Name: transplantation of olfactory ensheathing cells to evaluate functional recovery after peripheral nerve injury
Uploaded: 2014-02-23T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke Adir (Aide à Bosted aux Insuffisants Respiratoires) og Fondation de l&#39;Avenir for deres økonomiske støtte og til Dr. Fanie Barnabé-Heider for redigering av manuskriptet.

En. Primærkulturer av olfactory Mucosa og olfactory pærer <ol><li> Før disseksjon <ol><li> Lag medium, i 50 ml, ved å tilsette 44 ml av kalsium-fri Dulbeccos Modified Eagle &#39;s / Ham&#39; s F12 medium (DMEM/F12), supplert med 5 ml kalvefosterserum (FBS), og 1 ml penicillin / streptomycin. </li><li> Coat 75 cm 2 kolber med poly-L-lysin (50 mikrogram / ​​ml, 1,5 pg / cm 2) 1 time ved romtemperatur. </li><li> Skyll kolber med PBS 1x. </li><li> Oppbevar belagt kolber i kjøleskapet i oppti...

<ol>
	<li>Barraud, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+olfactory+ensheathing+glia.">Neural crest origin of olfactory ensheathing glia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+gene+expression+profiling+of+olfactory+ensheathing+cells+from+olfactory+bulb+and+olfactory+mucosa.">Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb and olfactory mucosa.</a> Glia. 58, 1570-1580 (1002).</li><li>Honore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+characterization,+and+genetic+profiling+of+subpopulations+of+olfactory+ensheathing+cells+from+the+olfactory+bulb.">Isolation, characterization, and genetic profiling of subpopulations of olfactory ensheathing cells from the olfactory bulb.</a> Glia. 60, 404-413 (2012).</li><li>Franssen, E. H., de Bree, F. M., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+glia:+their+contribution+to+primary+olfactory+nervous+system+regeneration+and+their+regenerative+potential+following+transplantation+into+the+injured+spinal+cord.">Olfactory ensheathing glia: their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord.</a> Brain Res. Rev. 56, 236-258 (2007).</li><li>Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+cells+and+Schwann+cells+differ+in+their+in+vitro+interactions+with+astrocytes.">Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes.</a> Glia. 32, 214-225 (2000).</li><li>Woodhall, E., West, A. K., Chuah, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+olfactory+ensheathing+cells+express+nerve+growth+factor,+brain-derived+neurotrophic+factor,+glia+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+their+receptors.">Cultured olfactory ensheathing cells express nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor and their receptors.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 88, 203-213 (2001).</li><li>Dombrowski, M. A., Sasaki, M., Lankford, K. L., Kocsis, J. D., Radtke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+nodal+formation+of+regenerated+peripheral+nerve+fibers+following+transplantation+of+acutely+prepared+olfactory+ensheathing+cells.">Myelination and nodal formation of regenerated peripheral nerve fibers following transplantation of acutely prepared olfactory ensheathing cells.</a> Brain Res. 1125, 1-8 (2006).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+promotes+axonal+regeneration+and+functional+recovery+of+peripheral+nerve+lesion+in+rats.">Transplantation of olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration and functional recovery of peripheral nerve lesion in rats.</a> Muscle Nerve. 43, 543-551 (2011).</li><li>Guntinas-Lichius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+stimulates+the+collateral+sprouting+from+axotomized+adult+rat+facial+motoneurons.">Transplantation of olfactory ensheathing cells stimulates the collateral sprouting from axotomized adult rat facial motoneurons.</a> Exp. Neurol. 172, 70-80 (2001).</li><li>Makoukji, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium+enhances+remyelination+of+peripheral+nerves.">Lithium enhances remyelination of peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109, 3973-3978 (2012).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+mucosa+and+bulb+origin+enhances+functional+recovery+after+peripheral+nerve+lesion.">Co-transplantation of olfactory ensheathing cells from mucosa and bulb origin enhances functional recovery after peripheral nerve lesion.</a> PloS one. 6, 22816 (2011).</li><li>Paviot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiency+of+laryngeal+motor+nerve+repair+is+greater+with+bulbar+than+with+mucosal+olfactory+ensheathing+cells.">Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells.</a> Neurobiol. Dis. 41, 688-694 (2011).</li><li>Girard, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+nasal+olfactory+stem+cells+from+rodents+or+humans.">Isolating nasal olfactory stem cells from rodents or humans.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Nash, H. H., Borke, R. C., Anders, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+of+purification+for+establishing+primary+cultures+of+ensheathing+cells+from+the+adult+olfactory+bulb.">New method of purification for establishing primary cultures of ensheathing cells from the adult olfactory bulb.</a> Glia. 34, 81-87 (2001).</li><li>Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin+3+promotes+purification+and+proliferation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+human+nose.">Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose.</a> Glia. 45, 111-123 (2004).</li><li>Paviot, A., Bon-Mardion, N., Duclos, C., Marie, J. P., Guerout, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Although+olfactory+ensheathing+cells+have+remarkable+potential+to+sustain+nerve+regeneration,+they+cannot+be+applied+to+a+severe+vagus+nerve+section/resection+model.">Although olfactory ensheathing cells have remarkable potential to sustain nerve regeneration, they cannot be applied to a severe vagus nerve section/resection model.</a> Muscle Nerve. 43, 919-920 (2011).</li></ol>

Teknikkene som presenteres her gjør OECs en nyttig modell for å studere cellulære transplantasjoner i perifere nerveskader modeller. Cellekultur-protokollen er relativt enkel og kan lett utføres. På den annen side, kirurgiske inngrep, spesielt punkt / anastomose av RLN, krever erfaring og må utføres av fagfolk. Prosedyrene som er beskrevet i denne protokollen markere viktige faktorer for å fokusere på for å oppnå best mulig resultat. Først under dissosiasjon av OM, anbefaler vi f...

Den primære luktsystemet er sammensatt av to distinkte deler; lukte mucosa (OM) i det perifere nervesystemet og luktelappen (OB) i det sentrale nervesystemet. Den primære luktsystemet er preget av kapasiteten på de primære olfactory nevroner (PON) til selv fornye hele livet i pattedyrarter. Denne evnen er gjort mulig på grunn av tilstedeværelsen av nevrale stamceller i OM. PON vekst og gjenvekst fra OM til OB er tilrettelagt av spesialiserte gliaceller kalt lukte ensheathing celler (OECs). OECs er neural crest cellene som skaper et gunstig mikromiljøet for neurogenesis av PON fra OM til OB ett. Derved kan OECs bli funnet i OM og i OB som utgjør forskjellige subpopulasjoner av celler 2,3. De ulike egenskapene til OECs har ført forskere til å bruke dem for mobilnettet transplantasjoner i flere nervesystemet lesjon paradigmer fire. Faktisk OECs produsere vekstfaktorer, redusere glial scaring, prOmote axonal gjenvekst, og kan fritt blande seg med astrocytter 5,6. Imidlertid er det store flertallet av disse studiene basert på ryggmargsskade (SCI), noen av dem har brukt OECs etter perifer nerveskade (PNI) 7,8. Selv om det perifere nervesystemet har en stor kapasitet til å regenerere etter nerveskade, komplette seksjoner indusere avvik aksonal gjenvekst. Faktisk, etter komplette transections av ansikts-eller tilbakevendende strupehodet nerver (RLN) sendt feil axons forårsake muskel cocontractions kalt synkinesis. Derfor er det av avgjørende betydning å foreslå en modell av PNI å ikke bare tallfeste axonal gjenvekst, men også for å evaluere effektiviteten av muskelsammentrekninger. I litteraturen er det mest vanlige modellen er beskrevet er basert på ansiktsnerven lesjon 9,10. I denne modellen er funksjonelle evalueringer basert på utvinning av whisker bevegelser 10. Men det er vanskelig å demonstrere effektiviteten av movements og å diskriminere de muskuløse cocontractions fenomener. Vi foreslår her en modell basert på en RLN lesjon. Denne modellen gjør det mulig å evaluere ikke bare axonal gjenvekst og bevegelser av stemmebåndene, men også effektiviteten og funksjonaliteten til disse bevegelsene etter cellulære transplantasjoner 11,12. Denne protokollen gir en trinnvis fremgangsmåte til kultur og transplantasjon OECs fra OM og OB i en RLN seksjon / anastomose modell og å evaluere dyr etter operasjonen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="591">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">E3521T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>E3387M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicilin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1152-8876</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3467Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3513P</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cacodylate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.03256.0100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DDSA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00563-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MNA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00886-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BDMA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00141-100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">POLYBED 812</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>08791-500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PE anti-mouse&#160;</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>550589</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel GFR</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>356231</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10103586001</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti P75</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB 365</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">11.0 Wire</td>
			<td>Ethicon&#160;</td>
			<td>FG 2881</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Toluidine Blue&#160;</td>
			<td>RAL DIAGNOSTICS</td>
			<td>361590-0025</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>Sigma 2-16PK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator&#160;</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminar flow hood</td>
			<td>Faster</td>
			<td style="width:197px;">BH-EN 2003 S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow cytometer</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>FACSCalibur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Videolaryngoscope</td>
			<td>Karl Storz Endoskope</td>
			<td>Telecam SL NLSC 20212120</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>Powerlab system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyramitome Ultramicrotomy System&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Leica</td>
			<td>Ultracut S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image analysis system</td>
			<td>Explora Nova</td>
			<td>Mercator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of olfactory ensheathing cells to evaluate functional recovery after peripheral nerve injury

<html> Lukte ensheathing celler (OECs) er neural crest cellene som tillater vekst og gjenvekst av de primære olfactory nerveceller. Faktisk er den primære luktsystemet kjennetegnes ved sin evne til å gi opphav til nye nerveceller, selv i voksne dyr. Denne spesielle evne er delvis på grunn av tilstedeværelsen av OECs som skaper et gunstig mikromiljø for neurogenesis. Denne egenskapen av OECs har vært brukt for cellular transplantasjon for eksempel i ryggmargsskade modeller. Selv om det perifere nervesystemet har en større kapasitet til å regenerere etter nerveskade enn det sentrale nervesystemet, komplette seksjoner indusere misrouting ved aksonal gjenvekst i særdeleshet etter ansikts av strupenervetranseksjon. Nærmere bestemt, full seksjonering av tilbakevendende strupehodet nerve (RLN) induserer avvik axonal gjenvekst som resulterer i synkinesis av stemmebåndene. I denne spesifikke modellen, viste vi at OECs transplantasjon effektivt øker aksonal gjenvekst. ve_content &quot;&gt; OECs utgjøres av flere subpopulasjoner som er tilstede i både den olfaktoriske mucosa (OM-OECs) and olfactory pærer (OB-OECs). Vi presenterer her en modell for celletransplantasjon basert på bruken av disse forskjellige subpopulasjoner av OECs i en RLN skademodell. Ved hjelp av dette paradigmet, ble primærkulturer av OB-OECs og OM-OECs transplantert i Matrigel etter seksjon og anastomose av RLN. To måneder etter operasjonen, vi evaluert transplanterte dyr ved supplerende analyser basert på videolaryngoscopy, elektromyografi (EMG) og histologiske undersøkelser. Først videolaryngoscopy tillot oss å evaluere laryngeale funksjoner, spesielt muskel cocontractions fenomener. Deretter analyser EMG demonstrert fylde og synkronisering av muskel-aktivitet. Endelig histologiske studier basert på toluidin blå farging tillates kvantifisering av antallet og profilen myelinerte fibre. Alle sammen, beskriver vi her hvordan du isolerer, kultur, vederbukntify og transplantasjon OECs fra OM og OB etter RLN seksjon-anastomose og hvordan man skal vurdere og analysere effektiviteten av disse transplanterte cellene på aksonale Etterveksten og strupe funksjoner.

Illustrasjoner med kontroll og reinnervated (seksjon / anastomoseres) dyr har blitt valgt som resultatene kan variere avhengig av mobilnettet transplantasjoner utføres (OM, OB eller OM + OB). Cellekultur Cellene holder seg raskt til plastoverflaten og ble segregert i parallelle ranker av celler som er langstrakt eller tapering, trekantet, multipolar, eller spindel-formet (figur 1A og 1B). Etter 8 dager i vitro flowcytometri analyse vi...

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury at JoVE.com

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

Lukte ensheathing celler (OECs) er neural crest cellene som tillater vekst av de primære olfactory nerveceller. Denne spesielle egenskapen kan brukes til celletransplantasjon. Vi presenterer her en modell for celletransplantasjon basert på bruk av OECs i et laryngeal nerveskade modell.

Transplantasjon av Olfactory Ensheathing Cells å evaluere Funksjonell Recovery etter perifer nerveskade

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An Optic Nerve Crush Injury Murine Model to Study Retinal Ganglion Cell Survival

Injury to the optic nerve can lead to axonal degeneration, followed by a gradual death of retinal ganglion cells (RGCs), which results in irreversible ...

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal rotganglier Nerveceller og Differensiert Adipose-avledet stamceller: An<em&gt; In Vitro</em&gt; Co-kultur modell for å studere Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Funksjonell evaluering av Olfactory stier i levende Xenopus rumpetroll

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

Toluidine Blue Staining of Resin-Embedded Sections for Evaluation of Peripheral Nerve Morphology

Toluidine blå flekker av harpiks-Embedded seksjoner for evaluering av eksterne Nerve morfologi

Peripheral nerves extend throughout the body, innervating target tissues with motor or sensory axons. Due to widespread distribution, peripheral nerves ...

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

En prekliniske modell for å vurdere Brain Recovery etter akutt hjerneslag i rotter

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D kinematisk analyse for funksjonell evaluering i rottemodellen av siattisk nerveknuseskade

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

Rensing av fibroblaster og Schwann-celler fra sensoriske og motornerver in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Automated Gait Analysis to Assess Functional Recovery in Rodents with Peripheral Nerve or Spinal Cord Contusion Injury

Automatisert gangart analyse for å vurdere funksjonell utvinning hos gnagere med perifer nerve eller ryggmargskontusjonsskade

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and ...

Coculture of Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons with Olfactory Ensheathing Glia, as an In Vitro Model of Adult Axonal Regeneration

Coculture av akkotomiserte rotte Retinal Ganglion nevroner med Olfactory Ensheathing Glia, som en In Vitro modell av voksen aksonal regenerering

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Motoriske dobbeltoppgaver for ganganalyse og evaluering hos pasienter etter slag

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...