Name: whole mount immunofluorescent staining of the neonatal mouse retina to investigate angiogenesis in vivo
Uploaded: 2013-07-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo at JoVE.com

Detta arbete har finansierats av Wellcome Trust och den brittiska Heart Foundation.

Alla steg utfördes vid rumstemperatur, om inte annat anges. Ett. Enucleation och Fixering av efter förlossningen Eyes <ol><li> Placera avlivas mus valp på sin sida, ta bort huden som täcker ögat med en sax. </li><li> Använd en sax och pincett för att enucleate ögat. </li><li> Placera sax under enukleerat ögat, skär synnerven och omgivande vävnader och lyft ur ögat. Överför till en 24-brunnars platta innehållande 4% paraformaldehyd (PFA) tillverkad i 2x PBS vid rumstemperatur...

<ol>
	<li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+and+clinical+applications+of+angiogenesis.">Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis.</a> Nature. 473 (7347), 298-307 (2011).</li><li>Staton, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+methods+for+assaying+angiogenesis+in+vitro+and+in+vivo.">Current methods for assaying angiogenesis in vitro and in vivo.</a> Int J. Exp. Pathol. 85 (5), 233-248 (2004).</li><li>Goodwin, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assays+of+angiogenesis+for+assessment+of+angiogenic+and+anti-angiogenic+agents.">In vitro assays of angiogenesis for assessment of angiogenic and anti-angiogenic agents.</a> Microvasc. Res. 74 (2-3), 172-183 (2007).</li><li>Lawson, N. D., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+embryonic+vascular+development+using+transgenic+zebrafish.">In vivo imaging of embryonic vascular development using transgenic zebrafish.</a> Dev. Biol. 248 (2), 307-318 (2002).</li><li>Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+retinal+vasculature.">Development of the retinal vasculature.</a> Angiogenesis. 10 (2), 77-88 (2007).</li><li>Sawamiphak, S., Ritter, M., Acker-Palmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+retinal+explant+cultures+to+study+ex+vivo+tip+endothelial+cell+responses.">Preparation of retinal explant cultures to study ex vivo tip endothelial cell responses.</a> Nat. Protoc. 5 (10), 1659-1665 (1038).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> J. Vis. Exp. (57), e3184 (2011).</li><li>Pitulescu, M. E., Schmidt, I., Benedito, R., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+gene+targeting+in+the+neonatal+vasculature+and+analysis+of+retinal+angiogenesis+in+mice.">Inducible gene targeting in the neonatal vasculature and analysis of retinal angiogenesis in mice.</a> Nat. Protoc. 5 (9), 1518-1534 (2010).</li><li>Allinson, K. R., Lee, H. S., Fruttiger, M., McCarty, J., Arthur, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+expression+of+TGFbeta+type+II+receptor+is+required+to+maintain+vascular+integrity+during+postnatal+development+of+the+central+nervous+system.">Endothelial expression of TGFbeta type II receptor is required to maintain vascular integrity during postnatal development of the central nervous system.</a> PLoS One. 7 (9), e39336 (2012).</li><li>Mahmoud, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+arteriovenous+malformations+in+the+absence+of+endoglin.">Pathogenesis of arteriovenous malformations in the absence of endoglin.</a> Circ. Res. 106 (8), 1425-1433 (2010).</li><li>Lebrin, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thalidomide+stimulates+vessel+maturation+and+reduces+epistaxis+in+individuals+with+hereditary+hemorrhagic+telangiectasia.">Thalidomide stimulates vessel maturation and reduces epistaxis in individuals with hereditary hemorrhagic telangiectasia.</a> Nat. Med. 16 (4), 420-428 (2010).</li><li>Pi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+connective+tissue+growth+factor+in+the+retinal+vasculature+during+development+and+ischemia.">Role of connective tissue growth factor in the retinal vasculature during development and ischemia.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52 (12), 8701-8710 (2011).</li><li>Powner, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+gene+expression+in+whole+mouse+retina+by+in+situ+hybridization.">Visualization of gene expression in whole mouse retina by in situ hybridization.</a> Nat. Protoc. 7 (6), 1086-1096 (2012).</li></ol>

Den metod som presenteras här ger ett enkelt och effektivt sätt att få bilder av färgade hela berget beredningar av neonatala möss näthinnor, vilket gör det till en lätt mätbar och fysiologiskt relevant modell av angiogenes. Inledningsvis kan musen ögat vara ganska svårt att dissekera grund av sin ringa storlek och klot form, så lite träning och goda Dissektionsverktyg behövs för tillförlitliga resultat. Dissektion av ögon framställda i 2x koncentration av PBS är viktigt eftersom detta orsakar en lite...

Angiogenes är en komplex utvecklingsprocess definieras av bildningen av nya blodkärl från en redan existerande kärl nätverk och regleras av flera signalvägar. Den mest framträdande av dessa är VEGF vägen. VEGF släpps av ischemiska celler och leder till inledandet av angiogena gro i angränsande blodkärl. Den ledande endotelcell från en ny vaskulär sprout är en &quot;spets&quot;-cell, som producerar filopodia att nå ut i riktning mot källan av VEGF, och följs av prolifererande &quot;stjälk&quot; endotelceller. På detta sätt aktiverade endotelceller migrera och proliferera mot ett avaskulärt område där de bildar nya vaskulära rör. För att stabilisera dessa rör för att stödja blodflöde, endotelceller interagera med pericyter och glatta muskelceller, som omger de nya blodkärl 1. Angiogenes är nödvändig för vaskularisering av embryot och växande vävnader. Däremot bidrar det också till många pathological sjukdomar som cancer, medan defekter i angiogenes är associerade med ischemiska sjukdomar. Utvecklingen av effektiva läkemedelsbehandlingar att reglera angiogenes som ett sätt att behandla sjukdomar är därför av stort intresse. Till exempel kommer effektiva anti-angiogena faktorer minska cancertillväxt, medan proangiogena strategier kan användas för att behandla ischemisk sjukdom. Således modeller av angiogenes är viktigt att förstå regleringen av kärlnybildning och för att utveckla nya terapeutiska strategier för att öka eller minska vaskulär tillväxt. En grundläggande del av angiogenes forskning är valet av en lämplig vaskulär modell. Många in vitro-modeller har utformats för att återge de grundläggande stegen för angiogenes såsom endothelial cell migration, proliferation och överlevnad 2,3. En ofta använd in vitro-analys är bildandet av en grenad nätverk av endotelceller på en Matrigel matris, även om thans är inte specifik för endotelceller, och inte heller det ingår stöd av pericyter eller glatta muskelceller. Bedömning av ex vivo groning angiogenes använda kulturen mus organ såsom embryoid kropp-analysen, den aortaringen analysen och fostrets mellanfot analysen möjliggör analysen av angiogenes av endotelceller i samband med ytterligare stödjande celler. Men de viktigaste begränsningarna av dessa analyser är bristen på blodflödet och regression av fartyg över tiden, vilket ger ett begränsat fönster för analys. Därför, för att förstå regleringen av angiogenes mer exakt, är in vivo-modeller krävs, t.ex. de som utvecklats i musen med subkutant implanterade svampar eller matrigel pluggar, liksom bakbenet ischemi modell. Emellertid är dessa modeller utmanande att analysera på grund av den komplexa 3D arkitekturen i neovessels. Däremot har den zebrafisk embryot visat en utmärkt modell för att visualisera angiogenes i helaorganismen 4. Däremot är musen evolutionärt mycket närmare släkt med människor än zebrafisk, gör musen en önskad modell i många fall. Följaktligen angiogenes av postnatal mus näthinnan utgör en väl karakteriserad metoden för angiogenes forskning. Det ger inte bara en fysiologisk miljö, men också en 2D vaskulär plexus som lätt kan visualiseras med hjälp av lämpliga fluorescerande fläckar. Arkitekturen av fartyget nätverk, endotelial proliferation, groning, perivaskulär cellrekrytering och kärl remodeling kan alla undersökas använder denna teknik. I neonatal mus näthinnan sker utvecklingen av retinala blodkärl i den första veckan av postnatal liv. Möss, till skillnad från människor, föds blinda och näthinnor bara bli vaskulariserad efter födseln. Retinala kärl uppstår från mitten av näthinnan nära synnerven vid postnatal dag 0 (P0), och de växer av angiogenes att bilda en mycket organiserad vaskulära plexus som når näthinnans periferi med cirka P8 5. Blodkärlen utvecklas på ett karakteristiskt sätt med kapillär plexus successivt växer utåt från optiken skivan mot periferin för att generera ett regelbundet alternerande mönster av artärer och vener med en mellanliggande kapillämätverk. Näthinnans blodkärl ger en idealisk modell för att studera angiogenes eftersom fartygen kan lätt identifieras som de växer i vad som egentligen är ett 2D-plan, vilket gör det relativt lätt att undersöka näthinnans blodkärl i platt-mount preparat 5. Förfarande för isolering av musen neonatal näthinnan för analys av endoteliala responser tip cell under flera timmar ex vivo har rapporterats 6. Alternativt krävs en mer ingående undersökning av hela retinal kärlsystemet och tillhörande vaskulära markörer immunfärgning av fasta näthinnan prover vid olika stadier av utveckling. Här ger vien detaljerad beskrivning av en tillförlitlig och tekniskt rättfram metod som vi använder för hela montera färgning av murina retinal vaskulär plexus, från den initiala enucleation av postnatal ögat (se även 7) genom färgning protokollen till final avbildning under lupp.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pipettes 3 ml</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>PIP4210</td>
			<td>Remove tip with scissors to create a wide bore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Falcon 24-well plates</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>353226</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Select Petri dishes TV 90 mm</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>SLS2002</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histobond slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-0624</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips 22 x 22 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-1336</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Tweezers #5</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>14095</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors 10.5 cm long, with straight 8 mm blades</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>501235</td>
			<td>Used for enucleation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors 8.5 cm long, with straight 7 mm blades, and 0.025 x 0.015 mm superfine tips</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>500086</td>
			<td>Used for dissecting retina</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfine vannas scissors 8 cm long with straight 3 mm blades, and 0.015 x 0.015 mm superfine tips</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>501778</td>
			<td>Used for dissecting retina</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>crystal clear' tubes 2 ml</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>E1420-2000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0876</td>
			<td>PBS reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td>PBS reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9625</td>
			<td>PBS reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Make up in 2x PBS and store at -20 &deg;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7638</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9284</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9663</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold anti-fade reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36930</td>
			<td>Mounting reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin GS-IB4-alexa 594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21413</td>
			<td>Use at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin GS-IB4-alexa 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21411</td>
			<td>Use at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Primary Antibodies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NG2 (rabbit polyclonal )</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB5320</td>
			<td>Detects pericytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP (clone GA5, mouse monoclonal)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB360</td>
			<td>Detects astrocytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Desmin (clone Y66, rabbit monoclonal)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>04-585</td>
			<td>Detects pericytes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Collagen IV (rabbit polyclonal )</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>AB756P</td>
			<td>Detects vascular basement membrane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-alpha smooth muscle actin-Cy3 (clone 1A4, mouse monoclonal)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6198</td>
			<td>Detects vascular smooth muscle cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Endoglin (clone MJ7/18, rat monoclonal)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>550546</td>
			<td>Detects endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD31 (clone MEC13.3, rat monoclonal)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553370</td>
			<td>Detects endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-VE-Cadherin (clone 11D4.1, rat monoclonal)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>550548</td>
			<td>Detects endothelial cell junctions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Alk1 (goat polyclonal)</td>
			<td>R&amp;D Systems</td>
			<td>AF770</td>
			<td>Detects endothelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Secondary Antibodies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit-Alexa594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11012</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-Alexa488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11006</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rat-Alexa594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11007</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse-Alexa488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11029</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-goat-Alexa594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11058</td>
			<td>All secondary antibodies are aliquoted immediately on arrival and stored at -20 &deg;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Microscopes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi SV6</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axiocam HRc</td>
			<td>Camera for dissection microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescent Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axioimager with Apotome</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axiocam HRm</td>
			<td>Camera for Axioimager</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>A1R</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole mount immunofluorescent staining of the neonatal mouse retina to investigate angiogenesis in vivo

Angiogenes är den komplexa processen av nya blodkärl som definieras av groning av nya blodkärl från en redan existerande kärl nätverk. Angiogenes spelar en viktig roll inte bara i normal utveckling av organ och vävnader, men också i många sjukdomar där blodkärl är oreglerad, såsom cancer, blindhet och ischemiska sjukdomar. I vuxenlivet, blodkärl är i allmänhet stilla så angiogenes är ett viktigt mål för nya läkemedel utveckling att försöka reglera kärlnybildning specifikt i sjukdomen. För att bättre förstå angiogenes och att utveckla lämpliga strategier för att reglera det, är modeller krävs att spegla de olika biologiska steg som är involverade. Musen neonatal näthinnan är en utmärkt modell av angiogenes eftersom artärer, vener och kapillärer utvecklas för att bilda en vaskulär plexus under den första veckan efter födseln. Denna modell har också fördelen av att ha en två-didimensionell (2D) struktur gör analysen enkel jämfört med den komplexa 3D anatomi andra vaskulära nätverk. Genom att analysera den retinal vaskulär plexus vid olika tidpunkter efter födseln, är det möjligt att följa de olika stadierna av angiogenes under mikroskop. Denna artikel visar ett enkelt förfarande för att analysera kärlsystemet av en mus näthinnan med fluorescerande färgning med isolectin och vaskulär specifika antikroppar.

Efter dissektion näthinnan ska se ut som en platt blomma (Figur 1). Genom användning av protokollet, som beskrivs ovan, kan endotelceller ses med isolectin B4-Alexa488 färgning och stödja vaskulära muskelceller visualiseras med anti-alpha glattmuskelaktin (Figur 2). Den låga effektförbrukningen vyn med en 5X mål i figur 2 tillåter en överblick över den vaskulära organisationen av näthinnan. Också genom att använda en annan kombination av antikroppar som a...

Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo at JoVE.com

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Den neonatala mus näthinnan ger en väl karakteriserad fysiologisk modell av angiogenes, vilket möjliggör undersökningar av rollerna av olika gener eller läkemedel som modulerar angiogenes i en<em&gt; In vivo</em&gt; Sammanhang. Immunfluorescensfärgning att exakt visualisera vaskulära plexus är avgörande för framgången för dessa typer av studier.

Hela Mount immunfluorescensfärgning av neonatal mus Retina att undersöka Angiogenesis<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualisering av embryonala nervsystemet i hela-fäste Drosophila Embryon

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Dissekering av en mus Eye för en hel berget av pigmentepitelet

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo elektroporering av utvecklingsländer Mouse Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hela Mount immunomärkning av luktreceptor nervceller i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenn

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Bedömning av Vascular Regeneration i CNS Använda musen Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Hela-mount avbildning av Mouse Embryo Sensorisk Axon Projektioner

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hela Mount Dissekering och Immunofluorescence i vuxen mus Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Patch Clamp Recording of Starburst Amacrine Cells in a Flat-mount Preparation of Deafferentated Mouse Retina

Patch Clamp Registrering av Starburst amakrina celler i en platt-mount Framställning av Deafferentated mus Retina

The mammalian retina is a layered tissue composed of multiple neuronal types. To understand how visual signals are processed within its intricate synaptic ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

En enkel steg Dissection protokoll för hel-mount Framställning av Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupillär tvåfotoner in vivo-avbildning av musens näthinna

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...