Name: parabiosis in mice: a detailed protocol
Uploaded: 2013-10-06T21:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke Adriane Mosley og Libuse Jerabek (Stanford) for at få hjælp med den kirurgiske teknik.

Alle animalske undersøgelser blev udført i henhold til retningslinjerne i UCLA Dyrepleje og brug udvalg og National Institutes of Health Guide til pleje og anvendelse af forsøgsdyr. Varigheden af ​​den procedure, der er beskrevet nedenfor, er ca 45-60 min fra start til slut. 1.. Fremstilling af kirurgiske område <ol><li> Proceduren skal udføres i et rent Dyrekirurgien værelse. </li><li> Udstyr: isofluran fordamper, Gaymer T Pumpe med varmepude. </li><li> Sterile værktøjer: to b...

<ol>
	<li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exp&#233;riences+et+consid&#233;rations+sur+la+greffe+animale.">Exp&#233;riences et consid&#233;rations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .</li><li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+of+parabiosis.">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li><li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation.">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li><li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parabiosis+in+physiological+studies.">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li><li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells:+what+is+their+exact+location.">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102 (2007).</li><li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury.">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li><li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice.">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li><li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming.">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li><li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice.">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li><li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life.">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li><li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+the+H-Y+antigen:+Requirement+for+male+T+cells,+but+not+B+cells,+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice.">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li></ol>

Den parabiosis metode diskuteres her præsenterer minimal tekniske vanskeligheder og resultater i lav dødelighed. Udlæg i knæene og albuerne er en væsentlig forbedring af Bunster og Meyer teknik. Men den procedure forbliver invasive dermed vedligeholdelse af sterile forhold i hele operationen er bydende nødvendigt. For yderligere at forebygge infektion af det kirurgiske websted, er det vigtigt, at parabiosed dyrene får en kombination af antibiotika og kontrolleres regelmæssigt. For at sikre en fast støtte og for...

Parabiosis, kirurgisk sammenføjning af to organismer, blev første gang beskrevet i 1864 af Paul Bert som en måde at udvikle en model til at studere delte kredsløbssystemet og bestod af sammenføjning af huden og muskulære vægge af to rotter 1. Parabiosis fremmer dannelsen af mikrokar ved inflammationsstedet 3 og har haft adskillige anvendelser i fysiologiske studier, såsom hormonale kommunikation mellem hypofysen og kønskirtler samt rolle i nyren hypertension 4. Det er desuden blevet anvendt til at undersøge rekruttering og integration af stamceller i neovaskularisering 5, migration af hæmatopoietiske stamceller 6 og lymfocyttrafik 7 samt rolle og kinetik af cirkulerende inflammatoriske eller stamceller i tumormetastase 8,9, og neurodegenerativ sygdom 10. En væsentlig fordel ved parabiosis liggeri, at de indgået partnerskab dyr deler fælles cirkulerende antigener, så celle migration og neovaskularisering uden at udløse en immunologisk reaktion. Vigtigere er det, Weissman et al. Har vist, at parabiosis mellem mandlige og kvindelige mus ikke fører til dannelse af anti HY antistoffer 11. I den oprindelige protokol, der er beskrevet af Paul Bert de to dyr blev sammenføjet gennem tilslutning af hud og muskel vægge 1. Denne metode imidlertid forårsaget betydelig belastning af dyrene og resulterede i høj dødelighed på grund af infektion af såret. Siden da parabiosis teknikken er blevet revideret af flere grupper med de mest fremherskende er den af Bunster og Meyer foreslog i 1933 2 protokol. Deres metode omfattede sammenføjning af skulderbladshovederne leddene, legemshuler og hud, hvilket tillader bedre støtte og mindre smerte for dyrene. Samtidig den nye metode resulterede i minimal post-operativ pleje og betydeligtligt nedsat dødelighed. Den heri beskrevne protokol er en modifikation af Bunster og Meyer teknik, der er mindre invasiv og tillader fastere sammenføjning. Nemlig mus forbundet gennem albuen og knæled samt huden. Denne sammenføjning forhindrer udvidelse af hud og derfor forårsager mindre smerte og komplikationer. Her beskriver vi sammenføjning af en vildtype (WT) voksen mus til en konstitutiv GFP udtrykker mus. Vi viser, at to uger efter operationen kan vi opnå demonstrere effektiviteten af ​​denne kirurgiske procedure for at skabe en delt kredsløbssygdomme 50% af blod kimærisme.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Phoenix</td>
			<td>Clipper</td>
			<td>NDC 57319-559-06</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Posi-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0530-SM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Anesthesia System</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymer T Pump</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc</td>
			<td>TP650</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming Blanket (Heating pad)</td>
			<td>Kent Scientific Corp</td>
			<td>TP-22G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>FST 14063-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>FST 12501-13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical shaver</td>
			<td>Oster</td>
			<td>Golden A5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parabiosis in mice: a detailed protocol

Parabiosis er en kirurgisk forening af to organismer muliggør deling af blodcirkulationen. Montering af huden af ​​to dyr fremmer dannelsen af ​​mikrokar ved inflammationsstedet. Parabiotic partnere deler deres cirkulerende antigener og dermed er fri for skadelig immunreaktion. Først beskrevet af Paul Bert i 1864 1 blev parabiosis kirurgi raffineret af Bunster og Meyer i 1933 for at forbedre dyrs overlevelse 2. I den nuværende protokol, der er to mus kirurgisk sluttede efter en ændring af Bunster og Meyer teknik. Dyrene er tilsluttet via albue og knæled efterfulgt af fastgørelse af huden giver fast støtte, der forhindrer pres på sutureres hud. Heri beskriver vi i detaljer parabiotic sammenføjning af en allestedsnærværende GFP udtrykke musen til en vildtype (WT) mus. To uger efter den procedure, der er parret separeret, og GFP-positive celler kan påvises ved flowcytometrisk analyse i blodet circulation WT mus. Blodet kimærisme tillader en at undersøge bidraget fra de cirkulerende celler fra et dyr i den anden.

Det forventede resultat af parabiosis af to organismer er lige bidrag for hvert dyr kredsløbssygdomme til en fælles blodcirkulation (figur 2). Man kan nemt bekræfte vellykket ligevægt af blod parabiosed WT og GFP positive mus ved flowcytometrisk analyse. Her blev venøst ​​blod fra halerne af begge parabionts ved 2 uger efter kirurgi og blev fraktioneret til perifere blodceller (for at udelukke erytrocytter). Den fraktionerede cellefraktion hæmatopoietisk afledte blev efterfølgende analyseret ...

Watch this Scientific Journal Video about Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol at JoVE.com

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiosis i mus: en detaljeret protokol

Parabiotic sammenføjning af to organismer fører til udvikling af en fælles kredsløbssygdomme. I denne protokol, beskriver vi de kirurgiske trin at danne en parabiotic forbindelse mellem en vildtype-mus og en konstitutiv GFP-udtrykkende mus.

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Protokol for Long Duration Whole Body Hypertermi i mus

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Collection Protocol for Human Pancreas

Indsamling Protokol for human pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsåren infusioner farmakokinetisk og farmakodynamisk analyse af Taxaner i mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

En simpel kritisk størrelse Femoral Defekt Model i mus

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Heterotop Renal autotransplantation i en Porcine Model: En trin-for-trin-protokollen

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

En trin for trin Protokol for subretinal kirurgi i kaniner

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Oprettelse af Abdominal adhæsioner i mus

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

En detaljeret protokol for Sved Overvågning Ved hjælp af en roman, Small, trådløs enhed

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

A Detailed Protocol for Physiological Parameters Acquisition and Analysis in Neurosurgical Critical Patients

En detaljeret protokol for fysiologiske parametre erhvervelse og analyse i neurokirurgiske kritiske patienter

Intracranial pressure (ICP) monitoring is now widely used in neurosurgical critical patients. Besides mean ICP value, the ICP derived parameters such as ...