Name: parabiosis in mice: a detailed protocol
Uploaded: 2013-10-06T21:30:00
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Les auteurs tiennent à remercier Adriane Mosley et Libuse Jerabek (Stanford) pour l&#39;assistance à la technique chirurgicale.

Toutes les études sur les animaux ont été réalisés selon les directives de protection des animaux et l&#39;utilisation du comité de l&#39;UCLA et les National Institutes of Health Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire. La durée de la procédure décrite ci-dessous est d&#39;environ 45 à 60 min, du début à la fin. Une. Préparation du champ opératoire <ol><li> Exécuter la procédure dans une salle de chirurgie des animaux propres. </li><li> Équipeme...

<ol>
	<li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exp&#233;riences+et+consid&#233;rations+sur+la+greffe+animale.">Exp&#233;riences et consid&#233;rations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .</li><li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+of+parabiosis.">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li><li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation.">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li><li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parabiosis+in+physiological+studies.">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li><li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells:+what+is+their+exact+location.">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102 (2007).</li><li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury.">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li><li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice.">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li><li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming.">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li><li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice.">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li><li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life.">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li><li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+the+H-Y+antigen:+Requirement+for+male+T+cells,+but+not+B+cells,+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice.">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li></ol>

La méthode de parabiose discuté ici présente des difficultés et des résultats techniques minimales des taux de mortalité faibles. La fixation des articulations du genou et du coude constitue une amélioration importante de la technique et Bunster Meyer. Toutefois, la procédure invasive reste donc le maintien de conditions stériles pendant toute la chirurgie est impérative. Pour prévenir l&#39;infection du site chirurgical, il est important que les animaux reçoivent parabiosed une combinaison d&#39;antibiotiqu...

Parabiose, rejoindre le chirurgicale de deux organismes, a été décrite pour la première en 1864 par Paul Bert comme un moyen de développer un modèle pour étudier les systèmes circulatoires partagées et composée de l&#39;assemblage de la peau et des parois musculaires de deux rats 1. Parabiose favorise la formation de microvaisseaux au niveau du site de l&#39;inflammation et 3 a eu de nombreuses applications dans des études physiologiques, telles que la communication entre hormonal de la glande pituitaire et les gonades, ainsi que le rôle de l&#39;hypertension rénale chez 4. Il a été en outre utilisé pour étudier le recrutement et l&#39;intégration des cellules progénitrices dans la néovascularisation 5, la migration des cellules souches hématopoïétiques 6, et le trafic des lymphocytes 7, ainsi que le rôle et la cinétique de cellules circulantes inflammatoires ou souches dans la métastase de la tumeur 8,9, et les maladies neurodégénératives 10. Un avantage important du mensonge de parabioseen ce que les animaux en couple part antigènes circulants communs, ce qui permet la migration cellulaire et la néovascularisation, sans déclencher une réaction immunologique. Fait important, Weissman et al. Ont montré que parabiose entre les souris mâles et femelles ne conduit pas à la formation d&#39;anticorps dirigés contre HY 11. Dans le protocole original décrit par Paul Bert les deux animaux ont été réunis par le raccordement de la peau et des parois musculaires 1. Toutefois, cette méthode a provoqué souche importante pour les animaux et a abouti à une forte mortalité due à une infection de la plaie. Depuis lors, la technique de parabiose a été révisé par plusieurs groupes avec le plus prédominant étant le protocole proposé par Bunster et Meyer en 1933 2. Leur méthode a inclus l&#39;assemblage des joints de l&#39;omoplate, des cavités du corps et de la peau, ce qui permet un meilleur soutien et moins de douleur pour les animaux. Dans le même temps, la nouvelle méthode a donné lieu à des soins et signifi post-opératoire minimalsignificative diminution des taux de mortalité. Le protocole décrit ici est une modification de la technique Bunster Meyer et qui est moins invasive et permet de rejoindre plus ferme. À savoir, les souris sont reliés par des articulations du coude et du genou ainsi que la peau. Cette jonction empêche l&#39;extension de la peau et donc provoque moins de douleur et les complications. Nous décrivons ici la jonction d&#39;un type sauvage (WT) de souris adulte à une GFP constitutive exprimant la souris. Nous montrons que deux semaines après la chirurgie, nous pouvons réaliser 50% de chimérisme de sang démontrant l&#39;efficacité de cette procédure chirurgicale pour créer un système de circulation commun.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Phoenix</td>
			<td>Clipper</td>
			<td>NDC 57319-559-06</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Posi-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0530-SM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Anesthesia System</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymer T Pump</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc</td>
			<td>TP650</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming Blanket (Heating pad)</td>
			<td>Kent Scientific Corp</td>
			<td>TP-22G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>FST 14063-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>FST 12501-13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical shaver</td>
			<td>Oster</td>
			<td>Golden A5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parabiosis in mice: a detailed protocol

Parabiose est une union chirurgicale de deux organismes permettant le partage de la circulation sanguine. Fixation de la peau de deux animaux favorise la formation de microvaisseaux au niveau du site de l&#39;inflammation. Partenaires Parabiotic partagent leurs antigènes circulants et sont donc libres de la réaction immunitaire indésirable. D&#39;abord décrit par Paul Bert en 1864 1, la chirurgie parabiose a été affinée par Bunster et Meyer en 1933 pour améliorer la survie des animaux 2. Dans le protocole courant, deux souris sont joints par voie chirurgicale suite à une modification de la technique et Bunster Meyer. Les animaux sont reliés par des articulations du coude et du genou, suivie par la fixation de la peau permettant un soutien ferme qui empêche de pression sur la peau suturée. Ici, nous décrivons en détail la parabiotic assemblage d&#39;un GFP omniprésent exprimant la souris à un type sauvage (WT) de la souris. Deux semaines après l&#39;intervention, la paire est séparée et les cellules positives à la GFP peut être détectée par analyse par cytométrie de flux circulant dans le sangion de la souris WT. Le chimérisme de sang permet d&#39;examiner la contribution des cellules circulantes d&#39;un animal à l&#39;autre.

Le résultat attendu de parabiose de deux organismes est la contribution égale de système circulatoire de chaque animal à une circulation sanguine commune (Figure 2). On peut facilement vérifier le succès de l&#39;équilibration du sang de l&#39;parabiosed des souris WT et positif GFP par analyse par cytométrie de flux. Ici, le sang veineux a été obtenue à partir des queues des deux parabionts à 2 semaines après l&#39;intervention chirurgicale et a été fractionné pour les cellules du sang ...

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Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiose chez la souris: un protocole détaillé

Parabiotic jonction de deux organismes entraîne le développement d&#39;un système de circulation commun. Dans ce protocole, nous décrivons les étapes chirurgicales pour former une connexion entre parabiotic une souris de type sauvage et une souris exprimant la GFP constitutive.

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

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