Name: parabiosis in mice: a detailed protocol
Uploaded: 2013-10-06T21:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol at JoVE.com

Författarna vill tacka Adriane Mosley och Libuse Jerabek (Stanford) för att få hjälp med den kirurgiska tekniken.

Samtliga djurstudier utfördes enligt riktlinjerna i UCLA djuromsorg och använda kommitté och National Institutes of Health Guide för skötsel och användning av försöksdjur. Varaktigheten av det förfarande som beskrivs nedan är ca 45-60 min från början till slut. 1. Beredning av kirurgiska området <ol><li> Utför proceduren i ett rent djur kirurgi rummet. </li><li> Utrustning: isofluran Vaporizer, Gaymer T Pump med värmedyna. </li><li> Sterila verktyg: två böjda pincett, fina...

<ol>
	<li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exp&#233;riences+et+consid&#233;rations+sur+la+greffe+animale.">Exp&#233;riences et consid&#233;rations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .</li><li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+of+parabiosis.">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li><li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation.">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li><li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parabiosis+in+physiological+studies.">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li><li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells:+what+is+their+exact+location.">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102 (2007).</li><li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury.">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li><li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice.">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li><li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming.">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li><li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice.">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li><li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life.">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li><li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+the+H-Y+antigen:+Requirement+for+male+T+cells,+but+not+B+cells,+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice.">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li></ol>

Den parabiosis metoden diskuteras här innebär minimala tekniska svårigheter och leder till låga dödstal. Infästningen av knä-och armbågsleder är en signifikant förbättring av Bunster och Meyer teknik. Men förfarandet förblir invasiva därmed upprätthålla sterila förhållanden i hela operationen är absolut nödvändigt. För att ytterligare förhindra infektion i operationsområdet är det viktigt att de parabiosed djur får en kombination av antibiotika och kontrolleras regelbundet. För att garantera e...

Parabiosis, kirurgisk sammanfogning av två organismer, beskrevs första gången 1864 av Paul Bert som ett sätt att utveckla en modell för att studera gemensamma cirkulationssystem och bestod av sammanfogningen av huden och muskulösa väggar av två råttor 1. Parabiosis främjar bildandet av mikrocirkulation vid platsen för inflammation 3 och har haft flera tillämpningar inom fysiologiska studier, till exempel hormonella kommunikationen mellan hypofysen och gonader samt rollen av njuren i hypertoni 4. Det har vidare används för att undersöka rekrytering och integrering av progenitorceller i kärlnybildning 5, migrering av hematopoetiska stamceller 6, och lymfocyter människohandel 7, samt den roll och kinetik av cirkulerande inflammatoriska eller stamceller i tumormetastasisen 8,9, och neurodegenerativa sjukdomar 10. En signifikant fördel med parabiosis liesi att de blev partner djuren har gemensamma cirkulerande antigener, vilket gör att cellmigration och kärlnybildning utan att utlösa en immunologisk reaktion. Viktigt Weissman et al. Har visat att parabiosis mellan manliga och kvinnliga möss inte leder till bildning av anti HY antikroppar 11. I det ursprungliga protokollet som beskrivs av Paul Bert de två djuren samman genom anslutning av huden och muskelväggar 1. Denna metod dock orsakat betydande påfrestning för djuren och visade en hög mortalitet på grund av infektion i såret. Sedan dess parabiosis tekniken har reviderats av flera grupper med den mest dominerande är det protokoll som föreslagits av Bunster och Meyer 1933 2. Deras metod ingår sammanfogning av skulderbladet lederna, kroppshåligheter, och huden, vilket möjliggör bättre stöd och mindre smärta för djuren. Samtidigt, den nya metoden gav minimal postoperativ vård och betyligt minskad dödlighet. Protokollet som beskrivs häri är en modifiering av den Bunster och Meyer teknik som är mindre invasiv och tillåter fastare sammanfogning. Nämligen möss ansluten via armbågen och knäleder liksom huden. Denna sammanfogning förhindrar förlängning av huden och således orsakar mindre smärta och komplikationer. Här beskriver vi sammanfogning av en vild typ (WT) vuxen mus till en konstitutiv GFP-uttryckande mus. Vi visar att två veckor efter operationen kan vi uppnå 50% av blod chimerism visar effekten av detta kirurgiska ingrepp för att skapa ett gemensamt blodomlopp.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Phoenix</td>
			<td>Clipper</td>
			<td>NDC 57319-559-06</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Posi-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0530-SM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Anesthesia System</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymer T Pump</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc</td>
			<td>TP650</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming Blanket (Heating pad)</td>
			<td>Kent Scientific Corp</td>
			<td>TP-22G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>FST 14063-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>FST 12501-13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical shaver</td>
			<td>Oster</td>
			<td>Golden A5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parabiosis in mice: a detailed protocol

Parabiosis är en kirurgisk förening av två organismer som tillåter delning av blodcirkulationen. Fastsättning av huden hos två djur som gynnar bildning av mikrovaskulaturen vid platsen för inflammation. Parabiotic partners dela sina cirkulerande antigen och därmed fria från skadliga immunreaktionen. Först beskrivs av Paul Bert 1864 1, var parabiosis kirurgi förfinas genom Bunster och Meyer 1933 för att förbättra djurens överlevnad 2. I det nuvarande protokollet, är två möss kirurgiskt anslöt efter en modifiering av Bunster och Meyer teknik. Djur är anslutna via armbågs-och knäledsartros, följt av fastsättning av huden vilket gör starkt stöd som förhindrar påfrestning på sys huden. Häri beskriver vi i detalj parabiotic sammanfogning av en allmänt förekommande GFP-uttryckande mus till en vildtyp (WT)-mus. Två veckor efter ingreppet, är paret separeras och GFP-positiva celler kan detekteras genom flödescytometrisk analys i blodet cirkulerarion av WT mus. Blod chimerism gör att man kan undersöka bidraget från de cirkulerande celler från ett djur i den andra.

Det förväntade resultatet av parabiosis av två organismer är ett lika stort bidrag varje djurs cirkulationssystem till en gemensam blodcirkulation (Figur 2). Man kan lätt verifiera lyckad ekvilibrering av blodet hos den parabiosed WT och GFP-positiva möss med flödescytometrisk analys. Här, var venblod erhölls från svansen på båda parabionts vid två veckor efter operationen och fraktionerades för perifera blodceller (för att utesluta erytrocyter). De fraktionerade hematopoetiska härledda ...

Watch this Scientific Journal Video about Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol at JoVE.com

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiosis i möss: ett detaljerat protokoll

Parabiotic sammanfogning av två organismer leder till utveckling av en gemensam cirkulationssystemet. I detta protokoll beskriver vi de kirurgiska stegen att bilda en parabiotic anslutning mellan en vildtyp mus och en konstitutiv GFP-uttryckande mus.

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

Den Trier Social Stress Test protokoll för att framkalla psykisk stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Protokoll för Långtidskurser Whole Body hypertermi hos möss

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Collection Protocol for Human Pancreas

Insamling Protokoll för human pankreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsådern Tinkturer för farmakokinetiska och farmakodynamiska Analys av taxaner i möss

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

En enkel Kritisk stora Femoral Defect Model hos möss

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Heterotopisk Renal auto i en grismodell: En steg-för-steg protokoll

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

En steg för steg protokoll för subretinal kirurgi i kaniner

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Skapande av buken adhesioner hos möss

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Ett detaljerat protokoll för svett övervakning med hjälp av en roman, liten, trådlös enhet

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

A Detailed Protocol for Physiological Parameters Acquisition and Analysis in Neurosurgical Critical Patients

Ett detaljerat protokoll för fysiologiska parametrar förvärv och analys i Neurokirurgiska kritiska patienter

Intracranial pressure (ICP) monitoring is now widely used in neurosurgical critical patients. Besides mean ICP value, the ICP derived parameters such as ...