Name: operation of a benchtop bioreactor
Uploaded: 2013-09-12T15:45:00
Duration: 12 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Operation of a Benchtop Bioreactor at JoVE.com

Bu proje Johns Hopkins Üniversitesi, Ağ Geçidi Bilim Girişimi aracılığıyla Provost Ofisi tarafından kısmen destek oldu.

<ol><li> Damar kurulumu ile çalışmaya başlayın. Geleneksel fermantor (Şekil 1) yüklü olması gerekiyor aşağıdaki bileşenlere sahiptir: <ol><li> pH sondası - canlı kültürde pH ölçümü için. Kurulumdan önce probu kalibre ve gemi ile sterilize. Headplate içinde probu yükleyin. </li><li> pO prob 2 - fermantasyon sırasında kap içindeki çözünmüş oksijen içeriğinin ölçülmesi için. Headplate kurun. </li><li> Kültürünü örnekleme için hasat boru. Headplate bu ayarlanabilir yükseklik bileşeni yükleyin. </li><li> Gaz serpme -, teknenin alt kısmında bulunur ve kültüre gaz infüzyon sağlar. Fermantörden üzerinde gaz kaynağına sparger kadar kanca ve headplate monte. </li><li> Pervane ve pervane mili - pervane kültür karıştırır ve kap içinde kültür muntazamlık için çok önemlidir. </li><li> Egzoz gazı kondansatör - egzoz gazı yolu soğutma ile kap içindeki buharlaştıncı kaybını engelleme için. </li><li> PH kontrolü veya yem ilavesi için Reaktif pompa hatları. </li></ol></li><li> Gemiyi temizleyin ve su ve sabun ile headplate. Yumuşak bir fırça kap ve headplate fırçalama için tavsiye edilir. Klor ağartıcı veya temizleyiciler damar temizlemek için kullanılamaz. </li><li> Ortam ısı kararsız değilse, temizleme kabına ekleyin. Maksimum çalışma hacmi ulaşana kadar sadece ekleyin. Bu durumda, yüksek bir çalışma hacmi, 5 L toplam hacim kabı için 3.3 L. </li><li> O-ring conta düzgün oturmasını sağlayacak, damar headplate monte edin. </li><li> Egzoz gazı Kondansörü takın. </li><li> Onun 10 mm portuna köpük prob takın. </li><li> Onun 10 mm portuna hasat borusunu takın. Bunun üstüne tüp bir parça koyun ve onu kelepçe. </li><li> Serpme girişine tüp ve bir 0.20 mikron filtre takın ve daha sonra bu kapalı kelepçe. </li><li> PH probu kalibre: <ol><li> 2 küçük bardak referans tamponlar, bir yıkama şişesi ve bir yedek wa toplayınsh beher. </li><li> Fermentöre pH probu yukarı kanca ve fermentörünü açın. </li><li> PH parametresine ilerleyin ve menü düğmesini kullanarak, &#39;Cal&#39; seçeneğine gidin ve &#39;Enter tuşuna basın. </li><li> 2 noktalı kalibrasyon için &#39;2 &#39;seçeneğini seçin. </li><li> Prob ucunu yıkayın ve düşük referans tampon daldırın. Fermantörden üzerindeki değeri stabilize olacaktır. + Ve - tuşları, pH referans tampon değeri maç görüntülenen değeri ayarlayın. Yanıp durduğunda, &#39;Enter&#39;a basın. </li><li> Kapalı prob yıkayın ve ikinci referans tampon takın. Değer stabilize ve daha sonra görüntülenen değeri yüksek referans tampon değerini maç yapmak için tuş takımını kullanmak için izin verir. Onaylamak için &#39;Enter&#39;. </li><li> Kapalı prob ucunu yıkayın ve fermantörden ayırın. Bağlantıda koruyucu kap koymak ve headplate takın. </li></ol></li><li> PO2 prob ucu açın ve orada emin olmak için kontrol edinucunu karşılamak için yeterli bir elektrolittir. Değilse, rezervuar bazı eklemek ve o kadar geri kapatın. </li><li> Headplate içinde pO2 sonda takın ve otoklav kapağı elektrik bağlantılarını korumak için üzerine koymak olduğundan emin olun. Bu sterilizasyon sonra kalibre edilecektir. </li><li> , Bir daldırma tüpü ve bir hava filtresi ile reaktif madde besleme için bir şişe elde edilir. Daldırmalı boru bağlantı noktasına pompa hortumunu ekleyin ve fermantör üzerinde giriş portuna diğer ucunu ekleyin. </li><li> Kullanılmayan tüm portları yer hortumu kapatıp tüp kelepçe. </li><li> Egzoz gazı kondansatör üzerinde 0.45 mikron filtre takın. Bu filtre, damar otoklav içinde basınç etmez sağlar. </li><li> Medyanın seviyesinin altında gitmek tüm tüpleri dışarı çıkmasını medya önlemek için kapalı kenetlenmiş olduğunu kontrol edin. </li><li> 121 ° C&#39;de, sıvı döngüsü 30 dakika - 25 için otoklav içinde kap yerleştirin. Dikkat: dışarı geldiğinde çok sıcak olacak. </li><li> Fermentörü baz gemi yükleyin. </li><li> PH Hook upkablo prob. </li><li> PO2 prob kablosunu takın. </li><li> Gaz ilave Rotametre için serpme kanca. </li><li> Sterilely daldırma tüp ile şişesine 1 M NaOH reaktifmi ve taban pompa kafası mili üzerindeki pompa kafasını yükleyin. </li><li> Headplate üzerinde termo sıcaklık sensörü koyun. Bu termovel altına tüm yol gider emin olun. </li><li> Gemilerin pervane bağlantı üzerine ajitasyon kolu indirin. </li><li> Fermantor üzerinde olduğundan emin olun. </li><li> Su fermentöre mevcut olduğunu kontrol edin. </li><li> Fermentöre hava beslemesi açın. </li><li> Sıcaklık parametresi ilerleyin ve 37 ° C sıcaklığı ayarlamak Sıcaklık kontrolünü başlatmak için &#39;Enter&#39; tuşuna basın. Gemi 15 dakika veya daha az ısınır. </li><li> Dakika ya da daha az ortam 1 damar hacme kadar gaz akışını açın. Bu kurmak için, gaz akışı 3 L / dk. Bubbles altta görünmelidir. </li><li> Ajitasyon p ilerleyinarameter ve 300 rpm&#39;ye ayarlayın. Basın ajitasyon açmak için &#39;Enter&#39;. </li><li> Sıcaklığı 37 ° C ulaştığında, pH paremetresine ve 6.8 olarak ayarlayın. &#39;Enter&#39; tuşuna basarak pH kontrolünü açın. </li><li> Çalıştırmak için 1.000 rpm maksimum hıza ajitasyon ayarlayın. </li><li> PO2 prob uygun değerleri görüntülemek için doğru polarize emin olun. 2 saat sonra, pO2 paremetresine ve &#39;Kalibre Function&#39; seçin ve 1 nokta kalibrasyon seçmek için &#39;Menü&#39; düğmesini kullanın. </li><li> 15 dakika sonra, 100 ve basın değerini ayarlamak için imleçleri kullanın &#39;girin.&#39; Bu po 2. kalibre edecektir. </li><li> Ajitasyon ilerleyin ve 300 rpm ayarlanır. </li><li> &#39;Menü&#39; düğmesini kullanarak, içinde ajitasyon menüsünde &#39;açık&#39; için &#39;Cascade&#39; açın. Bu hava kabarcıkları kıymak ve büyüme talep arttıkça çözeltinin içine daha fazla oksijen zorlamak için bir çaba ajitasyon hızını artıracaktır. </li&gt; <li> PO2 parametresine ilerleyin ve 30 değerini ayarlayın. PO2 başlatmak için &#39;Enter&#39; tuşuna basın. </li><li> PC&#39;de kontrol yazılım paketi başlatın. </li><li> Problar kalibre edildikten sonra, karıştırma 300 rpm, kararlıdır, sıcaklık 37 ° C&#39;de ve pH 6.8 &#39;e yakındır, bu inoküle etmek için zamanı. Alkol kullanarak, aşılama için kullanılacak olan port sterilize edin. </li><li> Bir şırınga içine inokulum çizin ve sterilize liman içine ekleyin. Noktasını kapatın. </li><li> Bir günlük kitapta aşılama zamanını işaretlemek. </li><li> Bu sterilizasyon zaman örnek almak da önemlidir. Alkol ile hasat boru borunun ucunu sterilize edin. </li><li> Hasat noktasını kaplayan kelepçesini açın ve bir örnek çizmek için bir şırınga kullanın. Bu boru oturan olmuştur, çünkü bu ilk örneği genellikle atılır. </li><li> Başka bir örnek çekmek için başka bir şırınga kullanın. </li><li> Üçüncü bir şırınga ile, kadar ölü hacim çıkarmak için borudan havayı geriye itinhattına gelen ve hattı kapalı kelepçe. </li><li> Hücre yoğunluğu ve pH belirlemek ve değerleri kaydedin. Mikrobiyal kültürler ile, değerleri her saat oturum yararlıdır. Aralığı kültür bağlıdır. </li><li> Büyüme tamamlandıktan sonra hasat yöntemi kültürü için niyet bağlıdır. Bu durumda, kültür hücre yoğunluğu ve ıslak hücre ağırlığının olası pH veya ölçüm için son nokta değerleri almak için son bir kez örnek. Çamaşır suyu veya diğer antimikrobiyal ajanlar ile belirlenen &quot;öldürmek tank&quot; in içeriğinin elden headplate açın. </li></ol>

<ol>
	<li>Shuler, M., Kargi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bioprocess Engineering Basic Concepts. , (2002).</li><li>Hambor, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioreactor+Design+and+Bioprocess+Controls+for+Industrialized+Cell+Processing.">Bioreactor Design and Bioprocess Controls for Industrialized Cell Processing.</a> BioProcess International. 10 (6), 22-33 (2012).</li><li>Julien, C., Whitford, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioreactor,+Monitoring,+Modeling+and+Simulation.">Bioreactor, Monitoring, Modeling and Simulation.</a> BioProcess International. 5 (01), S10-S17 (2007).</li><li>Fike, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutrient+Supplementation+Strategies+for+Biopharmaceutical+Production.+Part+1:+Identifying+a+Formulation.">Nutrient Supplementation Strategies for Biopharmaceutical Production. Part 1: Identifying a Formulation.</a> BioProcess International. 7 (11), 46-52 (2009).</li><li>Jana, S., Deb, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+efficient+production+of+heterologous+proteins+in+Escherichia+coli.">Strategies for efficient production of heterologous proteins in Escherichia coli.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 67, 289-298 (2005).</li><li>Wang, Z., Ly, M., Zhang, F., Zhong, W., Suen, A., Hickey, A. M., Dordick, J. S., Linhardt, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E.+coli+K5+fermentation+and+the+preparation+of+heparosan,+a+bioengineered+heparin+precursor.">E. coli K5 fermentation and the preparation of heparosan, a bioengineered heparin precursor.</a> Biotechnol. Bioeng. 107, 964-973 (2010).</li><li>Baltz, R. H., Demain, A. L., Davies, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Industrial Microbiology and Biotechnology. , (2010).</li><li>Infors, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Minifors operating Manual and user guide. , .</li></ol>

Yazar A. Magno bu yazıda kullanılan reaktifler ve aletleri üreten ATR Biotech bir çalışanıdır.

Karıştırılan tank reaktörler Biyoteknoloji sektöründe standart ve 40 yıldır 1 süredir kullanılmaktadır. Küçük karıştırılan tank ölçekli-up, küçültülmesi, gerginlik optimizasyonu, karakterizasyonu ve süreç geliştirme için önemli olmuştur. Ayrıca, bireyselleştirilmiş tıp 2 gelişiminde önemli bir role sahip olabilir. Bu, izlenmekte ve çalışma boyunca optimize edilebilir, çünkü küçük ölçekli biyo-reaktörü hücre büyümesi için in situ koşullarında en benzer. Çoğu zaman, ilk deneyler, çalkalama şişeleri içinde gerçekleştirilir, ancak küçük ölçekli biyoreaktörde koşullar sallama şişesi önemli ölçüde farklıdır. Bir deney içinde bulduğumuz E optimal büyüme koşulları coli ve sallama şişesi içinde yeşil floresan protein (GFP) üretimi karıştırma deposu (yayınlanmamış veriler) çevirmek değildi. Büyük ölçekte gelişen hücrelerin diğer yöntemler silindir şişe, tek bir u içerirse Her yöntem 50 5.000 L. çalışma hacmi ile platformu Reaktörler 3 ve daha büyük tek kullanımlık Reaktörler sallanan ölçek kadar zorlukları sağlar, ancak üretimde bir yer bulmuştur. Platform biyoreaktör sallanan tek kullanım karıştırma deposu benzer ve düzenli bir ortam sağlar. Bu hücre çökmesini önlemek ve oksijen sağlamak için dalgaları üretmek nedeniyle sallanan bir hareket oluşur karıştırma karıştırma deposu farklıdır. Bu yöntem için hidrodinamik karıştırma deposu farklıdır ve en fazla hacim farklılıkları, hücre büyümesini ve ürün üretimini etkileyebilir 1000 L ile sınırlıdır bulunmaktadır. Diğer tek kullanımlık sistemleri, altyapı ve ilişkili yükü minimum bir platform sağlamak için tek reaktör ile karıştırılır tankı birleştirmek ve yüksek verimlilik için yeteneği 4 Biyoişleme. Benchtop Biyoreaktörler Yeni kullanıcılar sorun pH, PO 2 ve tem ilk ayar noktalarını belirleyen olabilirken, ancak yayımlanan araştırma, bu bilgi 5, 6, 7, 8, 9 için başvurulabilir. Özellikle bakteri kültürleri ile, bir çalkalama şişesinde ve aynı set sıcaklık olarak aynı hızda çalkalama başlatmak için tavsiye edilir. Önceki shake flasks çalıştırmasının Kültür pH değeri, aynı zamanda bir başlangıç ​​noktası olarak kullanılabilir. PO2 değeri ayarı daha zordur ve genellikle ampirik olarak belirlenir. Ancak,% 50 pO 2 ile başlayan tavsiye edilen başlangıç ​​noktasıdır.

Temel Teknoloji fermantasyon kültür üretmek için basit bir çalkalama şişesi tekniğinin bir uzantısıdır. Bu daha tam ve nicel bir şekilde canlı kültürleri için büyüme ortamları kontrol etmek arzusu büyümüştür. Toplu kültür çalkalama şişeleri genellikle sıcaklığın kesin kontrolü ile sınırlıdır. Bir kuluçkaya çalkalayıcı veya sıcak bir odada sıcaklık tekdüzelik bazen 5 ° C ayrılmanın veya amaçlanan set daha, çok değişkendir. Çalkalama şişesi, normal olarak sabit bir hızda çalkalanmıştır olduğu için, oksijen kullanımı ve gaz değişimi sınırlıdır. Mevcut ortam oksijen bitince, çoğu kültürde gelişmek için başarısız. Çalkalama şişelerinde hiç bir pH kontrolü yoktur. Kültür besleme stoku ile sınırlı değilse, bir çok durumda, bu kültüre zarar noktasına asidik hale gelir ve solunum önemli ölçüde yavaşlatır. En çalkalama balonu kültürleri ayrıca inoculatio ya da kültürlerin başlangıcında yakınında sadece bir kez beslenir anlamına gelen bir &quot;yığın&quot; olarak çalıştırılırn. Bu ilk karbon kaynağı tüketildikten sonra, kültür büyüme durur. Bazı durumlarda metabolizması kayması ve kültür et suyu içinde başka metabolitleri tüketmeye başlar, bazen edilen biyokütle veya proteinin özelliklerini değiştirmek olabilir. Çalkalama şişelerinde aynı zamanda 37 ° C &#39;de sıcak bir kültür ortamı, 24 saat başına hacim, tipik olarak% 10 in ortam buharlaştıncı kaybı genellikle tabidir Bu kayıp kültürünün yoğunluğunu değiştiren ve sistemin uzun süreli çalışmasını engeller. Son olarak, kullanıcının çalkalama sonra ortamdan köpük karşılaşabilir. Yukarıdaki kültür üst kısmında bir köpük oluşumu gaz değişimi ve bundan başka genu büyümesini sınırlar. Temel fermantasyon sistemi bu sınırlamalar tüm çözmek için tasarlanmıştır. Dikkatli sıcaklık kontrolü pervane çalkalama ve bir ısıtma ceketi kullanımı ile fermantasyon damarları elde edilir. Genellikle bu ceket ısıtma ve soğutma kabı ve geri besleme kontrolü içine yerleştirilen sensorset etrafında ± 0.1 ° C sıcaklık kontrolü sonuçları. Benchtop fermante genellikle bir pompa aracılığıyla sıvı reaktif madde ilave edilerek pH kontrolü sağlar. PH değeri sürekli hücre büyümesi için ortam optimum tutmak için bir çaba olarak izlenir. Uygun havalandırma belirtilen karıştırma pervane tarafından veya doğrudan kültür içine hava veya oksijen ilave gaz infüzyonu ile muhafaza edilmektedir. Kesme duyarlı kültürleri ile, oksijen takviye gaz kültüründe oksijen seviyesinin bakım için ana mekanizmadır. Solüsyonu içinde oksijenin ölçümü, genellikle çalkalama şişelerinde kullanım için normal olarak mevcut olmayan bir polarografik sonda ile elde edilir. Bu, sürekli veya periyodik olarak, bir doğrusal ya da lineer olarak bir büyüme sağlamak için kaba yem ilave etmek de mümkündür. Çıkış gazı kondansatör ve böylece kültür hacmi ve yoğunluk koruyarak aktarmak egzoz gazı akışında buhar için soğuk bir yüzey sağlar. Köpük önleyici yüzey aktif periyodik olarak ek çalıştırılırYüzeyde köpük azaltılması ve gaz alışverişini sağlayan kültüründe bir iletkenlik probu ile. Bu kap, her probları ile, bağlantı parçaları, fanlar, hasat borular ve tüpler, monte edilir ve standart bir otoklavda sterilize edilir. Nihai prob kalibrasyon ve çalışma ortamı için istikrar sonra, kültür kabına ilave edilir. Sistem daha sonra bir çalkalama şişesi yöntemi ile daha nicel ve hassas bir şekilde kültür karakterize etmek için kullanılabilir. Sıcaklık, pH, oksijen içeriği, yem tüketimi, sıvı buharlaştırma ve köpük seviyeleri arasında sıkı kontrol tüm çok daha yüksek bir biyokütle ve daha iyi bir protein verimi katkıda bulunur.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="356">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:123px;">Name</td>
			<td style="width:117px;">Company</td>
			<td style="width:117px;">Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:123px;">LB broth</td>
			<td style="width:117px;">Sigma</td>
			<td style="width:117px;">L3022</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:123px;">ampicillin</td>
			<td style="width:117px;">Sigma</td>
			<td style="width:117px;">A1593-25G</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:123px;">LB broth</td>
			<td style="width:117px;">Sigma</td>
			<td style="width:117px;">L3022</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:123px;">antifoam 204</td>
			<td style="width:117px;">Sigma</td>
			<td style="width:117px;">A8311</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:123px;"> </td>
			<td style="width:117px;"> </td>
			<td style="width:117px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:123px;">1 M Sodium Hydroxide</td>
			<td style="width:117px;">Sigma</td>
			<td>38215-1EA-R</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:123px;">Reference Buffer, pH 4.00</td>
			<td style="width:117px;">Sigma</td>
			<td style="width:117px;">B5020</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:123px;">Reference Buffer, pH 7.00</td>
			<td style="width:117px;">Sigma</td>
			<td style="width:117px;">B4770</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:123px;">pO2 probe electrolyte</td>
			<td style="width:117px;">Broadley James</td>
			<td>AS-3140-C30-0025</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:123px;">0.45 micron filter</td>
			<td style="width:117px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:117px;">EW-02915-22</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:123px;">0.22 micron filter</td>
			<td style="width:117px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:117px;">EW-29950-40</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:123px;">Luer Lock syringe, 10 mL</td>
			<td style="width:117px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:117px;">EW-07940-12</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:123px;">Minifors Bioreactor</td>
			<td style="width:117px;">Infors HT</td>
			<td style="width:117px;">B-Pack 5.0</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:123px;">Air Admiral air pump</td>
			<td style="width:117px;">Cole Parmer</td>
			<td style="width:117px;">EW-79202-00</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:123px;">1175 PD Chilling circulator</td>
			<td style="width:117px;">VWR</td>
			<td style="width:117px;">13721-204</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

operation of a benchtop bioreactor

Fermentasyon sistemleri hücre kültürleri çok farklı türleri için uygun bir büyüme ortamı sağlamak için kullanılır. Dikkatli sıcaklık, pH ve özellikle çözünmüş oksijen konsantrasyonunu kontrol etmek için mayalama sağladığı yeteneği etkili büyük ölçekli büyümesi ve fermantasyon ürünlerinin ifadesinin onları gerekli kılar. Bu video kısaca sallama şişesi üzerinde, fermentöre avantajlarını anlatacağız. Aynı zamanda tipik bir tezgah üstü fermantasyon sisteminin önemli bileşenlerini belirlemek ve sondaları, geminin ve kalibrasyon kurulumu hakkında temel eğitimi verecek. Izleyici, sterilizasyon işlemi ile aşina ve kültür ile, kap içindeki büyüme ortamı aşılamak için nasıl gösterilir. Operasyon, örnekleme, ve hasat temel kavramlar da gösterilecektir. Basit veri analizi ve sistem temizleme da ele alınacaktır.

Biyoreaktör IRIS yazılımı ile veya olmadan çalıştırılabilir. Ancak veri yakalamak için, bu yazılımı kullanmak en iyisidir. Bakteri ilave edilmeden önce pH ve oksijen sensörleri, pervane hızı değerine ve sıcaklık seti kalibre edilmelidir. Şekil 2&#39;de, bir biyoreaktör çalıştırmak için veri çıkış sunulmuştur. Sıcaklık 30 ° C, 200 rpm&#39;de çark hızına ayarlanmıştır. Bu parametreler her bir deney için farklı olabilir ama bakteri ilave edilmeden önce, sistem, kalıcı halde olmalıdır. Şekil 3&#39;te, bakteriyel kültür eklenmesi ile oksijen konsantrasyonundaki değişim gösterilmiştir. Bu deney için set noktaları 37 ° C,% 70 200 rpm, O 2 de karıştırıcı vardır. Zamanda 19:20 olarak, besleme pompası bir derhal O 2 seviyesindeki damla neden olan 0.1 &#39;lik bir OD bakteriyel tohum kültürünü sunar. Biyoreaktör hava akımı ve pervane hızı artarak değişen O 2 seviyesine yanıt verir. Tartar diye ayar noktaları kaskad (adım 35) ayarlanır. Reaktör pH pH zaman pH hattı dalgalanma (Şekil 4) ile gösterildiği gibi, daha sonra artan azalan, gerçek zamanlı olarak izlenmiştir. Tüm çalışma analiz edilebilir ve parametreler daha sonraki deneyler için ayarlandı. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50582/50582fig1.jpg" /> Şekil 1. Etiketlenmiş ve bağlı olan tüm parçaları ile Benchtop biyoreaktör. Bu şekil bir çalışma başlangıcında karıştırılan tank reaktörü göstermektedir. Reaktörün parçaları etiketli ve sensörler, çarkı, sıcaklık göstergesi, yem ve örnekleme şişeleri, egzoz portu, hava basıncı göstergesi, ısıtma ceketli, kondansatör kule ve kontrol paneli içerir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/50582/50582fig2.jpg" /> Şekil 2. Biyoreaktör sof ekran görüntüsüçalışma başında tware. karıştırılan tank çalışma başlangıcında, sıcaklık 30 ° C (sarı hat) olarak kabul edildi, 200 rpm (kırmızı çizgi), 6.5 (yeşil hat) pH ve pO 2 de pervane hızı 57.2% (mavi çizgi). <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/50582/50582fig2large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50582/50582fig3.jpg" /> Şekil 3,. Oksijen gibi çalışması sırasında biyoreaktör yazılım ekran görüntüsü kültür aktif büyüme aşamasında olduğunda, oksijen tüketir ve reaktör içindeki oksijen miktarı (mavi çizgi) azaltılır. Azalır. Pervane hızını artırarak, daha fazla oksijen kültürü (kırmızı çizgi) eklenebilir. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/50582/50582fig3large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . Şekil 4. Kültürünün zaman içinde pH değişikliği gösteren biyoreaktör yazılımı. PH ekran görüntüsü sürekli olarak izlenir ve zaman içinde bu laktik asit üretildiği azalır ve daha sonra baz biyoreaktör (mavi çizgi) eklenir artar. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/50582/50582fig4large.jpg" target="_blank">büyük rakam görüntülemek için</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Operation of a Benchtop Bioreactor at JoVE.com

Operation of a Benchtop Bioreactor

Fermantörler biyomühendislik hücrelerinin kültür verim ve verimliliği artırmak için kullanılır. Çalkalama şişelerinde birden fazla mikrobiyal ya da hayvan hücre kültürü aday tarama sonra, bir sonraki mantıksal aşama fermantöre Seçilen kültürün biyokütle artırmaktır. Bu video, tipik bir tezgah üstü biyoreaktör sisteminin kurulumunu ve çalışmasını gösterir.

Bir Benchtop Biyoreaktör Operasyonu

Fermentation systems are used to provide an optimal growth environment for many different types of cell cultures. The ability afforded by fermentors to ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Engineering Biological-Based Vascular Grafts Using a Pulsatile Bioreactor

Pulsatif Biyoreaktör kullanarak Mühendislik Biyolojik Tabanlı Vasküler Greftler

Much effort has been devoted to develop and advance the methodology to regenerate functional small-diameter arterial bypasses. In the physiological ...

Design of a Biaxial Mechanical Loading Bioreactor for Tissue Engineering

Doku Mühendisliği için iki eksenli Mekanik Yükleniyor Biyoreaktör tasarımı

We  designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial  mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for  ...

Microfluidic Picoliter Bioreactor for Microbial Single-cell Analysis: Fabrication, System Setup, and Operation

In this protocol the fabrication, experimental setup and basic operation of the recently introduced microfluidic picoliter bioreactor (PLBR) is described ...

Nonhuman Primate Lung Decellularization and Recellularization Using a Specialized Large-organ Bioreactor

There are an insufficient number of lungs available to meet current and future organ transplantation needs. Bioartificial tissue regeneration is an ...

Construction and Characterization of a Novel Vocal Fold Bioreactor

Bir Roman Vokal Fold Bioreactor İnşaatı ve Karakterizasyonu

In vitro engineering of mechanically active tissues requires the presentation of physiologically relevant mechanical conditions to cultured cells. To ...

Cultivation of Mammalian Cells Using a Single-use Pneumatic Bioreactor System

Tek kullanımlık Pnömatik Biyoreaktör Sistemi kullanılarak memeli hücrelerinde yetiştirme

Recent advances in mammalian, insect, and stem cell cultivation and scale-up have created tremendous opportunities for new therapeutics and personalized ...

A Novel Bioreactor for High Density Cultivation of Diverse Microbial Communities

Çeşitli mikrobiyal Toplulukları Yüksek Yoğunluklu Yetiştirme için Yeni Bir Biyoreaktör

A novel reactor design, coined a high density bioreactor (HDBR), is presented for the cultivation and study of high density microbial communities. Past ...

Assembly and Operation of an Acoustofluidic Device for Enhanced Delivery of Molecular Compounds to Cells

Moleküler Bileşiklerin Hücrelere Daha İyi Teslimi İçin Akostofluidik Bir Cihazın Montajı ve çalışması

Efficient intracellular delivery of biomolecules is required for a broad range of biomedical research and cell-based therapeutic applications. ...

Open-source Toolkit: Benchtop Carbon Fiber Microelectrode Array for Nerve Recording

Açık Kaynaklı Araç Seti: Sinir Kaydı için Tezgah Üstü Karbon Fiber Mikroelektoğr Dizisi

Conventional peripheral nerve probes are primarily fabricated in a cleanroom, requiring the use of multiple expensive and highly specialized tools. This ...

Imaging-Guided Bioreactor for Generating Bioengineered Airway Tissue

Biyomühendislik hava yolu dokusu üretmek için görüntüleme kılavuzlu biyoreaktör

Repeated injury to airway tissue can impair lung function and cause chronic lung disease, such as chronic obstructive pulmonary disease. Advances in ...