Name: a sensitive method to quantify senescent cancer cells
Uploaded: 2013-08-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells at JoVE.com

Biz sitometri tesisin kullanımı için SF 4206 icore (Université de Caen) teşekkür ederim. JC Conseil de Radyokorunum d&#39;EDF ve Basse-Normandie Conseil Régional gelen doktora sonrası burslar aldı. Comites de l&#39;Orne et du Calvados - Bu veriler Ligue Nationale contre le Kanser tarafından finanse edilen projelerin bir parçasıydı.

1. C12FDG bafilomisin A1 ve Hücre Kültürü hazırlanması <ol><li> 20 mM&#39;lik nihai bir konsantrasyona kadar, dimetil sülfoksit (DMSO) içinde 12 C FDG toz çözülür. -20 ° C&#39;de kısım ve mağaza DMSO uygun emniyet koşulları ile birlikte kullanılmalıdır. </li><li> 0.1 mM nihai konsantrasyona kadar DMSO içinde bafilomisin A1 toz çözülür. De kısım ve mağaza - 20 ° C Bafilomisin uygun emniyet koşulları ile birlikte kullanılmalıdır. </li><li> 37,% 10 fetal sığır serumu ve% 1...

<ol>
	<li>Hayflick, L., Moorhead, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+serial+cultivation+of+human+diploid+cell+strains.">The serial cultivation of human diploid cell strains.</a> Experimental Cell Research. 25, 585-621 (1961).</li><li>Campisi, J., d'Adda di Fagagna, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+senescence:+when+bad+things+happen+to+good+cells.">Cellular senescence: when bad things happen to good cells.</a> Nature Review Molecular Cell Biology. 8 (9), 729-740 (2007).</li><li>Shay, J. W., Roninson, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+senescence+in+carcinogenesis+and+cancer+therapy.">Hallmarks of senescence in carcinogenesis and cancer therapy.</a> Oncogene. 23 (16), 2919-2933 (2004).</li><li>Bartkova, J., Rezaei, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncogene-induced+senescence+is+part+of+the+tumorigenesis+barrier+imposed+by+DNA+damage+checkpoints.">Oncogene-induced senescence is part of the tumorigenesis barrier imposed by DNA damage checkpoints.</a> Nature. 444 (7119), 633-637 (2006).</li><li>Takacova, S., Slany, R., Bartkova, J., Stranecky, V., Dolezel, P., Luzna, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage+response+and+inflammatory+signaling+limit+the+MLL-ENL-induced+leukemogenesis+in+vivo.">DNA damage response and inflammatory signaling limit the MLL-ENL-induced leukemogenesis in vivo.</a> Cancer Cell. 21, 517-531 (2012).</li><li>Krtolica, A., Parrinello, S., Lockett, S., Desprez, P. Y., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+fibroblasts+promote+epithelial+cell+growth+and+tumorigenesis:+a+link+between+cancer+and+aging.">Senescent fibroblasts promote epithelial cell growth and tumorigenesis: a link between cancer and aging.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 98, 12072-12077 (2001).</li><li>Coppe, J. P., Patil, C. K., Rodier, F., Sun, Y., Munoz, D. P., Goldstein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence-associated+secretory+phenotypes+reveal+cell-nonautonomous+functions+of+oncogenic+RAS+and+the+p53+tumor+suppressor.">Senescence-associated secretory phenotypes reveal cell-nonautonomous functions of oncogenic RAS and the p53 tumor suppressor.</a> PLoS Biology. 6, 2853-2868 (2008).</li><li>Roninson, I. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cell+senescence+in+cancer+treatment.">Tumor cell senescence in cancer treatment.</a> Cancer Research. 63 (11), 2705-2715 (2003).</li><li>Dimri, G. P., Lee, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biomarker+that+identifies+senescent+human+cells+in+culture+and+in+aging+skin+in+vivo.">A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 92 (20), 9363-937 (1995).</li><li>Kurz, D. J., Decary, S., Hong, Y., Erusalimsky, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence-associated+(beta)-galactosidase+reflects+an+increase+in+lysosomal+mass+during+replicative+ageing+of+human+endothelial+cells.">Senescence-associated (beta)-galactosidase reflects an increase in lysosomal mass during replicative ageing of human endothelial cells.</a> Journal of Cell Science. 113, 3613-3622 (2000).</li><li>Debacq-Chainiaux, F., Erusalimsky, J. D., Campisi, J., Toussaint, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocols+to+detect+senescence-associated+beta-galactosidase+(SA-betagal)+activity,+a+biomarker+of+senescent+cells+in+culture+and+in+vivo.">Protocols to detect senescence-associated beta-galactosidase (SA-betagal) activity, a biomarker of senescent cells in culture and in vivo.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1798-1806 (2009).</li><li>Cahu, J., Bustany, S., Sola, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence-associated+secretory+phenotype+favors+the+emergence+of+cancer+stem-like+cells.">Senescence-associated secretory phenotype favors the emergence of cancer stem-like cells.</a> Cell Death and Disease. Dec 20, 3-e446 (2012).</li></ol>

Burada canlı kanser hücrelerinin hücresel yaşlanma ölçmek için bir akım sitometri tabanlı bir yöntem sundu. Bu yöntem, zarın geçirgen bileşik, C 12 FDG kullanımına dayanmaktadır, ve bu bileşiğin hücreler tarafından alınır gibi bu nedenle herhangi bir hücre tipinde ve uzun gibi çeşitli tedavilerden sonra kullanılabilir. Hücresel alımı üzerine, C 12 FDG senil hücrelerin lizozomlarında zenginleştirilmiş β-galaktosidaz ile hidrolize edilir. Lazer uyarımı geçtikten...

Erken altmışlı ve Hayflick ve Moorhead tarafından keşfedilmesinden bu yana, yaşlılık hala bir cep merak 1 kalır. İnsan hücreleri süresiz yaşlanma ile, Hayflick ve Moorhead yaşlanma hücresel süreci icat, çoğalırlar ve yok. Yaşlanması hücresel ölüme karşı hücrelerin metabolik olarak aktif kaldığı istikrarlı bir hücre döngüsü tutuklama olduğunu. Telomer kısalması, DNA hasarı, kromatin pertürbasyon ve mitojenik onkogenler anormal ifadesi 2: Bugüne kadar, dört hücresel mekanizmaları yaşlanması neden gösterilmiştir. Bu, normal hücrelere değil sadece göstermekle kalmaz, ayrıca kanser hücrelerinin yaşlanmayı 3 geçmesi mümkündür. Nitekim olarak, yaşlanması geçiren kanser hücreleri daha fazla tümör ilerlemesi 4-5 için bir engel teşkil gösterilmiştir. Ancak, bazı raporlar artık belirli koşullar altında, hücresel yaşlanma da malignite 6-7 teşvik edebilir, dikkat çekmişlerdir. Kanser cel bir yaşlılık incelenmesils şu anda kemoterapötik ilaçların in vitro hem de in vivo 8&#39;de sadece kanser hücrelerinin yaşlanması yol açabilir kullanılan kanser araştırmalarında bir dürtü haline üzere. Senil hücrelerin varlığını araştırmak için ana tahlil asidik pH değerinde β-galaktosidaz deneyidir. Bu, histokimyasal deney en yaşlı hücrelerdeki meydana lizozomal biogenesizdeki artış gösterir. Kısaca, hücreler uygulanmış ekzojen X-gal, mavi bir renk 9 sebebiyet veren, yaşlanmış hücrelerin lizozomlarında zenginleştirilmiş β-galaktosidaz ile yarılır. Mavi ihtiyarlık hücreler daha sonra bir parlak saha mikroskop altında ölçülebilir. Çok popüler olsa da, β-galaktosidaz deney büyük sakıncaları sunulur. İlk olarak, bu tahlil sabit hücreler üzerinde gerçekleştirilir. Bir mikroskop altında yaşlanan hücrelerin oldukça yüksek sayarak yaşlılık derecesini ölçmek için ima çünkü İkinci olarak, zaman alıcıdır. Üçüncü olarak, bu testteyaşlılık ve olmayan yaşlanan hücreler arasındaki ayrım tamamen gözlemci dayanır gibi hassas değildir. Burada canlı yaşlanan hücrelerin varlığı için değerlendirmek için bir keşfedilmemiş, hızlı ve hassas sitometri bazlı analiz tartışmak. Bu tahlil, bir membran geçirgen molekülünün hidrolizi, 5-dodecanoylaminofluorescein di-β-D-galaktopiranosid (C 12 FDG) esas alınmaktadır, β-galaktosidaz ile yaşlı hücrelerdeki zenginleştirilmiştir. Hidroliz ve lazer uyarımı sonra C 12 FDG yeşil flüoresan yayan ve bu nedenle akış sitometrisi 10, 11 ile tespit edilebilir. Akım sitometrisi ile senil hücrelerin tespit hızlı ve hassas olma büyük bir avantaj sunar. Buna ek olarak, akış sitometrisi ile ihtiyarlık hücrelerin saptanması diğer hücresel markerlerin saptanması ile akuple edilebilir. Bu deney, kemoterapi ile tedavi edilen kanser hücrelerinin bir popülasyon içindeki senil hücrelerin tespit etmek için kullanılabilir ve rutin olarak ayarlanabilirkadar doku kesitlerinde, hücresel ayrışma sonra, klinikte.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of the Reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>5-dodecanoylaminofluorescein di-&beta;-D-galactopyranoside </td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D-2893</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide </td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bafilomycin A1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B1793</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Sandoz</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>RPMI 1640 cell culture medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12-702</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal calf serum</td>
			<td>PAA Laboratories GmBH</td>
			<td>A15 101</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Antibiotics</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>5290-018</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Gallios flow cytometer</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A94291</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

a sensitive method to quantify senescent cancer cells

İnsan hücreleri süresiz çoğalmaya yok. Dış ve / veya iç kuyrukları üzerine, hücreler ölür veya yaşlılık olarak adlandırılan sabit bir hücre siklüs hapsine girebilir. Bu telomer kısalması ve mitojenik onkogenlerin anormal ifadesi olarak çeşitli hücresel mekanizmaları, yaşlılık neden olduğu gösterilmiştir. Yaşlılık normal hücreler ile sınırlı değildir, kanser hücreleri de senesce bildirilmiştir. Kemoterapik ilaçlar kanser hücrelerinde yaşlanmasının neden olduğu gösterilmiştir. Ancak, yaşlılık engelleyen veya tümörogenez teşvik olmadığını tartışmalıdır. Bunun sonunda hastaya özgü olabilir gibi, kanser hücresi yaşlanmayı değerlendirmek için hızlı ve hassas bir yöntem bir süre gerekli olacaktır. Bu amaçla, standart β-galaktosidaz deney, şu anda kullanılan yöntem, büyük sakıncaları sunulur: o zaman alıcı ve duyarlı değildir. Burada li yaşlılık çalışma bir akım sitometri bazlı analiz teklifhücreleri ettik. Bu deney, hassas ve hızlı olma avantajına sahiptir, ve çeşitli hücresel belirteçlerin immün akuple edilebilir.

Multipl Miyelom, bir hematolojik kanser, bir kemoterapik prosedür ile uyarılan yaşlanmayı değerlendirmek için kullanılmıştır. Bir ticari olarak temin edilebilen MM hücre hattı (RPMI 8226) doksorubisin, bir kemoterapik madde ile 2 gün boyunca tedavi edildi yapmak için. Hücreler daha sonra bafilomisin A1 muameleye tabi tutulur ve daha da C 12 FDG ile inkübe edildi. Hücreler akış sitometrisi ile analiz edilmiştir. Şekil 1, senil hücrelerin yüzdesi C 12 FDG kulla...

Watch this Scientific Journal Video about A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells at JoVE.com

A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells

Yaşlanması önler veya tümörogenez tartışmalıdır teşvik olsun. Kemoterapik ilaçlar senesce için kanser hücrelerinin neden olabilir bu yana, yaşlılık okuyan yeni tedaviler önermek için gereklidir. Ancak, standart ve geniş kullanılan β-galaktosidaz tahlil büyük sakıncaları sunar. Burada yaşlılık ölçmek için hızlı ve hassas akım sitometri bazlı analiz öneriyoruz.

Senesent Kanser Hücreleri ölçmek için bir Hassas Yöntem

Human cells do not indefinitely proliferate. Upon external and/or intrinsic  cues, cells might die or enter a stable cell cycle arrest called senescence. ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Murin Islet İzolasyon ve subkapsüler Böbrek Nakli Bir Yöntem

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Corneal Confocal Microscopy: A Novel Non-invasive Technique to Quantify Small Fibre Pathology in Peripheral Neuropathies

Kornea Konfokal Mikroskop: Periferik Nöropatiler Küçük Fiber Patoloji belirlememize • Bir Roman Non-invaziv Tekniği

The accurate quantification of peripheral neuropathy is important to define at risk patients, anticipate deterioration, and assess new therapies. ...

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

Kanser Hücreleri Endotel Hücre Tek tabakalı Invasion Tedbir Gerçek zamanlı Elektrik Empedans Tabanlı Tekniği

Metastatic dissemination of malignant cells requires degradation of basement membrane, attachment of tumor cells to vascular endothelium, retraction of ...

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

Basit Fare İntrakranial Xenograftlarında Çalışmaları Kılavuzu Vida Yöntemi

The grafting of human tumor cells into the brain of immunosuppressed mice is an established method for the study of brain cancers including glioblastoma ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

Üç Boyutlu Kültürler: Meme hücrelerinin malign Dönüşüm vs Normal Asiner Mimari Eğitim için Bir Aracı

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Katı Örneklerinin From İlköğretim Yumurtalık Kanseri Hücreleri alma için yöntem

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

Bir<em&gt; In Vitro</em&gt; Kemik İliği östrojen duyarlı Meme Kanseri Dormansi Model: Moleküler Mekanizması Çalışmaları ve Hipotez Üretimi için A Takım

The study of breast cancer dormancy in the bone marrow is an exceptionally difficult undertaking due to the complexity of the interactions of dormant ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Yumuşak Agar koloni oluşturma deneyi kullanılması Meme Kanseri Hücrelerinde tümör oluşum nedenlerinin nin inhibitörlerini teşhis etmek üzere

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...