Séparation des protéines avec SDS-PAGE

L'Electrophorèse sur Gel de Polyacrylamide en présence de Dodécylsulfate de Sodium, ou SDS-PAGE, est une techique largement utilisée pour la séparation de mélanges de protéines, basée sur leur taille et rien d'autre. SDS, un détergent anionique, est utilisé pour produire une charge égale à travers la longueur des protéines qui ont été linéarisées. Par, d'abord, leur chargement dans un gel fait de polyacrylamide et, ensuite, en appliquant un champ électrique au gel, les protéines enrobées au SDS sont alors séparées. Le champ électrique joue la force motrice, dirigeant les protéines enrobées au SDS vers l'anode avec les plus grosses protéines se déplaçant plus lentement que les petites protéines. En vue d'identifier les protéines par leur taille, les standards de protéines de tailles connues sont chargés en parallèle avec les échantillons et subissent les mêmes conditions.

Cette vidéo présente une introduction à la technique SDS-PAGE en expliquant tout d'abord la théorie sous-jacente et ensuite en montrant la procédure étape par étape. Une varité de paramètres expérimentaux, tels que la concentration de polyacrylamide et la tension appliquée au gel sont discutés. Les méthodes de coloration en aval comme Coomassie et silver stains sont introduites, et des variations de la méthode, telle que l'électrophorèse sur gel 2D sont présentées.