Name: improved preparation and preservation of hippocampal mouse slices for a very stable and reproducible recording of long-term potentiation
Uploaded: 2013-06-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation at JoVE.com

Teknik yardım için Bernard Foucart teşekkür ederim. Bu çalışma Bilimsel Araştırma Belçika Fonu (FRS-FNRS) tarafından ve Tıbbi Araştırma Kraliçe Elisabeth Fonu tarafından desteklenmiştir. Agnès Villers Bilimsel Araştırma için Belçika Fonu Araştırma üyesidir.

Tüm hayvan prosedürleri araştırma hayvanların bakım ve kullanımı için Sağlık düzenlemeler Ulusal Sağlık Enstitüleri uygun olarak ve yerel etik kurul onayı ile yapılmıştır. 1. Yapay Cerebro-spinal Sıvı hazırlanması Aynı medya, incelemek kesme ve dinlenme süresi ve elektrofizyolojik sırasında dilimleri (1 ml / dak) serpmek için kullanılır. Bu ortam, 124 mM NaCI, 4.4 mM KCI, 26 mM NaHCO 3, 1 mM NaH 2 PO 4,</sub...

Biz laboratuvarda geliştirilen ve LTP kayıtları 11,17 büyük bir uzmanlığa sahip diğer laboratuvarlar tarafından kullanılan yöntemlerin kombinasyonu kaynaklanan bir protokol geliştirdik. Bu protokol, yetişkin fare hipokampus adapte edilir ve her yaşta ve arka plan genotip hayvanlarda kullanılabilir. Ayrıca, Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif hastalıkların 18,19 gelişmekte olan transgenik farenin LTP analizine izin verir. Sıçan hipokampal di...

Günümüzde, karmaşık anıları saklanır ve nöronal devre düzeyinde hatırlattı nasıl sınırlı anlayış vardır. Ancak, bellek depolama birleştirici bir hipotez mevcut ve genel olarak kabul edilir: hafızası merkezi sinir sistemindeki nöronlar arasındaki sinaptik bağlantıların gücü değişiklikleri olarak depolanır. Kendi başına, sinaptik plastisite araştırma büyük ölçüde iki atılım keşifler yararlanmıştır. (1) olarak sağlam anestezi tavşan kullanarak yeni ufuklar açan bir deney, Bliss ve Lomo 1,, kısa bir yüksek frekanslı (1 sn, 100 Hz) hipokampus olan delici yoluna stimülasyon teslim uzun süreli (birkaç neden olduğu bulundu saat) ilgili sinaptik bağlantıları artış. Bu büyüleyici fenomen 1.975 2 Douglas ve Goddard tarafından &quot;Uzun Vadeli potansiyelize&quot; veya LTP denirdi. (2) Daha sonra, benzer bir olay (0.4 mm) beyin dilimleri içinde devreye girebilir bulunmuştur yapay in vitro canlı tutulur </em&gt;. En yaygın olarak incelenmiştir LTP sözde CA1 bölgesinde piramidal nöronlarda uyarılmış çıkan alan uyarıcı sinaptik potansiyel kayıt sırasında aksonlar (sözde Schaffer kollateral) bir paket için bir veya birkaç tetani sunarak, in vitro tespit edildi. LTP indüksiyon mekanizmaları büyük ölçüde ortaya konmuştur. AMPA alıcılarının fosforilasyonuyla (verimlilik artar) ve post-sinaptik zar 3 ilave AMPA alıcılarının bir birleşme: Temel olarak, NMDA reseptörleri ile Ca2 + akışı, iki sonuçları olan enzimleri aktive. Deneysel olarak çok daha zor 30-60 dakika boyunca daha uzun saatler boyunca sağlıklı bir dilim sağlamaktır, özellikle, çünkü aksine, LTP bakım fazı mekanizmaları tam olarak bilinmemektedir. Birçok çalışma, LTP mekanizmaları ve ilginç teorileri anlayışı ithaf edilmiş yıllar 4-11 üzerinde ayrıntılı edilmiştir. Ama until şimdi, sinaptik gücü istikrarlı bir artış altında yatan kesin moleküler mekanizmaları ortaya konamamıştır. Bu hazırlanması için farklı teknikler kullanarak farklı laboratuvarlarda önceki sonuçları yeniden zorluk ve hipokampal dilim bakım kısmen olabilir. Onların metodoloji yazıda, Sajikumar ve ark. 12 sıçan hipokampal dilimleri ve istikrarlı LTP kayıt hazırlanması için deneysel koşullar önemini vurguladı. Bu videoda fare hipokampal dilim çok istikrarlı LTP kayıt edebilmek için yıllar boyunca laboratuarımızda geliştirilen tüm optimizasyon adımları sunuyoruz. Bu optimizasyon farenin 13 ve 11 sıçan LTP mekanizmaları incelemek diğer laboratuarlar tarafından geliştirilmiştir ve başarılı bir şekilde kullanılan protokoller yapılmıştır. Bu deneyimli araştırmacılar neden ve başarı oranı yüksek olan yetişkin farelerde çok uzun ömürlü LTP kaydetmenize olanak verir. Pbağlı LTP hysiological olarak dikkatli bir şekilde kontrol ve 14 gösterilmiştir. Bu metodoloji yazıda, diseksiyon işlemi derin dilimleri heyecanlanma değiştirebilirsiniz ise sıcaklık veya oksijen gibi deneysel koşullardan herhangi bir değişiklik, LTP bakım üzerinde derin bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir. Ayrıca tüm bu parametrelerin hassas kontrol acemi öğrenciler için birkaç aylık bir eğitim gerektirdiğini vurgulamak gerekir.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>S8875</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>G7528</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4 1M</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>63126</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen</td>
			<td>Air Liquide (Belgium)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillaries</td>
			<td>WPI, Inc. (UK)</td>
			<td>TW150-4</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulating Electrodes</td>
			<td>FHC (USA)</td>
			<td>CE2B30</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td>FST (Germany)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper 84 g/m2</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>FT-3-105-110</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>Lycra</td>
			<td>15 den</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>UHU</td>
			<td>plus endfest300</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplifier</td>
			<td>WPI, Inc. (UK)</td>
			<td>ISO-80</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Interface recording chamber</td>
			<td>FST (Germany)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pumps</td>
			<td>Gilson (USA)</td>
			<td>Minipuls 3</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controller</td>
			<td>University of Edinburgh</td>
			<td><a href="http://www.etcsystem.com" target="_blank">www.etcsystem.com</a></td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Chopper</td>
			<td>Mcllwain</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulators</td>
			<td>Grass (USA)</td>
			<td>S88X + SIU-V</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Program analysis</td>
			<td>WinLTP</td>
			<td><a href="http://www.winltp.com" target="_blank">www.winltp.com</a></td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulators</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MM-3 and MMO-220A</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Leica Microsystem</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A/D converter</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>NIPCI-6229 M-series</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improved preparation and preservation of hippocampal mouse slices for a very stable and reproducible recording of long-term potentiation

Uzun vadeli potensiyalizasyon (LTP) sinaptik gücü bir artış ile karakterize sinaptik plastisite türüdür ve bellek kodlama dahil olmak inanıyordu. LTP yoğun çalışılmıştır akut hipokampal dilim CA1 bölgesinde ortaya çıkardı. Ancak bu olayın bakım aşamasında altında yatan moleküler mekanizmalar hala tam olarak anlaşılamamıştır. Bu farklı laboratuarlar tarafından kullanılan çeşitli deneysel koşullar, kısmen bağlı olabilir. Gerçekten de, LTP bakım aşamasında oksijen, sıcaklık ve nem gibi dış parametrelere sıkı bir şekilde bağlıdır. Ayrıca diseksiyonu sonra dilimleme uçak ve dilim canlılığı yönelim gibi iç parametreleri bağlıdır. Tüm bu parametrelerin optimizasyonu çok tekrarlanabilir ve çok istikrarlı uzun vadeli potensiyasyonun indüksiyon sağlar. Bu metodoloji daha da istikrarlı bir artış yer alan moleküler mekanizmaları keşfetmek için imkan sunuyorhipokampal dilim sinaptik gücü. Ayrıca nörofizyolojik olayların in vitro soruşturma deneysel koşullarının önemini vurgulamaktadır.

Bu metodoloji, erişkin farenin C57Bl/6J (JANVIER SAS, Fransa) 14 akut hipokampal dilimler indüklenir uzun süreli uzun süreli potansiyasyon özelliklerini analiz etmek için kullanılmıştır. Şaşırtıcı bir şekilde, deneysel koşullarının iyileştirilmesi LTP bakarak yeni bir yol yol açmıştır. Biz sinaptik gücü uzun süreli artış yeni protein sentezi gerektirmeyen gösterdi. Burada, LTP indüksiyon dilim canlılığı ve heyecan bağlı olduğunu göstermektedi...

Watch this Scientific Journal Video about Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation at JoVE.com

Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation

Bu makale hazırlamak ve korumak için tam bir metodoloji sunar<em&gt; In vitro</emYetişkin farelerin&gt; akut hipokampal dilim. Bu protokol% 95 başarı oranı ile fazla 8 saat boyunca çok sağlam uzun ömürlü uzun vadeli potansiyasyonu (LTP) ve kayıt sağlar.

Uzun vadeli potansiyelize bir çok Kararlı ve tekrarlanabilir Kayıt için geliştirilmiş Hazırlık ve Hipokampal Fare Dilimleri korunması

Long-term potentiation (LTP) is a type of synaptic plasticity characterized by an increase in synaptic strength and believed to be involved in memory ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric &#946;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Β-amiloid Oligomerik hazırlanması 1-42</subHipokampal Dilimleri Sinaptik Plastisite değer düşüklüğü> İndüksiyon

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Nörobilim

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

Yaşlanma ve Amiloid Patoloji sırasında sinaptik değişiklikler Çalışması Sıçanlar ve Transgenik Farelerde akut Hipokampal Dilimleri hazırlanması

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse Brain

Fare Beyin Uzun vadeli Görüntüleme için Parlak ve Takviyeli inceltilmiş-kafatası Pencere

In vivo imaging of cortical function requires optical access to the brain without disruption of the intracranial environment. We present a method to form ...

Preparation of an Awake Mouse for Recording Neural Responses and Injecting Tracers

Sinir Yanıtları Kayıt ve Tarayıcıları enjekte için bir Awake Fare hazırlanması

It is well known that anesthesia alters neural response properties in various regions of the brain.13.  In the auditory system, fundamental response ...

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

Uzun vadeli Olfaktör İntibak A Moleküler Saati<em&gt; C. elegans</em

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

Organotipik Hipokampal Dilimleri eşleştirilmiş Tüm Hücre Kayıtlar

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

Fare Koklear Eksplantlarından uzun vadeli Time Lapse Görüntüleme

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

A Simplified Method for Ultra-Low Density, Long-Term Primary Hippocampal Neuron Culture

Ultra Düşük Yoğunluk için Basitleştirilmiş Bir Yöntem, Uzun Vadeli İlköğretim Hipokampal Nöron Kültürü

Culturing primary hippocampal neurons in vitro facilitates mechanistic interrogation of many aspects of neuronal development. Dissociated embryonic ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...