर TGF-β उत्तेजना या आनुवंशिक संशोधन का इस्तेमाल किया है. अकेले TGF-β कुछ प्रकार की कोशिकाओं में EMT प्रेरित दिखाया गया है, यह अब TGF-β EMT के लिए आवश्यक है कि प्रदर्शन किया गया है, लेकिन यह सभी प्रकार की कोशिकाओं 6,14 में पर्याप्त नहीं है. EMT शामिल होने के लिए आनुवंशिक संशोधन का उपयोग समय लगता है और श्रम गहन है. यहाँ वर्णित विधि, विरोधी मानव ई cadherin, विरोधी मानव sFRP-1, विरोधी मानव DKK -1, पुनः संयोजक मानव Wnt-5 ए, और मज़बूती से EMT प्रेरित करने के लिए पुनः संयोजक मानव TGF-β1 सहित कारकों के संयोजन का उपयोग करता है. कारकों के इस संयोजन ई cadherin आधारित आसंजन, EMT प्रेरण 4 के लिए एक महत्वपूर्ण कदम ब्लॉक करने के लिए तैयार है, और Wnt -5 ए प्रोटीन जोड़ने के साथ ही Wnt inhibitors के लिए अवरुद्ध एंटीबॉडी का उपयोग करके WNT सिगनल बढ़ाने की है, sFRP-1 और DKK -1. Wnt और TGF-β संकेतन mesenchymal सेल स्टेट प्रेरित करने और बनाए रखने के लिए एक autocrine पाश में कार्य करने के लिए दिखाया गया हैई 6. इस प्रेरण विधि आनुवंशिक हेरफेर से बचा जाता है और अकेले TGF-β का उपयोग कर से अधिक प्रभावी है. महत्वपूर्ण बात है, हम पहले से (चित्रा 5) 14 TGF-β उत्तेजना को पूरी तरह से प्रतिक्रिया करने में नहीं दिखाया गया है कि MCF7 और PANC-1 कोशिकाओं, सहित प्रकार की कोशिकाओं में EMT के शामिल होने का पालन करने में सक्षम हैं. EMT उत्प्रेरण मीडिया अनुपूरक शो कम कॉम्पैक्ट और वृद्धि की धुरी के आकार आकारिकी (चित्रा 1) के साथ इलाज किया कोशिकाओं. इसके अतिरिक्त, EMT (आंकड़े 2 और 3) की पहचान कर रहे हैं जो Fibronectin अभिव्यक्ति में वृद्धि के साथ सतह ई cadherin अभिव्यक्ति समवर्ती में कमी, वहाँ है. ऐसे vimentin और घोंघा के रूप में अतिरिक्त mesenchymal मार्करों भी uninduced नियंत्रण की तुलना में EMT प्रेरित कोशिकाओं (चित्रा 4) में upregulated हैं. बढ़ी हुई प्रवास और आक्रमण क्षमताओं mesenchymal कोशिकाओं के मुख्य कार्यात्मक लक्षण हैं. इन विट्रो में </em&gt; प्रवास और आक्रमण assays, EMT उत्प्रेरण मीडिया के पूरक के साथ इलाज किया कोशिकाओं (चित्रा 6) की ओर पलायन और आक्रमण करने के लिए एक काफी वृद्धि की क्षमता का प्रदर्शन किया. 7 चित्र में दिखाया एंटीबॉडी सरणी अभिव्यक्ति डेटा का उपयोग कर के रूप में प्रदर्शन EMT शामिल होने के लिए यह सरल विधि EMT संकेतन के अध्ययन के लिए उपयोगी है. विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं ऐसे phosphorylated CREB में वृद्धि और MCF7 और A549 EMT प्रेरित कोशिकाओं दोनों में देखा ERK1 / 2 के रूप में EMT के साथ जुड़े आम अभिव्यक्ति हस्ताक्षर प्राप्त करने के लिए पूर्व और बाद EMT प्रेरण तुलना की जा सकती. CREB के S133 phosphorylation बाध्यकारी डीएनए को उत्तेजित करता है और TGF-β1 प्रेरित EMT 15 के बहाव में कार्य करने के लिए दिखाया गया है. ERK1 / 2 phosphorylation भी TGF-β1 प्रेरित EMT 16 के बहाव में कार्य करने के लिए दिखाया गया है. P70S6 बनाम A549 कोशिकाओं में जीएसके 3β phosphorylation में वृद्धि के साथ देखा के रूप में कोशिकाओं प्रकार के बीच संकेत दे रास्ते में अंतर भी स्पष्ट किया जा सकता हैMCF7 में कश्मीर phosphorylation. सेरीन 9 में जीएसके 3β phosphorylation यह समारोह कम हो जाती है, और जीएसके 3β समर्थक EMT प्रतिलेखन कारक, घोंघा 17 को बाधित करने के लिए दिखाया गया है. इसके विपरीत, p70S6K घोंघा गतिविधि लाती है और इसकी phosphorylation इस प्रोटीन 18 के सक्रियण के साथ जुड़ा हुआ है. कुल मिलाकर, विशेष रूप से पहले पूरी तरह TGF-β का जवाब नहीं दिखाया कोशिकाओं में EMT, का सीधा और विश्वसनीय प्रेरण, EMT के जीव विज्ञान को समझने शकुन मार्कर के रूप में उपयोग के लिए आम अभिव्यक्ति हस्ताक्षर की पहचान, और कैंसर के लिए उपन्यास चिकित्सा विज्ञान के विकास और मूल्यांकन के लिए उपयोगी है और fibrotic रोग.

Mesenchymal संक्रमण (EMT) को उपकला एक polarized उपकला कोशिका एक अत्यधिक गतिशील, fibroblast तरह mesenchymal सेल में जिसके परिणामस्वरूप परिवर्तन की एक किस्म से होकर गुजरती है जिसके द्वारा प्रक्रिया है. इस प्रक्रिया को विस्थापित करने और आक्रमण करने के लिए एक वृद्धि की क्षमता में जिसके परिणामस्वरूप, जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन और adherens जंक्शनों की गिरावट के माध्यम से, भाग में होता है. Physiologically, EMT भ्रूण विकास और घाव भरने के दौरान महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. EMT पर सही नियंत्रण की हानि फाइब्रोसिस और कार्सिनोमा 1,2 मेटास्टेसिस को जन्म दे सकता है. उपकला कोशिकाओं की सतह पर ई cadherin की कमी EMT 3,4 के माध्यम से एक सेल की प्रगति में एक महत्वपूर्ण कदम है. ई cadherin सीधे सन्निकट कक्षों पर cadherin प्रोटीन के साथ सूचना का आदान प्रदान कि एक एकल पास transmembrane प्रोटीन है. सेल आसंजन में अपनी भूमिका के अलावा, ई cadherin प्रभावों सेल ई cadherin एक के cytoplasmic पूंछ के बीच बातचीत के माध्यम से संकेतनियामक प्रोटीन की दा विविधता, विशेष रूप से β-catenin. β-catenin adherens जंक्शनों के स्थिरीकरण में एक भूमिका निभाता है. विहित WNT सिगनल के दौरान, β-catenin ई cadherin से जारी है और यह Wnt मार्ग 3,4,5 में एक बहाव प्रतिलेखन कारक के रूप में कार्य करता है जहां नाभिक में स्थानांतरित हो. नाभिक में, β-catenin ट्विस्ट, स्लग, fibronectin, और मैट्रिक्स metalloproteases 3,6 की एक किस्म सहित कई EMT से संबंधित कारकों की प्रतिलेखन बढ़ाने के लिए दिखाया गया है. Wnts के अलावा, TGF-β संकेतन सामान्य विकास के दौरान और रोगग्रस्त राज्यों 7,8,9 में दोनों EMT प्रेरण में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा दिखाया गया है. TGF-β तालू गठन के दौरान और विकासशील दिल 10 में होता है कि EMT में शामिल है. यह भी फाइब्रोसिस में और मेटास्टेसिस 7 को कैंसर की प्रगति में फंसा दिया गया. जनसंपर्क यहाँ वर्णित प्रक्रियाovides आनुवंशिक हेरफेर के लिए आवश्यकता के बिना सेल प्रकार की एक किस्म में EMT के अनुरूप प्रेरण. यह प्रक्रिया ई cadherin के एक कॉकटेल का उपयोग करता है, sFRP-1, और DKK -1 अवरुद्ध एंटीबॉडी और Wnt -5 ए और TGF-β1 पुनः संयोजक प्रोटीन. इस कॉकटेल Wnt और TGF-β संकेतन बढ़ाने, जबकि ई cadherin आधारित आसंजन ब्लॉक करने के लिए बनाया गया है. मजबूत EMT शामिल होने के लिए क्षमता इस प्रक्रिया के जीव विज्ञान और कैसे चिकित्सकीय प्रयोजनों के लिए यह हेरफेर करने के लिए समझने के लिए महत्वपूर्ण है. EMT की वर्तमान सामान्य मार्कर, ई cadherin (EMT में downregulated) और (EMT में upregulated) vimentin, कैंसर में सह व्यक्त पाया जा सकता है और इस प्रकार संभावित metastatic कोशिकाओं 12 का सबसे अच्छा नैदानिक ​​मार्कर प्रदान नहीं करते हैं. महत्वपूर्ण बात है, EMT आया है कि सेल प्रकार की एक किस्म का विश्लेषण कैंसर और फाइब्रोसिस 11 में नैदानिक ​​उद्देश्यों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि आम जीन अभिव्यक्ति हस्ताक्षर विकसित करने के लिए उपयोगी है. इसके अलावा, हाल के अध्ययनों से दिखा दिया है कि ईमीट्रिक टन EMT आया है कि कोशिकाओं इन कोशिकाओं को 13 लक्षित कर सकते हैं कि यौगिकों की पहचान करने के लिए दवा स्क्रीनिंग के लिए उपयोगी हो सकता है, सुझाव है कि कैंसर स्टेम कोशिकाओं के निर्माण में एक भूमिका निभा सकते हैं.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Epithelial cells of interest</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>We have tested: A431, A549, HT29, T98G, MCF10A, MCF7, and PANC1</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EMT Inducing Media Supplement</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>CCM017</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Recombinant Human TGF-&beta;1</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>240-B</td>
			<td>Used at 10ng/ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Anti-E-Cadherin NL557 conjugated antibody</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>NL648R</td>
			<td>Used at a 1:10 dilution for immunocytochemistry</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Anti-E-Cadherin </td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>MAB1838</td>
			<td>Used at 0.1 &mu;g/ml for western blotting</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Anti-Fibronectin</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>MAB1918</td>
			<td>Used at 10 &mu;g/ml for immunocytochemistry; Used at 0.5 &mu;g/ml for western blotting</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Anti-GAPDH</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>AF5718</td>
			<td>Used at 0.2 &mu;g/ml for western blotting</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Goat Anti-Mouse NL493 Secondary Antibody</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>NL009</td>
			<td>Used at a 1:200 dilution for immunocytochemistry</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Donkey Anti-Goat HRP Secondary Antibody</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>HAF109</td>
			<td>Used at 1:2000 for western blotting</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Goat Anti-Mouse HRP Secondary Antibody</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>HAF007</td>
			<td>Used at 1:2000 for western blotting</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EMT 3-Color Immunocytochemistry Kit</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>SC026</td>
			<td>Used according to the manufacturer's instructions. This kit contains directly conjugated antibodies against E-cadherin, Vimentin, and Snail.</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>96 Well BME Cell Invasion Assay</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>3455-096-K</td>
			<td>This kit was used according to the manufacturer's recommendations.</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Proteome Profiler Human Phospho-MAPK Array Kit</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>ARY002B</td>
			<td>This kit was used according to the manufacturer's recommendations19.</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mounting Media</td>
			<td>R &amp; D Systems</td>
			<td>CTS011</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>0.4% Trypan Blue Solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15350-061</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>1X Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>95% Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A3311</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Roche Molecular Biochemicals</td>
			<td>789-704</td>
			<td>Dilute in 1X PBS to make a 10% stock solution</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Dilute in 1X PBS to a 4% working concentration.</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DAPI Solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9542</td>
			<td>Make stock solution at 14.3mM by dissolving in water. Working solution is a 1:5000 dilution of the stock solution in 1X PBS.</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fine pointed curved forceps</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>08-875</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>12 mm coverslips</td>
			<td>Carolina Biological</td>
			<td>633009</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Nonfat dry milk</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Used at 5% in TBST for blocking in western blotting</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>TBST [25mM Tris, pH 7.4, 0.15M NaCl, 0.1% Tween 20]</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For western blotting blocking and washing</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>PVDF Membrane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For western blotting </td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>4-20% SDS-page gel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For western blotting</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>ECL substrate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For western blotting</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>15 ml conical tubes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Plates/flasks, tissue culture treated</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>24-well plates, tissue culture treated</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pipettes / pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pipet Aid / pipets</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>37 &deg;C Water Bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>37 &deg;C/5%CO2 Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Inverted light microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

induction and analysis of epithelial to mesenchymal transition

Mesenchymal संक्रमण (EMT) को उपकला विकास के दौरान उचित morphogenesis के लिए आवश्यक है. इस प्रक्रिया के misregulation फाइब्रोसिस में एक महत्वपूर्ण घटना है और एक metastatic राज्य को कार्सिनोमा की प्रगति के रूप में शामिल किया गया है. EMT आबाद कि प्रक्रियाओं को समझना शीघ्र निदान और इन राज्यों रोग के नैदानिक ​​नियंत्रण के लिए आवश्यक है. इन विट्रो में EMT के विश्वसनीय प्रेरण नैदानिक ​​प्रयोजनों के लिए आम जीन अभिव्यक्ति हस्ताक्षर की पहचान करने के लिए एक उपयोगी दवाओं की खोज के लिए उपकरण के रूप में भी है. यहाँ हम सेल प्रकार की एक किस्म में EMT के शामिल होने के लिए एक सरल तरीका प्रदर्शित करता है. कोशिकाओं immunocytochemistry से पूर्व और बाद EMT प्रेरण के विश्लेषण के लिए तरीके भी शामिल किए गए हैं. इसके अतिरिक्त, हम एंटीबॉडी आधारित सरणी विश्लेषण और माइग्रेशन / आक्रमण assays के माध्यम से इस विधि की प्रभावशीलता को प्रदर्शित.

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Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition Video (Video) | JoVE

एक सरल तरीका सेल प्रकार की एक किस्म में mesenchymal संक्रमण (EMT) को उपकला के शामिल होने के लिए वर्णित है. Immunocytochemistry द्वारा EMT राज्यों में कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए तरीके शामिल हैं.

Mesenchymal संक्रमण के लिए प्रेरण और उपकला का विश्लेषण

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Research

JoVE Journal

Biology

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Light/dark Transition Test for Mice

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/ प्रकाश अंधेरे चूहे के लिए संक्रमण टेस्ट

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

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Neurotoxicity के उच्च सामग्री विश्लेषण के लिए एक neuronal और astrocyte सह संस्कृति परख

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

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लाइव सेल इमेजिंग और भ्रूणीय उपकला कोशिकाओं के मात्रात्मक विश्लेषण में Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

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शाही सेना शोधन द्वारा chromatin अलगाव (कूजन)

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Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

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बाल उत्थान के दौरान तेजी से उपकला-mesenchymal संकेतन की आनुवांशिक विश्लेषण

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

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वयस्क माउस छेनी से चिकित्सकीय उपकला स्टेम कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Detection of Alternative Splicing During Epithelial-Mesenchymal Transition

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उपकला-Mesenchymal संक्रमण के दौरान वैकल्पिक Splicing की जांच

Alternative splicing plays a critical role in the epithelial-mesenchymal transition (EMT), an essential cellular program that occurs in various ...

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Manipulating the Murine Lacrimal Gland Video (Video) | JoVE

Murine अश्रु ग्रंथि जोड़ तोड़

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

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Murine Colonic म्यूकोसा के microdissection के लिए Cryosectioning विधि

The colonic mucosal tissue provides a vital barrier to luminal antigens. This barrier is composed of a monolayer of simple columnar epithelial cells. The ...

Magnetic-Activated Cell Sorting Strategies to Isolate and Purify Synovial Fluid-Derived Mesenchymal Stem Cells from a Rabbit Model

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चुंबकीय-सक्रिय सेल छंटाई रणनीतियों को अलग करने और शुद्ध श्लेष द्रव-व्युत्पंन Mesenchymal एक खरगोश मॉडल से स्टेम कोशिकाओं

Mesenchymal stem cells (MSCs) are the main cell source for cell-based therapy. MSCs from articular cavity synovial fluid could potentially be used for ...