Name: whole mount immunofluorescent staining of the neonatal mouse retina to investigate angiogenesis in vivo
Uploaded: 2013-07-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av Wellcome Trust og British Heart Foundation.

Alle trinnene blir utført ved romtemperatur med mindre annet er angitt. En. Enucleation og fiksering Postnatal Eyes <ol><li> Plasser avlives mus valp på sin side, fjerne huden som dekker øyet med saks. </li><li> Bruk saks og pinsett for å enucleate øyet. </li><li> Plasser saks under enucleated øye, kutt synsnerven og omkringliggende vev og løft ut øyet. Overføring til en 24-brønns plate som inneholder 4% paraformaldehyd (PFA) blandet med 2 x PBS ved romtemperatur. </li><li> Tilla...

<ol>
	<li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+and+clinical+applications+of+angiogenesis.">Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis.</a> Nature. 473 (7347), 298-307 (2011).</li><li>Staton, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+methods+for+assaying+angiogenesis+in+vitro+and+in+vivo.">Current methods for assaying angiogenesis in vitro and in vivo.</a> Int J. Exp. Pathol. 85 (5), 233-248 (2004).</li><li>Goodwin, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assays+of+angiogenesis+for+assessment+of+angiogenic+and+anti-angiogenic+agents.">In vitro assays of angiogenesis for assessment of angiogenic and anti-angiogenic agents.</a> Microvasc. Res. 74 (2-3), 172-183 (2007).</li><li>Lawson, N. D., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+embryonic+vascular+development+using+transgenic+zebrafish.">In vivo imaging of embryonic vascular development using transgenic zebrafish.</a> Dev. Biol. 248 (2), 307-318 (2002).</li><li>Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+retinal+vasculature.">Development of the retinal vasculature.</a> Angiogenesis. 10 (2), 77-88 (2007).</li><li>Sawamiphak, S., Ritter, M., Acker-Palmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+retinal+explant+cultures+to+study+ex+vivo+tip+endothelial+cell+responses.">Preparation of retinal explant cultures to study ex vivo tip endothelial cell responses.</a> Nat. Protoc. 5 (10), 1659-1665 (1038).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> J. Vis. Exp. (57), e3184 (2011).</li><li>Pitulescu, M. E., Schmidt, I., Benedito, R., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+gene+targeting+in+the+neonatal+vasculature+and+analysis+of+retinal+angiogenesis+in+mice.">Inducible gene targeting in the neonatal vasculature and analysis of retinal angiogenesis in mice.</a> Nat. Protoc. 5 (9), 1518-1534 (2010).</li><li>Allinson, K. R., Lee, H. S., Fruttiger, M., McCarty, J., Arthur, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+expression+of+TGFbeta+type+II+receptor+is+required+to+maintain+vascular+integrity+during+postnatal+development+of+the+central+nervous+system.">Endothelial expression of TGFbeta type II receptor is required to maintain vascular integrity during postnatal development of the central nervous system.</a> PLoS One. 7 (9), e39336 (2012).</li><li>Mahmoud, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+arteriovenous+malformations+in+the+absence+of+endoglin.">Pathogenesis of arteriovenous malformations in the absence of endoglin.</a> Circ. Res. 106 (8), 1425-1433 (2010).</li><li>Lebrin, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thalidomide+stimulates+vessel+maturation+and+reduces+epistaxis+in+individuals+with+hereditary+hemorrhagic+telangiectasia.">Thalidomide stimulates vessel maturation and reduces epistaxis in individuals with hereditary hemorrhagic telangiectasia.</a> Nat. Med. 16 (4), 420-428 (2010).</li><li>Pi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+connective+tissue+growth+factor+in+the+retinal+vasculature+during+development+and+ischemia.">Role of connective tissue growth factor in the retinal vasculature during development and ischemia.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52 (12), 8701-8710 (2011).</li><li>Powner, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+gene+expression+in+whole+mouse+retina+by+in+situ+hybridization.">Visualization of gene expression in whole mouse retina by in situ hybridization.</a> Nat. Protoc. 7 (6), 1086-1096 (2012).</li></ol>

Metoden som presenteres her tilbyr en enkel og effektiv måte å få bilder av farget hele montere preparater av neonatal mus netthinne, noe som gjør det til et lett kvantifiserbare og fysiologisk relevant modell av angiogenese. I utgangspunktet kan du bruke musen øye være ganske vanskelig å dissekere på grunn av sin lille størrelse og kloden form, så litt trening og gode disseksjon verktøy er nødvendig for pålitelige resultater. Disseksjon av øynene fremstilt i 2x konsentrasjon av PBS er viktig fordi dette m...

Angiogenese er en kompleks utviklingsprosess definert av dannelsen av nye blodkar fra en pre-eksisterende fartøy nettverk og er regulert av flere signalveier. Den mest fremtredende av disse er VEGF veien. VEGF er utgitt av iskemisk celler og fører til igangsetting av angiogeniske spire i nabolandet blodkar. Den ledende endotelceller fra en ny vaskulær spire er en &quot;spiss&quot; cellen, som produserer filopodia som strekker seg ut mot kilden av VEGF, og etterfølges av prolifererende &#39;stilken &quot;endotelceller. På denne måten aktiverte endotelceller migrerer og sprer mot en avaskulære region hvor de danner nye vaskulære rør. For å stabilisere disse rørene for å støtte blodstrøm, endotelialceller samhandler med pericytes og glatte muskelceller, som omgir de nye blodkar 1. Angiogenese er viktig for vascularization av embryoet og voksende vev. Men det bidrar også til mange patologiskgiske sykdommer slik som cancer, mens defekter i angiogenese er assosiert med ischemiske sykdommer. Utviklingen av effektive stoff behandlinger for å regulere angiogenese som et middel for behandling av sykdom er derfor av stor interesse. For eksempel vil effektive anti-angiogene faktorer redusere kreftutvikling, mens pro-angiogene strategier kan anvendes for å behandle iskemisk sykdom. Dermed modeller av angiogenese er avgjørende for å bedre forstå reguleringen av nye fartøy dannelse og for å utvikle nye terapeutiske strategier for å forbedre eller redusere vaskulær vekst. Et grunnleggende element av angiogenese forskning er valget av en passende vaskulær modell. Mange in vitro-modeller har blitt laget for å gjengi de grunnleggende trinnene av angiogenese som endotelcellemigrasjon, spredning og overlevelse 2,3. En mye benyttet in vitro-analysen er dannelsen av et forgrenet nettverk av endoteliale celler i et Matrigel matrise, selv om thans er ikke spesifikk for endotelceller, og heller ikke gjør det vanligvis innlemme støtte av pericytes eller glatte muskelceller. Vurdering av ex vivo spirende angiogenese ved hjelp mus organ kultur slik som embryoid legeme analyse ble aorta-ring analysen og fosterets metatarsal analysen tillater analyse av angiogenese av endotelceller i sammenheng med ytterligere støtte celler. Imidlertid, de viktigste begrensninger av disse analysene er mangelen på blodstrøm og regresjon av fartøy over tid, noe som gir en begrenset vindu for analyse. Derfor, for å forstå regulering av angiogenese mer nøyaktig, er in vivo-modeller som kreves slik som de som er utviklet i mus ved hjelp av subkutant implanterte svamper eller Matrigel plugger, så vel som den hind iskemi i bena modell. Imidlertid er disse modellene utfordrende å analysere på grunn av den komplekse 3D-arkitekturen i neovessels. I kontrast, har sebrafisk embryo viste en utmerket modell for å visualisere angiogenese i heleorganisme fire. Imidlertid er evolusjonært mus mye mer nært beslektet med humant enn zebrafisk, noe som gjør mus en foretrukket modell i mange tilfeller. Følgelig angiogenese av postnatal mus netthinnen representerer et godt karakterisert metoden for valg for angiogenese forskning. Det gir ikke bare en fysiologisk innstilling, men også en 2D vaskulær plexus som lett kan visualiseres ved hjelp av egnede fluorescerende flekker. Arkitekturen av fartøyet nettverk, endotelial spredning, spirende, perivaskulær celle rekruttering og fartøy ombygging kan alle bli undersøkt ved hjelp av denne teknikken. I neonatal mus netthinnen, skjer utviklingen av netthinnens blodkar i den første uken av postnatal liv. Mus, i motsetning til mennesker, er født blind og netthinne bare bli vaskularisert etter fødselen. Retinale blodkar oppstå fra midten av netthinnen nær den optiske nerven ved postnatal dag 0 (P0), og utvikle ved angiogenese for å danne en svært organisered vaskulær plexus som når netthinnens periferi med ca P8 fem. Blodkar utvikle seg på en karakteristisk måte med den kapillære plexus gradvis vokser utover fra den optiske platen mot periferien for å generere en regelmessig vekslende mønster av arterier og vener med en mellomliggende kapillært nettverk. Netthinnens blodkar gir en ideell modell for å studere angiogenese som skipene kan lett identifiseres som de vokser i hva er egentlig et 2D-plan, og dermed gjør det relativt enkelt å undersøke retinal blodkar i flat-mount forberedelser fem. En fremgangsmåte for isolering av den neonatale mus netthinnen for analyse av endoteliske tip celle responser over flere timer ex vivo er blitt rapportert 6.. Alternativt krever en mer detaljert undersøkelse av hele retinal blodkar og tilhørende vaskulære markører farging av faste netthinnen prøver på ulike stadier av utviklingen. Her gir vien detaljert beskrivelse av en pålitelig og teknisk rett frem metode som vi bruker for hele fjellet farging av murine retinal vaskulær plexus, fra den første enucleation av postnatal øyet (se også 7) gjennom fargingsprotokoller til endelig bildebehandling under mikroskopet.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pipettes 3 ml</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>PIP4210</td>
			<td>Remove tip with scissors to create a wide bore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Falcon 24-well plates</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>353226</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Select Petri dishes TV 90 mm</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>SLS2002</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histobond slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-0624</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips 22 x 22 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-1336</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Tweezers #5</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>14095</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors 10.5 cm long, with straight 8 mm blades</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>501235</td>
			<td>Used for enucleation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors 8.5 cm long, with straight 7 mm blades, and 0.025 x 0.015 mm superfine tips</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>500086</td>
			<td>Used for dissecting retina</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfine vannas scissors 8 cm long with straight 3 mm blades, and 0.015 x 0.015 mm superfine tips</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>501778</td>
			<td>Used for dissecting retina</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>crystal clear' tubes 2 ml</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>E1420-2000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0876</td>
			<td>PBS reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td>PBS reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td>PBS reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Make up in 2x PBS and store at -20 &deg;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7638</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9284</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9663</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold anti-fade reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36930</td>
			<td>Mounting reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin GS-IB4-alexa 594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21413</td>
			<td>Use at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin GS-IB4-alexa 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21411</td>
			<td>Use at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Primary Antibodies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NG2 (rabbit polyclonal )</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5320</td>
			<td>Detects pericytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP (clone GA5, mouse monoclonal)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB360</td>
			<td>Detects astrocytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Desmin (clone Y66, rabbit monoclonal)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>04-585</td>
			<td>Detects pericytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Collagen IV (rabbit polyclonal )</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>AB756P</td>
			<td>Detects vascular basement membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-alpha smooth muscle actin-Cy3 (clone 1A4, mouse monoclonal)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6198</td>
			<td>Detects vascular smooth muscle cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Endoglin (clone MJ7/18, rat monoclonal)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>550546</td>
			<td>Detects endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD31 (clone MEC13.3, rat monoclonal)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553370</td>
			<td>Detects endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-VE-Cadherin (clone 11D4.1, rat monoclonal)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>550548</td>
			<td>Detects endothelial cell junctions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Alk1 (goat polyclonal)</td>
			<td>R&amp;D Systems</td>
			<td>AF770</td>
			<td>Detects endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Secondary Antibodies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-Alexa594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11012</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-Alexa488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11006</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-Alexa594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11007</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse-Alexa488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11029</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-goat-Alexa594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11058</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Microscopes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi SV6</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axiocam HRc</td>
			<td>Camera for dissection microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescent Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axioimager with Apotome</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axiocam HRm</td>
			<td>Camera for Axioimager</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>A1R</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole mount immunofluorescent staining of the neonatal mouse retina to investigate angiogenesis in vivo

Angiogenese er den komplekse prosessen med dannelsen av nye blodkar definert av spirende av nye blodkar fra en pre-eksisterende fartøy nettverk. Angiogenese spiller en viktig rolle, ikke bare i normal utvikling av organer og vev, men også i mange sykdommer hvor blodkar formasjonen er feilregulert, så som kreft, blindhet og ischemiske sykdommer. I voksen alder, blodårer er generelt sovende så angiogenese er et viktig mål for romanen narkotika utvikling å prøve og regulere nye fartøy dannelse spesielt i sykdom. For bedre å forstå angiogenese og å utvikle hensiktsmessige strategier for å regulere det, er modeller som kreves som nøyaktig gjenspeiler de ulike biologiske trinn som er involvert. Musen neonatal netthinnen gir en utmerket modell av angiogenese fordi arterier, vener og kapillærer utvikle seg til å danne en vaskulær plexus løpet av den første uken etter fødselen. Denne modellen har også fordelen av å ha en to-dimensional (2D) struktur gjør analyse grei sammenlignet med komplekse 3D anatomi av andre vaskulære nettverk. Ved å analysere retinal vaskulær plexus til forskjellige tider etter fødselen, er det mulig å observere de ulike stadier av angiogenese under mikroskopet. Denne artikkelen viser en enkel prosedyre for å analysere blodkar av en mus netthinnen ved hjelp av fluorescerende farging med isolectin og vaskulær spesifikke antistoffer.

Etter disseksjon netthinnen skal se ut som en flat blomst (figur 1). Ved hjelp av protokollen, som er skissert ovenfor, kan endotelceller ses ved hjelp isolectin B4-Alexa488 farging og støtte karmuskelcelier blir visualisert ved hjelp av anti-alfa glattmuskel-aktin (figur 2). Den lave kraft visning ved hjelp av et objektiv 5X i figur 2 gir en oversikt over den vaskulær organisering av netthinnen. Også, ved hjelp av en annen kombinasjon av antistoffer som er gitt i pr...

Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo at JoVE.com

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Nyfødtperioden murine netthinnen gir et godt karakterisert fysiologiske modell av angiogenese, som tillater undersøkelser av rollene til ulike gener eller medikamenter som modulerer angiogenese i en<em&gt; In vivo</em&gt; Sammenheng. Immunofluorescent flekker å nøyaktig visualisere vaskulær plexus er avgjørende for å lykkes med disse typer studier.

Hele Mount Immunofluorescent Farging av Neonatal Mouse Retina å etterforske Angiogenesis<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hele Mount immunolabeling av olfactory Receptor nevroner i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenne

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Assessment of Vascular Regeneration i CNS Bruke musen Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Hel-mount Imaging av Mouse Embryo Sensory Axon Anslag

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hele Mount Dissection og Immunfluorescens av Adult Mouse Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Patch Clamp Recording of Starburst Amacrine Cells in a Flat-mount Preparation of Deafferentated Mouse Retina

Patch Clamp Opptak av Starburst Amacrine celler i en Flat-mount Utarbeidelse av Deafferentated Mouse Retina

The mammalian retina is a layered tissue composed of multiple neuronal types. To understand how visual signals are processed within its intricate synaptic ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En enkel ett-trinns Dissection Protokoll for Whole-mount Utarbeidelse av Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupillary To-foton In vivo Avbildning av musens netthinne

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...