Name: improved preparation and preservation of hippocampal mouse slices for a very stable and reproducible recording of long-term potentiation
Uploaded: 2013-06-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation at JoVE.com

نشكر برنار Foucart للحصول على المساعدة الفنية. وأيد هذا العمل من قبل الصندوق البلجيكي للبحوث العلمية (FRS-FNRS) وصندوق الملكة إليزابيث للبحوث الطبية. أنياس فيير هو زميل باحث في الصندوق البلجيكي للبحوث العلمية.

ونفذت جميع الإجراءات الحيوانية وفقا للمعاهد الوطنية للوائح الصحية لرعاية واستخدام الحيوانات في البحوث وبالاتفاق مع لجنة الأخلاقيات المحلية. 1. إعداد الاصطناعي السائل الدماغي الشوكي يتم استخ...

وقد وضعنا في المختبر لدينا بروتوكول الناجمة عن مزيج من الأساليب المتقدمة والمستخدمة من قبل مختبرات أخرى وجود خبرة كبيرة في الكمونية التسجيلات 11،17. ويتم تكييف هذا البروتوكول لالحصين الماوس الكبار، ويمكن استخدامها في الحيوانات في أي عمر ولأي الوراثي الخلفية. ك?...

في الوقت الحاضر، هناك فهم محدود من كيفية تخزين الذكريات معقدة وأشار على مستوى الدوائر العصبية. ومع ذلك، فإن فرضية توحيد تخزين الذاكرة متاحة ومقبولة على نطاق واسع: يتم تخزين ذكريات عن التغيرات في قوة الاتصالات المشبكية بين الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي. من تلقاء نفسها، وقد استفاد البحث عن اللدونة متشابك إلى حد كبير من اثنين من الاكتشافات. (1) وجدت تجربة المنوية، النعيم وومو 1، وذلك باستخدام أرنب تخدير سليمة، وفي هذا تسليم قصيرة عالية التردد (1 ثانية، 100 هرتز) التحفيز على مسار الثاقب من الحصين تسبب طويل الأمد (عدة ساعات) زيادة في اتصالات متشابك ذات الصلة. كان يطلق على هذه الظاهرة الرائعة &quot;الكمونية طويلة الأمد&quot; أو الكمونية من قبل دوغلاس وغودارد في عام 1975 2. (2) في وقت لاحق، تبين أن ظاهرة مماثلة يمكن أن تسبب في شرائح الدماغ (0.4 ملم) الحفاظ بشكل مصطنع على قيد الحياة في المختبر </eم&gt;. وقد لوحظ الكمونية الأكثر دراسة على نطاق واسع في المختبر من خلال تقديم واحدة أو عدة الكزازية إلى مجموعة من المحاور (ما يسمى الضمانات شيفر) أثناء تسجيل الناتجة حقل إمكانات متشابك مثير أثار في الخلايا العصبية الهرمية من ما يسمى المنطقة CA1. إلى حد كبير وكشفت آليات الكمونية الاستقراء. أساسا، كا 2 + تدفق من خلال المستقبلات NMDA ينشط الإنزيمات مع نتيجتان: أ الفسفرة من مستقبلات أمبا (والتي تزيد كفاءتها)، وإدماج مستقبلات أمبا اضافية في الغشاء بعد المشبكي 3. على النقيض من ذلك، فإن آليات للمرحلة صيانة الكمونية غير معروفة إلى حد كبير، وخاصة لأنه أكثر صعوبة بكثير تجريبيا للحفاظ على شريحة صحية لعدة ساعات من لمدة 30 إلى 60 دقيقة. وقد تم تخصيص الكثير من الدراسات لفهم آليات الكمونية ونظريات مثيرة للاهتمام قد وضعت على مدى السنوات 4-11. ولكن الأمم المتحدةسمسم الآن، لم يتم توضيح الآليات الجزيئية الكامنة وراء زيادة دقيقة مستقرة في قوة متشابك. هذا قد يكون عائدا جزئيا إلى صعوبة استخراج النتائج السابقة في مختبرات مختلفة باستخدام تقنيات مختلفة لإعداد والحفاظ على شرائح الحصين. في ورقة منهجيتها، Sajikumar وآخرون. 12 وشدد على أهمية الظروف التجريبية لإعداد شرائح قرن آمون الفئران وتسجيل الكمونية مستقرة. في هذا الفيديو نقدم جميع الخطوات الأمثل وضعت في المختبر لدينا على مر السنين لتكون قادرة على تسجيل الكمونية مستقرة جدا في شرائح الحصين الماوس. وقد أحرز هذا التحسين من البروتوكولات التي وضعت واستخدمت بنجاح من قبل مختبرات أخرى التي تدرس آليات الكمونية في الفئران والجرذان 13 11. فإنه يسمح للباحثين من ذوي الخبرة للحث وتسجيل الكمونية طويلة الأمد جدا في الفئران البالغة مع نسبة عالية من النجاح. عتم فحص أساس hysiological من صنع الكمونية بعناية وأظهرت 14. في هذه الورقة منهجية، وتبين لنا أن أي تعديلات من الظروف التجريبية، مثل درجة الحرارة أو الأوكسجين يمكن أن يكون لها تأثير عميق على صيانة الكمونية في حين يمكن إجراء تشريح تعديل عميق شرائح استثارة. ولا بد أيضا من التأكيد على أن مراقبة دقيقة من كل هذه المعايير يتطلب تدريب عدة أشهر للطلاب المبتدئين.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>S8875</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>G7528</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4 1M</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>63126</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen</td>
			<td>Air Liquide (Belgium)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillaries</td>
			<td>WPI, Inc. (UK)</td>
			<td>TW150-4</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulating Electrodes</td>
			<td>FHC (USA)</td>
			<td>CE2B30</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td>FST (Germany)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper 84 g/m2</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>FT-3-105-110</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>Lycra</td>
			<td>15 den</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>UHU</td>
			<td>plus endfest300</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>WPI, Inc. (UK)</td>
			<td>ISO-80</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Interface recording chamber</td>
			<td>FST (Germany)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pumps</td>
			<td>Gilson (USA)</td>
			<td>Minipuls 3</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controller</td>
			<td>University of Edinburgh</td>
			<td><a href="http://www.etcsystem.com" target="_blank">www.etcsystem.com</a></td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Chopper</td>
			<td>Mcllwain</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulators</td>
			<td>Grass (USA)</td>
			<td>S88X + SIU-V</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Program analysis</td>
			<td>WinLTP</td>
			<td><a href="http://www.winltp.com" target="_blank">www.winltp.com</a></td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulators</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MM-3 and MMO-220A</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Leica Microsystem</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A/D converter</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>NIPCI-6229 M-series</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improved preparation and preservation of hippocampal mouse slices for a very stable and reproducible recording of long-term potentiation

التقوية الطويلة الأمد (الكمونية) هو نوع من اللدونة متشابك يتميز بزيادة في قوة متشابك ويعتقد أن تشارك في ترميز الذاكرة. أثارت الكمونية في المنطقة CA1 من شرائح الحصين الحادة وقد درس على نطاق واسع. ولكن الآليات الجزيئية الكامنة وراء مرحلة الصيانة لهذه الظاهرة لا تزال غير مفهومة تماما. هذا قد يكون عائدا جزئيا إلى مختلف الظروف التجريبية المستخدمة من قبل مختبرات مختلفة. والواقع أن مرحلة الصيانة من الكمونية وتعتمد بشدة على معايير خارجية مثل الأوكسجين ودرجة الحرارة والرطوبة. بل هو أيضا تعتمد على المعلمات الداخلية مثل التوجه للطائرة تشريح والجدوى شريحة بعد تشريح. الاستفادة المثلى من كل هذه المعايير تمكن من تحريض على التقوية استنساخه جدا ومستقرة جدا على المدى الطويل. هذه المنهجية توفر إمكانية مواصلة استكشاف الآليات الجزيئية المشاركة في زيادة مستقرةفي قوة متشابك في شرائح قرن آمون. كما يسلط الضوء على أهمية الظروف التجريبية في المختبر التحقيق في الظواهر العصبية.

وقد استخدمت هذه المنهجية لتحليل خصائص التقوية طويلة الأمد طويل الأجل يتسبب في شرائح الحصين الحادة من الكبار الفئران C57BL/6J (JANVIER SAS، فرنسا) 14. والمثير للدهشة، وقد أدى تحسين الظروف التجريبية إلى طريقة جديدة للنظر إلى الكمونية. نحن أظهرت أن زيادة طويلة الأمد في قوة ?...

Watch this Scientific Journal Video about Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation at JoVE.com

Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation

وتعرض هذه الورقة منهجية كاملة لإعداد والحفاظ على<em&gt; في المختبر</em&gt; شرائح الحصين الحادة من فئران بالغة. هذا البروتوكول يسمح للتسجيل من التقوية طويلة الأجل طويلة الأمد مستقرة جدا (الكمونية) لأكثر من 8 ساعات مع نسبة نجاح 95٪.

تحسين إعداد والحفاظ على شرائح الحصين ماوس لتسجيل مستقرة جدا وقابلة للتكرار من التقوية بعيدة المدى

Long-term potentiation (LTP) is a type of synaptic plasticity characterized by an increase in synaptic strength and believed to be involved in memory ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric &#946;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

إعداد Oligomeric β اميلويد 1-42 والتعريفي للعاهة اللدونة متشابك على شرائح الحصين

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

إعداد شرائح الحصين الحادة من الجرذان والفئران المعدلة وراثيا لدراسة التعديلات متشابك وامراض الشيخوخة خلال اميلويد

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

استنساخه سحق الفأر العصب الوركي وتقييم لاحق للتجديد من قبل الجامعة جبل تحليل العضلات

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse Brain

مصقول وعززت ضعيفة، جمجمة نافذة على المدى الطويل التصوير من مخ الفأر

In vivo imaging of cortical function requires optical access to the brain without disruption of the intracranial environment. We present a method to form ...

Preparation of an Awake Mouse for Recording Neural Responses and Injecting Tracers

إعداد الفأر استيقظ لتسجيل الردود العصبية وحقن الراسمات

It is well known that anesthesia alters neural response properties in various regions of the brain.13.  In the auditory system, fundamental response ...

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

A قراءات الجزيئية من التكيف على المدى الطويل في الشم<em&gt; C. ايليجانس</em

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

تقرن تسجيلات خلية كاملة في عضوي شرائح الحصين

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

على المدى الطويل الوقت الفاصل بين التصوير من الفأر القوقعة إإكسبلنتس

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

A Simplified Method for Ultra-Low Density, Long-Term Primary Hippocampal Neuron Culture

والطريقة المبسطة للفائقة منخفضة الكثافة، طويل الأجل الابتدائية الحصين العصبية الثقافة

Culturing primary hippocampal neurons in vitro facilitates mechanistic interrogation of many aspects of neuronal development. Dissociated embryonic ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

تسجيل اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد تحتفظ في صغيرة الحجم-إعادة التدوير، ونضح-، وغمر من نوع نظام الدائرة

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...