Name: parabiosis in mice: a detailed protocol
Uploaded: 2013-10-06T21:30:00
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Os autores gostariam de agradecer a Adriane Mosley e Libuse Jerabek (Stanford) para obter assistência com a técnica cirúrgica.

Todos os estudos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes de cuidados com os animais e uso comitê da UCLA e os Institutos Nacionais de Saúde Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. A duração do procedimento descrito abaixo é cerca de 45-60 minutos do começo ao fim. 1. Preparação de campo cirúrgico <ol><li> Realize o procedimento em uma sala de cirurgia animal limpo. </li><li> Equipamento: isoflurano vaporizador, Gaymer T Bomba com almofada de aquecimen...

<ol>
	<li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exp&#233;riences+et+consid&#233;rations+sur+la+greffe+animale.">Exp&#233;riences et consid&#233;rations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .</li><li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+of+parabiosis.">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li><li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation.">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li><li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parabiosis+in+physiological+studies.">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li><li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells:+what+is+their+exact+location.">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102 (2007).</li><li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury.">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li><li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice.">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li><li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming.">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li><li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice.">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li><li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life.">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li><li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+the+H-Y+antigen:+Requirement+for+male+T+cells,+but+not+B+cells,+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice.">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li></ol>

O método parabiose discutido aqui apresenta dificuldades e resultados técnicos mínimos em baixas taxas de mortalidade. A fixação do joelho e cotovelo é uma melhoria significativa da Bunster e técnica Meyer. No entanto, o procedimento invasivo permanece, assim, a manutenção de condições estéreis durante toda a cirurgia é imperativo. Para prevenir novas infecções do sítio cirúrgico, é importante que os animais parabiosed receber uma combinação de antibióticos e ser monitorizados regularmente. Para ass...

Parabiose, juntando-se a cirurgia de dois organismos, foi descrita pela primeira vez em 1864 por Paul Bert, como forma de desenvolver um modelo para o estudo de sistemas circulatórios compartilhados e consistiu na junção da pele e paredes musculares de dois ratos 1. Parabiose promove a formação de microvasos no local de inflamação 3 e tem tido várias aplicações em estudos fisiológicos, tais como a comunicação hormonal entre a glândula pituitária e gónadas, bem como o papel da hipertensão renal em 4. Foi ainda utilizado para investigar o recrutamento ea integração de células progenitoras na neovascularização 5, migração de células-tronco hematopoéticas 6 e tráfico de linfócitos 7, bem como o papel ea cinética de circular células inflamatórias ou resultam em metástase do tumor 8,9, e doenças neurodegenerativas 10. Uma vantagem significativa de mentiras Parabioseem que os animais parceria compartilham antígenos circulantes comuns, permitindo a migração de células e neovascularização, sem desencadear uma reação imunológica. Importante, Weissman et al. Demonstraram que parabiose entre ratinhos macho e fêmea não conduz à formação de anticorpos anti HY 11. No protocolo original descrito por Paul Bert os dois animais foram unidos por meio de ligação da pele e do músculo paredes 1. Este método, contudo, provocou pressão significativa para os animais e resultou na elevada taxa de mortalidade devido à infecção da ferida. Desde então, a técnica parabiose foi revisto por vários grupos, sendo os mais predominante o protocolo proposto por Bunster e Meyer em 1933 2. Seu método incluído união das articulações escápula, cavidades do corpo e da pele, permitindo um melhor apoio e menos dor para os animais. Ao mesmo tempo, o novo método resultou em cuidados pós-operatórios mínimos e signifisignificativamente diminuído as taxas de mortalidade. O protocolo aqui descrito é uma modificação da técnica de Bunster e Meyer, que é menos invasivo e permite juntar mais firme. Nomeadamente, os ratinhos são ligados através do cotovelo e do joelho, assim como a pele. Esta união impede a extensão da pele e, por conseguinte, provoca menos dor e as complicações. Aqui nós descrevemos a união de um tipo selvagem (WT) rato adulto com uma GFP constitutivo expressar mouse. Nós mostramos que duas semanas após a cirurgia que podemos alcançar 50% de quimerismo sangue que demonstra a eficácia deste procedimento cirúrgico para criar um sistema circulatório compartilhado.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Phoenix</td>
			<td>Clipper</td>
			<td>NDC 57319-559-06</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Posi-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0530-SM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Anesthesia System</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymer T Pump</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc</td>
			<td>TP650</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming Blanket (Heating pad)</td>
			<td>Kent Scientific Corp</td>
			<td>TP-22G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>FST 14063-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>FST 12501-13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical shaver</td>
			<td>Oster</td>
			<td>Golden A5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parabiosis in mice: a detailed protocol

Parabiose é uma união cirúrgica de dois organismos, permitindo a partilha da circulação sanguínea. Colocar a pele de dois animais promove a formação de microvasos no local da inflamação. Parceiros parabiótico compartilhar seus antígenos circulantes e, portanto, estão livres de reação imune adversa. Descrita pela primeira vez por Paul Bert, em 1864 1, a cirurgia parabiose foi refinado por Bunster e Meyer em 1933 para melhorar a sobrevivência de animais 2. No protocolo de corrente, dois ratinhos são unidas cirurgicamente na sequência de uma alteração da técnica de Bunster e Meyer. Os animais são conectadas através das articulações do cotovelo e joelho seguido por uma ligação da pele permitindo um apoio firme que impede pressão sobre a pele suturada. Relata-se em detalhe a parabiótico união de um GFP onipresente expressar mouse para um tipo selvagem (WT) mouse. Duas semanas após o procedimento, o par é separada e as células positivas para GFP pode ser detectada por meio de análise de citometria de fluxo no sangue circulanteíon do camundongo WT. O quimerismo sanguíneo permite examinar a contribuição das células circulantes de um animal no outro.

O resultado esperado de parabiose de dois organismos é a contribuição igual de sistema circulatório do animal para cada uma circulação de sangue comum (Figura 2). Pode-se facilmente verificar o equilíbrio bem sucedido do sangue dos ratinhos WT positivo e GFP parabiosed por análise de citometria de fluxo. Aqui, o sangue venoso foi obtida a partir das caudas de ambos parabionts às 2 semanas após a cirurgia e foi fraccionado por células sanguíneas periféricas (para excluir eritrócitos). A fra...

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Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiose em Ratos: Um protocolo detalhado

Parabiótico junção dos dois organismos conduz ao desenvolvimento de um sistema circulatório compartilhado. Neste protocolo, descrevemos os passos cirúrgicos para formar uma conexão parabiótico entre um rato do tipo selvagem e um rato expressando GFP constitutiva.

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

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