Name: parabiosis in mice: a detailed protocol
Uploaded: 2013-10-06T21:30:00
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Gli autori desiderano ringraziare Adriane Mosley e Libuse Jerabek (Stanford) per l&#39;assistenza con la tecnica chirurgica.

Tutti gli studi sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida di cura degli animali e l&#39;uso del comitato di UCLA e il National Institutes of Health Guide per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio. La durata della procedura descritta di seguito è di circa 45-60 minuti dall&#39;inizio alla fine. 1. Preparazione del campo operatorio <ol><li> Eseguire la procedura in una sala operatoria degli animali pulita. </li><li> Equipaggiamento: isoflurano vaporizzatore, Gaymer Po...

<ol>
	<li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exp&#233;riences+et+consid&#233;rations+sur+la+greffe+animale.">Exp&#233;riences et consid&#233;rations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .</li><li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+of+parabiosis.">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li><li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation.">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li><li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parabiosis+in+physiological+studies.">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li><li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells:+what+is+their+exact+location.">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102 (2007).</li><li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury.">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li><li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice.">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li><li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming.">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li><li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice.">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li><li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life.">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li><li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+the+H-Y+antigen:+Requirement+for+male+T+cells,+but+not+B+cells,+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice.">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li></ol>

Il metodo parabiosis discusso qui presenta difficoltà tecniche minime e si traduce in tassi di mortalità bassi. Il fissaggio delle articolazioni del ginocchio e del gomito è un miglioramento significativo della Bunster e tecnica Meyer. Tuttavia, la procedura rimane così invasiva mantenimento di condizioni di sterilità durante l&#39;intervento chirurgico è imperativo. Per prevenire ulteriori infezioni del sito chirurgico, è importante che gli animali parabiosed ricevono una combinazione di antibiotici e monitorare...

Parabiosis, la chirurgica unione di due organismi, è stato descritto nel 1864 da Paul Bert come un modo per sviluppare un modello per studiare sistemi circolatorio condivisi e consisteva l&#39;unione della pelle e pareti muscolari dei due topi 1. Parabiosis promuove la formazione del microcircolo nel sito di infiammazione 3 e ha avuto diverse applicazioni in studi fisiologici, come la comunicazione ormonale tra l&#39;ipofisi e gonadi nonché il ruolo del rene nell&#39;ipertensione 4. È stato inoltre impiegato per investigare l&#39;assunzione e integrazione di cellule progenitrici in neovascolarizzazione 5, migrazione di cellule staminali ematopoietiche 6, e linfociti tratta 7, così come il ruolo e cinetica di cellule infiammatorie circolanti o staminali nel tumore metastasi 8,9, e le malattie neurodegenerative 10. Un vantaggio significativo di bugie parabiosisdal fatto che gli animali collaborato condividono antigeni circolanti comuni, consentendo la migrazione cellulare e la neovascolarizzazione senza innescare una reazione immunologica. Importante, Weissman et al. Hanno dimostrato che parabiosis tra topi maschio e femmina non porta alla formazione di anticorpi contro HY 11. Nel protocollo originale descritto da Paul Bert due animali sono stati uniti insieme mediante collegamento della pelle e pareti muscolari 1. Questo metodo però, causato sforzo significativo per gli animali e provocato elevata mortalità a causa di infezione della ferita. Da allora la tecnica parabiosis è stato rivisto da diversi gruppi con il più predominante è il protocollo proposto da Bunster e Meyer nel 1933 2. Il loro metodo incluso giunzione delle articolazioni scapola, cavità del corpo, e la pelle, consentendo un migliore supporto e meno dolore per gli animali. Allo stesso tempo, il nuovo metodo ha comportato minima cura post-operatoria e significativamente ridotto la mortalità. Il protocollo qui descritto è una modifica della tecnica Bunster e Meyer che è meno invasiva e permette più salda adesione. Vale a dire, i topi sono collegati attraverso le articolazioni del gomito e ginocchio, come pure la pelle. Questo impedisce l&#39;allungamento adesione della pelle e quindi provoca meno dolore e complicazioni. Qui si descrive l&#39;unione di una wild type (WT) topo adulto per un GFP costitutiva esprime mouse. Abbiamo dimostrato che due settimane dopo l&#39;intervento si possono raggiungere il 50% di chimerismo sangue dimostrare l&#39;efficacia di questa procedura chirurgica per creare un sistema circolatorio condiviso.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Phoenix</td>
			<td>Clipper</td>
			<td>NDC 57319-559-06</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Posi-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0530-SM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Anesthesia System</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymer T Pump</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc</td>
			<td>TP650</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming Blanket (Heating pad)</td>
			<td>Kent Scientific Corp</td>
			<td>TP-22G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>FST 14063-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>FST 12501-13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical shaver</td>
			<td>Oster</td>
			<td>Golden A5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parabiosis in mice: a detailed protocol

Parabiosis è l&#39;unione chirurgica di due organismi che permettono la condivisione della circolazione sanguigna. Allegando la pelle di due animali promuove la formazione di microcircolo nel sito di infiammazione. Partner Parabiotic condividere i loro antigeni circolanti e quindi sono privi di reazione immunitaria avversa. In primo luogo descritto da Paul Bert nel 1864 1, l&#39;intervento parabiosis è stata affinata per Bunster e Meyer nel 1933 per migliorare la sopravvivenza degli animali 2. Nel protocollo corrente, due topi sono chirurgicamente uniti dopo una modifica della Bunster e tecnica Meyer. Gli animali sono collegati attraverso il gomito e del ginocchio seguita da attacco della pelle permettendo il supporto costante che impedisce sforzo sulla pelle suturata. Qui, descriviamo in dettaglio la parabiotic unione di un GFP onnipresente che esprime il mouse per una wild type (WT) del mouse. Due settimane dopo la procedura, la coppia viene separata e cellule positive GFP può essere rilevata mediante analisi citofluorimetrica nel cir sangueione del mouse WT. Il chimerismo sangue permette di esaminare il contributo delle cellule circolanti da un animale nell&#39;altro.

Il risultato atteso di parabiosis di due organismi è il pari contributo di sistema circolatorio di ogni animale ad una circolazione sanguigna comune (Figura 2). Si può facilmente verificare l&#39;equilibratura con successo il sangue del parabiosed WT e topi GFP positive con l&#39;analisi di citometria di flusso. Qui, il sangue venoso è stato ottenuto dalle code di entrambi parabionts a 2 settimane dopo l&#39;intervento chirurgico e stato frazionato per le cellule del sangue periferico (per escludere ...

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Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiosis in topi: un protocollo dettagliato

Parabiotic unione di due organismi porta allo sviluppo di un sistema circolatorio condiviso. In questo protocollo, si descrivono i passaggi chirurgici per formare una connessione parabiotic tra un topo wild-type e una costitutiva GFP che esprimono mouse.

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

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