Name: generation of a novel dendritic-cell vaccine using melanoma and squamous cancer stem cells
Uploaded: 2014-01-06T14:30:00
Duration: 12 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Novel Dendritic-cell Vaccine Using Melanoma and Squamous Cancer Stem Cells at JoVE.com

이 작품은 미시간 대학 종합 암 센터의 윌과 Jeanne Caldwell 부여 연구 기금에 의해 지원되었다 부분적으로 NIH 보조금 CA82529 및 길슨 Longenbaugh 재단에 의해.

1. 알데플루어 염색
<ol><li>세포 샘플 준비: 배양된 종양 세포 또는 갓 수확한 종양 샘플에서 종양 세포의 단일 세포 현탁액을 준비합니다. 세포를 계산하고 ALDEfluOR 분석 버퍼에서 1 x 106 세포/ml의 농도로 세포 현탁액을 조정합니다.</li>
	<li>다음과 같이 컨트롤 튜브로 4 개의 12mm x 75mm 폴리스티렌 테스트 튜브라벨 : #1: 알데플루오르 #2, #3: ALDEFLUOR 플러스 DEAB, 및 #4: 7AAD.</li>
	<li>이러한 제어 튜브의 경우 1ml 셀 서스펜션을 #1 #4 넣고 튜브 #2 2ml를 넣습니다. 튜브 #3 5 μl DEAB (ALDH 억제제)를 추가하고 얼음을 유지합니다. 그런 다음 10 μl 활성 ALDEfluOR 기판을 튜브 #2 넣고 혼합물 1ml를 튜브 #3 즉시 전달합니다.</li>
	<li>동시에, 알데플루오 분석 버퍼에서 1 x 106 세포/ml에서 나머지 세포(샘플 튜브)에 백만 세포당 2μl 활성 ALDEFLUOR 기판을 추가합니다.</li>
	<li>37°C 수조에서 30분 동안 4개의 제어 튜브와 샘플 튜브를 모두 배양합니다.</li>
	<li>인큐베이션에 따라, 제어 관 #4 5 μl 7AAD를 추가하고, 샘플 튜브에 1 μl 7AAD 1 x 106 세포를 추가합니다. 4 °C에서 10 분 동안 배양하십시오.</li>
	<li>원심 분리기는 250 x g에서 5 분 동안 모든 튜브를 제거하고 상류체를 제거합니다.</li>
	<li>알데플루오 분석 버퍼에서 세포를 다시 중단합니다.</li>
	<li>유동 세포측정 기반 정렬을 수행합니다.</li>
	<li>DEAB로 처리된 ALDEFLUOR-스테인드 세포를 사용하여 선별 게이트를 음의 대조군으로 설정하고 생존 가능성을 조절하기 위해 프로피듐 요오드(PI) 7AAD-스테인드 셀을 설정합니다. 이러한 컨트롤에 기초하여, ALDEFLUOR+/ALDH높은,D5 및 SCC7 세포를 구별하기 위해 게이트가 설치되었다. 이러한 게이트는 ALDEFLUOR+/ALDH높은 D5 및 SCC7 세포를 위해 위에서 준비된 모든 샘플 세포를 정렬하는 데 사용됩니다.</li>
</ol>2. 암 줄기 세포 용해 성 수지상 세포 (CSC-TPDC) 백신 의 준비
<ol><li>CO2 및 상립 대퇴골 및 경골 뼈를 사용하여 마우스 (syngeneic B6 및 C3H, 각각)를 안락사시합니다.</li>
	<li>실온에서 1 분 동안 75 % 에탄올에 뼈를 넣습니다. 그런 다음 HBSS를 사용하여 뼈를 씻으시면 됩니다.</li>
	<li>뼈를 잘라 내고 21 G 바늘과 10ml 주사기를 사용하여 세포를 접시에 밀어 넣습니다.</li>
	<li>주사기를 사용하여 세포를 흡인시키고 날려 단일 세포 현탁액을 만듭니다.</li>
	<li>원심분리 후 1,500rpm에서 5분 동안, 상체를 폐기하십시오. 그런 다음 RBC 용해 버퍼 5ml를 추가하여 37°C 수조에서 1분 동안 RBC를 용해합니다.</li>
	<li>셀 수를 카운트하고 10 ng/ml GM-CSF 및 10 ng/ml IL-4를 포함하는 완전한 매체(CM)에서 1백만 개의 세포/ml 농도로 세포 현탁액을 조절한다.</li>
	<li>세포를 배양하고 CM 플러스 IL-4 및 GM-CSF를 3 일 후에 보상합니다.</li>
	<li>5일째에는 미숙한 수지상 세포(DC)를 수확하고 4.2ml 용액 C+ 1ml OptiPrep 밀도 그라데이션 배지를 함유한 DC 절연 배지를 준비한다.</li>
	<li>5ml CM의 세포 펠릿을 중단합니다. 셀 서스펜션을 격리 배지에 천천히 넣습니다. 실온에서 2,000 rpm의 원심분리기.</li>
	<li>CM과 격리 매체 사이에 DC를 수집합니다. 셀 수를 카운트하고 10 ng/ml GM-CSF 및 10 ng/ml IL-4를 포함하는 배양 배지에서 1백만 개의 세포/ml 농도로 세포 현탁액을 조절한다.</li>
	<li>배양 배지에서 ALDH높거나 정렬되지 않은 D5 또는 SCC7 세포를 일시 중단하고 급속동결 해동 노출에 4회 인하여 종양 용액을 준비한 다음 5분 동안 ~100 x g에서 스핀을 하여 용액의 막 부분을 수집한다.</li>
	<li>CSC-TPDC를 준비하려면 자가 알DH고세포의 용액으로 DC를 펄스합니다. H-TPDC를 준비하려면 분류되지 않은 이질성 종양 세포용재로 DC를 펄스합니다. DC와 종양 세포 리스의 비율은 동일합니다.</li>
</ol>3. 예방 접종 및 효능 평가
<ol><li>2,500D5 CSC-TPDC 또는 D5 H-TPDC 종양 세포를 피하(s.c)로 각각 정상 B6 마우스를 예방접종한다. 5,000 SCC7 CSC-TPDC 또는 SCC7 H-TPDC 종양 세포를 각각 접종하여 정상 C3H 동물 s.c.</li>
	<li>예방 접종 후, 이질D5 종양 세포 i.v. CO20 일 후 CO를 사용하여 마우스를 안락사시키는 이질D5 종양 세포로 B6 마우스에 도전하십시오. 폐를 수확하고 폐 전이를 예추합니다.</li>
	<li>SCC7 모델에서, DC 백신의 반대편에 .c 분류되지 않은 SCC7 종양 세포로 C3H 마우스에 도전한다. 종양 크기를 모니터링합니다.</li>
	<li>실험이 끝나면 CO2를사용하여 B6 및 C3H 마우스를 안락사시한다. 첫 번째 백신 후 34 일째에, CO2로마우스를 안락사시키고 동시에 무균 시술로 각 그룹의 비장을 수집합니다.</li>
	<li>고동된 안티 CD3 플러스 hrIL-2 또는 LPS 플러스 안티 CD40 (FGK45) mAb 배분을 포함하는 CM에서 안티 CD28 mAbs와 비장 T 및 / 또는 B 세포를 활성화합니다.</li>
	<li>활성화 후, 슈퍼 나츠퍼를 수집하고 ELISA 분석에 사용합니다.</li>
	<li>ELISA 분석의 경우, 4°C O/N에서 IFNγ, GM-CSF 및 IgG용 항체를 가진 코트 플레이트.</li>
	<li>차단 버퍼를 적용한 후 샘플 및 표준을 추가하고 실온에서 배양합니다.</li>
	<li>플레이트를 세척하고 인큐베이션을 위해 HRP 검출 항체 및 TMB 기판을 추가합니다.</li>
	<li>반응을 중지한 후 30분 이내에 450nm에서 ELISA 플레이트 판독기의 흡광도를 측정합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Shafee, N., Smith, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells+contribute+to+cisplatin+resistance+in+Brca1/p53-mediated+mouse+mammary+tumors.">Cancer stem cells contribute to cisplatin resistance in Brca1/p53-mediated mouse mammary tumors.</a> Cancer Res. 68, 3243-3250 (2008).</li><li>Nandi, S., Ulasov, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+radiation+enhances+survivin-mediated+virotherapy+against+malignant+glioma+stem+cells.">Low-dose radiation enhances survivin-mediated virotherapy against malignant glioma stem cells.</a> Cancer Res. 68, 5778-5784 (2008).</li><li>Dallas, N. A., Xia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemoresistant+colorectal+cancer+cells,+the+cancer+stem+cell+phenotype,+and+increased+sensitivity+to+insulin-like+growth+factor-I+receptor+inhibition.">Chemoresistant colorectal cancer cells, the cancer stem cell phenotype, and increased sensitivity to insulin-like growth factor-I receptor inhibition.</a> Cancer Res. 69, 1951-1957 (2009).</li><li>Yamauchi, K., Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+cancer+metastasis+by+cyclophosphamide+pretreatment+of+host+mice:+an+opposite+effect+of+chemotherapy.">Induction of cancer metastasis by cyclophosphamide pretreatment of host mice: an opposite effect of chemotherapy.</a> Cancer Res. 68, 516-520 (2008).</li><li>Chang, A. E., Redman, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+I+trial+of+tumor+lysate-pulsed+dendritic+cells+in+the+treatment+of+advanced+cancer.">A phase I trial of tumor lysate-pulsed dendritic cells in the treatment of advanced cancer.</a> Clin. Cancer Res. 8, 1021-1032 (2002).</li><li>Ito, F., Li, Q., Shreiner, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-CD137+monoclonal+antibody+administration+augments+the+antitumor+efficacy+of+dendritic+cell-based+vaccines.">Anti-CD137 monoclonal antibody administration augments the antitumor efficacy of dendritic cell-based vaccines.</a> Cancer Res. 64, 8411-8419 (2004).</li><li>Kirk, C. J., Hartigan-O'Connor, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell-dependent+antitumor+immunity+mediated+by+secondary+lymphoid+tissue+chemokine:+augmentation+of+dendritic+cell-based+immunotherapy.">T cell-dependent antitumor immunity mediated by secondary lymphoid tissue chemokine: augmentation of dendritic cell-based immunotherapy.</a> Cancer Res. 61, 2062-2070 (2001).</li><li>Ning, N., Pan, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cell+vaccination+confers+significant+antitumor+immunity.">Cancer stem cell vaccination confers significant antitumor immunity.</a> Cancer Res. 72, 1853-1864 (2012).</li><li>Ginestier, C., Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CXCR1+blockade+selectively+targets+human+breast+cancer+stem+cells+in+vitro+and+in+xenografts.">CXCR1 blockade selectively targets human breast cancer stem cells in vitro and in xenografts.</a> J. Clin. Invest. 120, 485-497 (2010).</li><li>Carpentino, J. E., Hynes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase-expressing+colon+stem+cells+contribute+to+tumorigenesis+in+the+transition+from+colitis+to+cancer.">Aldehyde dehydrogenase-expressing colon stem cells contribute to tumorigenesis in the transition from colitis to cancer.</a> Cancer Res. 69, 8208-8215 (2009).</li><li>Charafe-Jauffret, E., Ginestier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+cell+lines+contain+functional+cancer+stem+cells+with+metastatic+capacity+and+a+distinct+molecular+signature.">Breast cancer cell lines contain functional cancer stem cells with metastatic capacity and a distinct molecular signature.</a> Cancer Res. 69, 1302-1313 (2009).</li></ol>

STEMCELL Technologies는 오픈 액세스 게시 수수료를 지원했습니다.

SCID 마우스와 같은 면역 손상된 호스트는 호스트 내의 적응성 면역의 부족으로 인해 CSC의 면역 학적 평가를 배제합니다. 이 연구에서는, 우리는 면역 무능한 호스트에 있는 CSCs의 면역genicity를 평가했습니다, 이는 환자 설정을 더 밀접하게 모방할 수 있었습니다. 농축 된 CSC는 면역 원소이며 선택되지 않은 종양 세포 용해 성 DC에 비해 백신으로 그들의 lysates가 DC에 로드될 때 보다 효과적인 종양 보호 면역을 유도할 수 있습니다.  기계적으로, 보호는 CSC 반응성 항체 및 T 세포8의 선택적 유도뿐만 아니라 IFNγ 및 GM-CSF와 같은 타입-1 사이토카인의 생산에 의해 부여되었다.
수지상 세포 기반 백신 및 입양 T 세포 전달을 포함한 현재 면역 요법의 대부분은 종양-분화 항원들을 표적으로 하기 위해 고안되었습니다. 이러한 분화된 항원들을 발현하지 않을 수 있는 CSCs는 그러므로 이러한 면역학적 표적을 피할 수 있다. 대조적으로, 암줄기세포를 구체적으로 표적으로 하기 위하여 설계된 CSC 백신은 암세포의 이 특별한 인구를 파괴하고, 따라서 종양 재발 및 전이를 방지해서 백신의 치료 효험을 향상시킬 수 있다.
배양된 종양 세포와 갓 수확한 종양 모두에서, 우리는 높은 알데히드 탈수소 효소 활성에 기초한 혈류 세포측정에 의하여 CSC 농축 인구를 확인했습니다. 이러한 ALDH고세포는 CSC-TPDC를 생성하는 CC-TPDC를 생성하는 항원 소스로 사용되는 흐름 분류에 의해 단화될 수있다. 이 결과는 배양된 종양 세포에서 또는 임상 신청을 위한 갓 수확한 종양에서 고립된 CS를 사용하는 잠재력을 밝혔습니다.
임상적으로 관련성이 있기 위해서는 치료 환경에서 백신을 검사해야 합니다. 이 실험은 지금 우리의 실험실에서 수행되고 있습니다.

암 줄기세포는 종래의 화학요법 및 방사선 요법에 상대적으로 저항력이있다 1,2. 한편, 세포의 이 인구는 전통적인 암 치료1-4후에 암의 재발 그리고 진행을 책임지는 세포일지도 모릅니다. 암 줄기 세포에 분화 한 종양 항원의 발현의 부족으로 인해, 암 줄기 세포는 주로 분화 된 종양 세포에 항원을 대상으로 설계 암에 대한 치료의 현재 면역 학적 개입을 탈출 할 수있다. 따라서, 암줄기세포를 구체적으로 표적으로 하고 파괴하는 새로운 전략의 개발은 현재암 치료의 치료 효능을 증가시키는 약속을 지킬 수 있다. 이를 위해, 우리는 2개의 동물종양 (흑색종 D5 및 편평세포 암 SCC7)에서 암 줄기 세포 (CSC)를 풍부하게 한 인구를 격리하고, CSC-TPDC 백신을 준비하기 위하여 항원 제시 세포 (수지상 세포, DC)를 펄스하는 항원 근원으로 이용했습니다. 그런 다음 합성 면역 능력 호스트, B6 마우스 및 C3H 마우스에서 CSC-TPDC 백신에 의해 유도된 항종양 면역을 각각 평가하였다. CSC-TPDC 유도 항종양 효능은 이전에 우리 그룹5,6에서사용되어 온 분류되지 않은 이질성 종양 세포(H-TPDC)로부터 용액으로 펄스된 기존의 DC 백신과 비교되었으며, 다른조사자들(7)은 전임상 연구와 임상 시험 모두에서 비교하였다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1022">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:405px;">ALDHEFLOUR KIT</td>
			<td style="width:399px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:219px;">1700</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:405px;">Murine IL-4</td>
			<td style="width:399px;">Pepro Tech</td>
			<td style="width:219px;">214-14</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:405px;">Murine GM-CSF</td>
			<td style="width:399px;">Pepro Tech</td>
			<td style="width:219px;">315-03</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:405px;">Mouse IFN-&#611; ELISA KIT</td>
			<td style="width:399px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:219px;">555138</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:405px;">Mouse GM-CSF ELISA KIT</td>
			<td style="width:399px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:219px;">555167</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:405px;">OptiPrep Density Gradient Medium</td>
			<td style="width:399px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:219px;">D1556</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:405px;">BD OptEIA TMB Substrated Reagent Set</td>
			<td style="width:399px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:219px;">555214</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;"></td>
			<td style="width:399px;"></td>
			<td style="width:219px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">Equipment</td>
			<td style="width:399px;"></td>
			<td style="width:219px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">BD FACS Aria Cell Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>336834</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:405px;">Kcjunior</td>
			<td style="width:399px;">Bio-Tek Instruments</td>
			<td style="width:219px;">176058</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of a novel dendritic-cell vaccine using melanoma and squamous cancer stem cells

우리는 암 줄기 세포 (CSC)-농축 된 인구는 Murine 흑색종 D5 합성C5/6 마우스와 편평상피암 SCC7 합성을 알데플루OR/ALDH를 마커로 사용하여 C3H 마우스에 합성, 맥박 세포에 항원 용액의 소스로 세포 용해성을 테스트 (DCs). ALDH높은 CSC lysates와 펄스 된 DC는 모델 과 폐 전이 설정 및 s.c 모두에서 분류되지 않은 전체 종양 세포 리스의 lysates로 펄스 DC보다 훨씬 더 높은 보호 항종양 면역을 유도한다. 종양 성장 설정, 각각. 이 현상은 CSC 백신 유도 된 유머뿐만 아니라 세포 항 CSC 반응 때문이었다. 특히, CSC-DC 백신을 실시하는 호스트로부터 분리된 비장세포는 분류되지 않은 종양 세포 용해 펄스-DC 백신을 실시하는 숙주로부터 분리된 비장세포보다 훨씬 더 많은 양의 IFNγ 및 GM-CSF를 생산하였다. 이러한 결과는 보조 제 환경에서 임상 사용을 위한 자가 CSC 기반 치료 백신을 개발하는 노력을 지원합니다.

ALDEFLUOR/ALDH는 다중 악성 종양에서 줄기 세포를 분리하는 단일 마커로서 사용되어왔다 8-11. 우리는 알데플루어를 마커로 사용하여 2개의 종양 모형 D5 및 SCC7에 있는 암 줄기 세포 농축인구를 확인했습니다. 우리는 뮤린 흑색종 B16-D5및 편평상피 세포암 SCC7에 있는 ALDEfluOR+ 세포를 검출했습니다. 우리는 ALDEFLUOR+ 세포가 배양D5 및 SCC7 종양 세포주에서 각각 약 0.5% 및 5.2%를 기여한다는 것을 것을을 발견했습니다(그림 1). 확립된 종양에서 갓 수확한 종양 세포는 ALDEFLUOR+ 세포의 존재를 확인하기 위해 분석되었다. 도 1에도와 같이, 생체 내에서 ALDEfluOR+ 세포의 2.5% 및 4.2%가 각각 D5 및 SCC7 종양을 확립하였다. 이들 선별된 D5 및 SCC7 ALDEFLUOR+/ALDH높은 집단의 종양성 및 자체 갱신 능력은 각각8개의합성 면역능력 숙주에서 평가되었다.
우리는 동물 연구 와 임상 시험 에서 모두 MC (H-TPDC)를 펄스하기 위해 이질성 무분류 종양 세포 용액을 사용하였다5,6. CSC의 면역원성을 조사하기 위해, 우리는 CSC-TPDC(그림 2)를생성하기 위해 CSC의 용액으로 ALDH높은 CSC 및 펄스 DC를 분리하고 CSC-TPDC가 종양 성장을 방지하는 데 유익한 효과가 있는지 테스트하기 위해 종래의 암 백신 제어로 H-TPDC를 사용했습니다.
우리는 CSC-TPDC에 의해 유도된 보호 항종양 면역을 검토해서 CSC의 면역원성을 평가했습니다. D5 모델에서, 순진한 면역 무능마우스는 CSC-TPDC 또는 H-TPDC (동일 lysate에서: DC 비율)를 가진 s.c 백신 접종을 했습니다. 제어 그룹은 식염수(PBS)를 받았습니다. 마지막 백신 후 1 주일, 마우스는 정맥으로 분류되지 않은 D5 종양 세포(즉,v.)로도전하고 폐는 폐 전이를 예매하기 위해 3 주 후에 수확되었다. 표 1에도시된 바와 같이, PBS 그룹과 비교하여, H-TPDC로 처리된 마우스는 더 적은 폐 전이를 개발하였다. 중요한 것은, CSC-TPDC로 처리된 마우스는 두 실험에서 H-TPDC 백신 단보다는 훨씬 적은 폐 전이가 있었습니다. SCC7 모델에서 정상적인 C3H 동물.c은 SCC7 CSC-TPDC 또는 H-TPDC를 각각 오른쪽 측면에 접종한 후, 분류되지 않은 SCC7 종양 세포s.c 좌측으로 도전하였다. PBS 그룹과 비교하여 H-TPDC는 종양 성장에 대한 겸손한 항종양 면역을 유도했습니다. 그러나, 대조군 및 H-TPDC 군(p<0.05, 도 3)과 비교했을 때 CSC-TPDC로 치료된 마우스에서 종양 성장의 현저한 억제가있었다. 이러한 결과는 CSC가 종양 세포의 도전에 대한 보호 면역을 유도하는 전통적인 분류되지 않은 종양 세포보다 DC를 로드하는 보다 효과적인 항원 소스로 사용될 수 있음을 나타냅니다.
관찰된 CSC 유도 된 보호 항종양 면역의 기본 메커니즘을 더 이해하기 위해 실험이 끝날 때 DC 예방 접종을 받는 동물로부터 비장을 수확했습니다. 비장 세포는 그 때 반대로 CD3/CD28/IL-2 또는 반대로 CD3/CD28/IL-2 + LPS/안티 CD40에 의해 활성화되었다. 이어서 배양 슈퍼나탈이 수집되어 사이토카인 및 항체의 발현을 검출했다.  D5 CSC-TPDC 또는 SCC7 CSC-TPDC(도 4)로 예방 접종된 동물로부터 비장 세포에 의해 IFNγ 및 GM-CSF의생산량이상당히 높았다. 더욱이, D5 CSC-TPDC 또는 SCC7 H-TPDC와 비교하여 D5 CSC-TPDC 또는 SCC7 CSC-TPDC로 예방 접종된 동물로부터 수집된 LPS/안티 CD40 활성화 비장 세포에 의한 IgG 생산량이 현저히(p<0.05) 높았다. 이들 항체는 각각 D5 및 SCC7 CSC에 결합하는 것으로 나타났으며, 이러한 결합은 보완8의존재속에서 CSC 리시스를 초래할 수 있다.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50561/50561fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50561/50561fig1.jpg"> 그림 1. ALDHFLUOR+/ALDH높은 인구는 새로 수확된 신선한 뮤린 D5 흑색종 및 SCC7 편평상피 세포 종양뿐만 아니라 배양에서 검출되었다. 50mmol/L DEAB로 처리된 종양 세포는 특정 ALDH 억제제로서, 음성 대조군으로 사용되었다.
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50561/50561fig1highres.jpg" target="_blank">큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50561/50561fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50561/50561fig2.jpg"> 그림 2. 수지상 세포 기반 암 줄기 세포 백신의 생성. CSC-TPDC 및 H-TPDC의 제조를 위해, 골수 유래 수지상 세포는 각각 ALDH높거나 분류되지 않은 종양 세포 용액으로 펄스되었다.
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50561/50561fig2highres.jpg" target="_blank">큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 
<img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50561/50561fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50561/50561fig3.jpg"> 그림 3. CSC 용해 펄스 DC (CSC-TPDC) 백신은 s.c에서 보다 효과적인 보호 항종양 면역을 유도할 수 있었습니다. SCC7 종양 모델. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50561/50561fig3highres.jpg" target="_blank">큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 

<img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50561/50561fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50561/50561fig4.jpg"> 그림 4. CSC-TPDC로 예방 접종된 면역 능력 호스트에서 보다 강력한 전신 세포 반응.  비장세포는 H-TPDC 또는 CSC-TPDC 예방 접종을 받은 동물로부터 수확되었으며, 표시된 대로 활성화되었다. 배양 슈퍼넌트는 ELISA를 사용하여 사이토카인 검출을 위해 수집되었다.
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50561/50561fig4highres.jpg" target="_blank">큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Generation of a Novel Dendritic-cell Vaccine Using Melanoma and Squamous Cancer Stem Cells

합성 면역 능력 호스트에서 평가, 암 줄기 세포 (CSC) 기반 수지상 세포 (DC) 백신은 이질 적인 대량 종양 세포와 펄스 전통적인 DC 백신 보다 상당히 높은 항 종양 면역을 입증.

흑색종과 편평상피암 줄기세포를 이용한 새로운 수지상 세포 백신의 생성

We identified cancer stem cell (CSC)-enriched populations from murine melanoma D5 syngeneic to C57BL/6 mice and the squamous cancer SCC7 syngeneic to C3H ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantitative Assessment of Immune Cells in the Injured Spinal Cord Tissue by Flow Cytometry:  a Novel Use for a Cell Purification Method

유동세포계측법에 의해 피해를 입은 척수 조직에서 면역 세포의 양적 평가 : 세포 정제 방법에 대한 소설을 사용

Detection of immune cells in the injured central nervous system (CNS) using morphological or histological techniques has not always provided true ...

연구

면역학 및 감염병학

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

알레르기기도 염증 동안 폐 돌기 세포 성숙과 마이 그 레이션 분석

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Mass Spectrometric Analysis of Glycosphingolipid Antigens

Glycosphingolipid 항원의 대량 Spectrometric 분석

Glycosphingolipids (GSL's) belong to the glycoconjugate class of biomacromolecules, which bear structural information for significant biological processes ...

Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay

전체 혈액 Phenotyping 분석을 사용하여 Multicenter 임상 시험을위한 주요 말초 혈 백혈구 인구의 열거

Cryopreservation of peripheral blood leukocytes is widely used to preserve cells for immune response evaluations in clinical trials and offers many ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

사용 모니터링 수지상 세포 이동<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H 자기 공명 영상

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

Generation of Recombinant Arenavirus for Vaccine Development in FDA-Approved Vero Cells

FDA 승인 베로 세포 백신 개발을위한 재조합 Arenavirus의 생성

The development and implementation of arenavirus reverse genetics represents a significant breakthrough in the arenavirus field  4. The use of cell-based ...

Identifying DNA Mutations in Purified Hematopoietic Stem/Progenitor Cells

정제 된 조혈 줄기 / 전구 세포에 DNA 돌연변이를 확인

In recent years, it has become apparent that genomic instability is tightly related to many developmental disorders, cancers, and aging. Given that stem ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

호스트 세포 RN​​A의 합성에 바이러스 감염의 효과를 측정하는 클릭 화학을 사용하여

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

사이토 카인 캡처 시스템을 사용하여 임상 응용 프로그램에 대한 거대 세포 바이러스 고유의 자동화 된 세포 농축은 T 세포

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...