Name: a versatile automated platform for micro-scale cell stimulation experiments
Uploaded: 2013-08-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Versatile Automated Platform for Micro-scale Cell Stimulation Experiments at JoVE.com

Los autores agradecen a Ronald F. Renzi y Michael S. Bartsch por sus contribuciones al diseño y desarrollo de dispositivos de DMF y el cubo DMF. Esta investigación fue plenamente apoyada por el Programa de Desarrollo de Laboratorio Director de Investigación y en Sandia National Laboratories. Sandia es un laboratorio multi-programa administrado y operado por Sandia Corporation, una subsidiaria de propiedad total de Lockheed Martin Corporation, para el Departamento de Administración de Seguridad Nuclear Nacional de Energía de los EE.UU. bajo contrato DE-AC04-94AL85000.

Este protocolo general está diseñada para soportar la aplicación de la plataforma a una amplia variedad de estudios; aspectos específicos para el estudio representativo se describe en este informe se separan entre paréntesis Figura 2 ilustra un estudio representativo llevado a cabo utilizando el protocolo.. Tenga en cuenta que en el protocolo, todos los comandos de &quot;instruir&quot; se automatizan con el uso de scripts predeterminados. Tenga en cuenta también que el paso 2 puede llevarse a cabo...

<ol>
	<li>Young, E. W. K., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+microfluidic+cell+culture+in+controlled+microenvironments.">Fundamentals of microfluidic cell culture in controlled microenvironments.</a> Chemical Society Reviews. 39, 1036-1048 (2010).</li><li>Yeo, L. Y., Chang, H. C., Chan, P. P. Y., Friend, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+devices+for+bioapplications.">Microfluidic devices for bioapplications.</a> Small. 7, 12-48 (2011).</li><li>Zhang, B., Kim, M. C., Thorsen, T., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+self-contained+microfluidic+cell+culture+system.">A self-contained microfluidic cell culture system.</a> Biomedical Microdevices. 11, 1233-1237 (2009).</li><li>Skafte-Pedersen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+self-contained,+programmable+microfluidic+cell+culture+system+with+real-time+microscopy+access.">A self-contained, programmable microfluidic cell culture system with real-time microscopy access.</a> Biomedical Microdevices. 14, 385-399 (2012).</li><li>Barbulovic-Nad, I., Au, S. H., Wheeler, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+complete+mammalian+cell+culture.">A microfluidic platform for complete mammalian cell culture.</a> Lab Chip. 10, 1536-1542 (2010).</li><li>Zhou, Y., Pang, Y., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Openly+Accessible+Microfluidic+Liquid+Handlers+for+Automated+High-Throughput+Nanoliter+Cell+Culture.">Openly Accessible Microfluidic Liquid Handlers for Automated High-Throughput Nanoliter Cell Culture.</a> Analytical Chemistry. 84, 2576-2584 (2012).</li><li>Wang, H. Y., Bao, N., Lu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+cell+array+with+individually+addressable+culture+chambers.">A microfluidic cell array with individually addressable culture chambers.</a> Biosensors and Bioelectronics. 24, 613-617 (2008).</li><li>Cimetta, E., Cagnin, S., Volpatti, A., Lanfranchi, G., Elvassore, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+culture+of+droplet-confined+cell+arrays.">Dynamic culture of droplet-confined cell arrays.</a> Biotechnology Progress. 26, 220-231 (2010).</li><li>Hung, P. J., Lee, P. J., Sabounchi, P., Lin, R., Lee, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+perfusion+microfluidic+cell+culture+array+for+high-throughput+cell-based+assays.">Continuous perfusion microfluidic cell culture array for high-throughput cell-based assays.</a> Biotechnology and Bioengineering. 89, 1-8 (2005).</li><li>King, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+microfluidic+real-time+gene+expression+living+cell+array.">A high-throughput microfluidic real-time gene expression living cell array.</a> Lab on a Chip. 7, 77-85 (2007).</li><li>G&#243;mez-Sj&#246;berg, R., Leyrat, A. A., Pirone, D. M., Chen, C. S., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile,+fully+automated,+microfluidic+cell+culture+system.">Versatile, fully automated, microfluidic cell culture system.</a> Analytical Chemistry. 79, 8557-8563 (2007).</li><li>Wheeler, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+-+Putting+electrowetting+to+work.">Chemistry - Putting electrowetting to work.</a> Science. 322, 539-540 (2008).</li><li>Gong, J., Kim, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All-electronic+droplet+generation+on-chip+with+real-time+feedback+control+for+EWOD+digital+microfluidics.">All-electronic droplet generation on-chip with real-time feedback control for EWOD digital microfluidics.</a> Lab Chip. 8, 898-906 (2008).</li><li>Choi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+field+effect+transistor-based+biosensors+with+a+digital+microfluidic+device+for+a+lab-on-a-chip+application.">Integration of field effect transistor-based biosensors with a digital microfluidic device for a lab-on-a-chip application.</a> Lab Chip. 12, 1533-1536 (2012).</li><li>Barbulovic-Nad, I., Yang, H., Park, P. S., Wheeler, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+microfluidics+for+cell-based+assays.">Digital microfluidics for cell-based assays.</a> Lab Chip. 8, 519-526 (2008).</li><li>Gentilucci, L., de Marco, R., Cerisoli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modifications+designed+to+improve+peptide+stability:+incorporation+of+non-natural+amino+acids,+pseudo-peptide.">Chemical modifications designed to improve peptide stability: incorporation of non-natural amino acids, pseudo-peptide.</a> 16, 3185-3203 (2010).</li><li>Miller, E. M., Wheeler, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+digital+microfluidic+approach+to+homogeneous+enzyme+assays.">A digital microfluidic approach to homogeneous enzyme assays.</a> Anal. Chem. 80, 1614-1619 (2008).</li><li>Jebrail, M. J., Bartsch, M. S., Patel, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+microfluidics:+a+versatile+tool+for+applications+in+chemistry,+biology.">Digital microfluidics: a versatile tool for applications in chemistry, biology.</a> 12, 2452-2463 (2012).</li><li>Ng, A. H. C., Choi, K., Luoma, R. P., Robinson, J. M., Wheeler, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+Microfluidic+Magnetic+Separation+for+Particle-Based+Immunoassays.">Digital Microfluidic Magnetic Separation for Particle-Based Immunoassays.</a> Analytical Chemistry. 84, 8805-8812 (2012).</li><li>Sista, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+immunoassays+using+magnetic+beads+on+a+digital+microfluidic+platform.">Heterogeneous immunoassays using magnetic beads on a digital microfluidic platform.</a> Lab Chip. 8, 2188-2196 (2008).</li><li>Malic, L., Veres, T., Tabrizian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochip+functionalization+using+electrowetting-on-dielectric+digital+microfluidics+for+surface+plasmon+resonance+imaging+detection+of+DNA+hybridization.">Biochip functionalization using electrowetting-on-dielectric digital microfluidics for surface plasmon resonance imaging detection of DNA hybridization.</a> Biosens. Bioelectron. 24, 2218-2224 (2009).</li><li>Malic, L., Veres, T., Tabrizian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanostructured+digital+microfluidics+for+enhanced+surface+plasmon+resonance+imaging.">Nanostructured digital microfluidics for enhanced surface plasmon resonance imaging.</a> Biosens. Bioelectron. 26, 2053-2059 (2011).</li><li>Jebrail, M. J., Wheeler, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+microfluidic+method+for+protein+extraction+by+precipitation.">Digital microfluidic method for protein extraction by precipitation.</a> Anal. Chem. 81, 330-335 (2009).</li><li>Nelson, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incubated+protein+reduction+and+digestion+on+an+electrowetting-on-dielectric+digital+microfluidic+chip+for+MALDI-MS.">Incubated protein reduction and digestion on an electrowetting-on-dielectric digital microfluidic chip for MALDI-MS.</a> Anal. Chem. 82, 9932-9937 (2010).</li><li>Mousa, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet-scale+estrogen+assays+in+breast+tissue,+blood,+and+serum.">Droplet-scale estrogen assays in breast tissue, blood, and serum.</a> Sci. Transl. Med. 1, 1ra2 (2009).</li><li>Jebrail, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+digital+microfluidic+method+for+dried+blood+spot+analysis.">A digital microfluidic method for dried blood spot analysis.</a> Lab Chip. 11, 3218-3224 (2011).</li><li>Choi, K., Ng, A. H. C., Fobel, R., Wheeler, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+microfluidics.">Digital microfluidics.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 5, 413-440 (2012).</li><li>Jebrail, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+Microfluidics+for+Automated+Proteomic+Processing.">Digital Microfluidics for Automated Proteomic Processing.</a> J. Vis. Exp. (33), e1603 (2009).</li><li>Thaitrong, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Control+of+Next+Generation+Sequencing+Library+through+an+Integrative+Digital+Microfluidic+Platform.">Quality Control of Next Generation Sequencing Library through an Integrative Digital Microfluidic Platform.</a> , (2012).</li><li>Shin, Y. J., Lee, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+vision+for+digital+microfluidics.">Machine vision for digital microfluidics.</a> Review of Scientific Instruments. 81, (2010).</li><li>Thornton, M., Eward, K. L., Helmstetter, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+minimally+disturbed+synchronous+cultures+of+hematopoietic+cells.">Production of minimally disturbed synchronous cultures of hematopoietic cells.</a> BioTechniques. 32, 1098-1105 (2002).</li><li>Huang, X., Dai, W., Darzynkiewicz, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enforced+adhesion+of+hematopoietic+cells+to+culture+dish+induces+endomitosis+and+polyploidy.">Enforced adhesion of hematopoietic cells to culture dish induces endomitosis and polyploidy.</a> Cell Cycle. 4, 801-805 (2005).</li><li>Raje, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Charged+nylon+membrane+substrate+for+convenient+and+versatile+high+resolution+microscopic+analysis+of+Escherichia+coli+&amp;+mammalian+cells+in+suspension+culture.">Charged nylon membrane substrate for convenient and versatile high resolution microscopic analysis of Escherichia coli &amp; mammalian cells in suspension culture.</a> Cytotechnology. 51, 111-117 (2006).</li><li>Chatterjee, D., Hetayothin, B., Wheeler, A. R., King, D. J., Garrell, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Droplet-based+microfluidics+with+nonaqueous+solvents+and+solutions.">Droplet-based microfluidics with nonaqueous solvents and solutions.</a> Lab Chip. 6, 199-206 (2006).</li><li>Perroud, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic-based+cell+sorting+of+Francisella+tularensis+infected+macrophages+using+optical+forces.">Microfluidic-based cell sorting of Francisella tularensis infected macrophages using optical forces.</a> Analytical Chemistry. 80, 6365-6372 (2008).</li><li>Wang, Z., Gerstein, M., Snyder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-Seq:+A+revolutionary+tool+for+transcriptomics.">RNA-Seq: A revolutionary tool for transcriptomics.</a> Nature Reviews Genetics. 10, 57-63 (2009).</li><li>Malone, J. H., Oliver, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarrays,+deep+sequencing+and+the+true+measure+of+the+transcriptome.">Microarrays, deep sequencing and the true measure of the transcriptome.</a> BMC Biology. 9, (2011).</li><li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidically-unified+cell+culture,+sample+preparation,+imaging+and+flow+cytometry+for+measurement+of+cell+signaling+pathways+with+single+cell+resolution.">Microfluidically-unified cell culture, sample preparation, imaging and flow cytometry for measurement of cell signaling pathways with single cell resolution.</a> Lab on a Chip. 12, 2823-2831 (2012).</li><li>Srivastava, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+integrated+microfluidic+platform+enabling+automated+phosphoprofiling+of+macrophage+response.">Fully integrated microfluidic platform enabling automated phosphoprofiling of macrophage response.</a> Analytical Chemistry. 81, 3261-3269 (2009).</li><li>Herr, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+immunoassays+as+rapid+saliva-based+clinical+diagnostics.">Microfluidic immunoassays as rapid saliva-based clinical diagnostics.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 5268-5273 (2007).</li></ol>

Hemos desarrollado una plataforma automatizada simple y versátil para el cultivo celular micro-escala y experimentos de estimulación. La plataforma nos permite trabajar con pequeñas cantidades de cultivos y poblaciones de células (1 - 20 ly 100 - 2000 células por cámara); tamaños cultura podría reducirse aún más mediante el uso de microcapilares de menor diámetro. Trabajar en estas escalas reduce el costo de estudios de rutina y hace que los estudios viables que requieren el uso de reactivos precioso...

El estudio de las células se mantuvieron en cultivo (análisis in vitro) ha proporcionado valiosa información sobre los principios fundamentales y los mecanismos moleculares que regulan los complejos sistemas biológicos y la salud humana. Los métodos convencionales para el cultivo, la estimulación, y colección de las células para el análisis, que utilizan placas de Petri y las placas de microtitulación, se han diseñado para el estudio de grandes poblaciones de células (≥ 10 5) en volúmenes de cultivo escala ≥ mililitro (0,1 ml). Sin embargo, hay muchos casos en los que sólo cantidades limitadas de células están disponibles (por ejemplo, células primarias), o pequeñas poblaciones de células son deseables (por ejemplo, para reducir la variabilidad de célula a célula a través de la población), o reactivos requeridos son difíciles de obtener o prohibitivamente caro (por ejemplo, factores secretados por células purificadas). Estos temas pueden ser abordados con éxito por la escala hasta el tamaño cultura, que tiene el beneficio adicional de reducir el consumo de todos losreactivos necesarios para el análisis en 1,2 vitro. Desafortunadamente, el equipo y los métodos convencionales no soportan la manipulación precisa y reproducible de las culturas micro-escala y los sistemas automatizados de microfluidos basadas actualmente disponibles 3-11 son demasiado complejos y especializados para el uso habitual en la mayoría de los laboratorios. En este reporte se describe el montaje y el uso de una plataforma de tecnología simple y versátil para el cultivo automatizado, el estímulo y la recuperación de las pequeñas poblaciones de células (100 - 2000 células) en los volúmenes de micro-escala (1-20 l). La arquitectura de la plataforma (Figura 1) es de diseño modular: un conjunto de fibronectina recubierto microcapilares (&quot;cámaras de perfusión de células&quot; módulo) sirve como el sitio para el establecimiento, el mantenimiento, y la estimulación de cultivos de micro-escala, y un microfluídica digital (DMF ) 12,13 14,15 dispositivo equipado con células de rutas &quot;transferencia&quot; microcapilares (módulo central &quot;hub&quot;)y reactivos hacia y desde las cámaras de perfusión. DMF permite al usuario resolver individualmente varias gotas al mismo tiempo y cambiar o volver a ordenar las manipulaciones (es decir, volver a configurar los trenes de procesamiento de la muestra) sin alterar el hardware del dispositivo. Su gran flexibilidad es evidente en su reciente aparición como una tecnología clave en una amplia gama de aplicaciones, incluido el cultivo celular 16,17, 18,19 ensayos enzimáticos, inmunoensayos 20,21, 22,23 análisis de ADN, el procesamiento de proteínas, 24,25 y procesamiento de la muestra clínica. 26,27 Nuestro cubo central toma ventaja de la flexibilidad inherente a los dispositivos de DMF, y se mejora aún más mediante la adición de interfaces de microcapilares, lo que proporciona la oportunidad de llevar a cabo un subconjunto de manipulaciones (por ejemplo, cultivo celular) en periférica especializada módulos, en lugar de en el dispositivo de DMF en sí. La compartimentación de los trenes de procesamiento de esta manera también simplifica el diseño de la plaArquitectura TForm (sin necesidad de construir un dispositivo de DMF que pueden llevar a cabo todas las etapas de elaboración) y facilita su evolución como nuevas funciones se requieren (simplemente integrar nuevos módulos periféricos, según sea necesario). Transporte de las células y los reactivos dentro del cubo central es accionado por electrohumectación fuerzas generadas por la activación secuencial de electrodos dentro del dispositivo de DMF 13,28; transporte hacia, desde y dentro de las cámaras de perfusión es impulsado por los cambios de presión generados por una jeringa de alta precisión bomba. Todos estos movimientos fluidos son controlados a través de una interfaz electrónica simple y automatizado a través del uso de secuencias de comandos predeterminados. Como ejemplo representativo, se demuestra el uso de la plataforma para el estudio de las respuestas transcripcionales provocado en las células inmunes al reto con bacterias (Figura 2). La realización de estos experimentos en la plataforma nos permitió trabajar con un pequeño número de células ~ 1000 por la experimentación (condición de tal), minimizar la variabilidad experimento a experimento, reactivos conservar y volver a dirigir las manos-sobre el trabajo. Dadas las ventajas que ésta confiere, así como su accesibilidad y versatilidad, esta plataforma debe encontrar uso en una amplia variedad de laboratorios y aplicaciones y resultar especialmente útil para facilitar el análisis de las células y los estímulos que están disponibles sólo en cantidades limitadas.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Prelude Direct Lysis Module</td>
 <td>NuGEN</td>
 <td>1400-24</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trypan Blue (0.4% w/v)</td>
 <td>GIBCO</td>
 <td>15250-061</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cell Stripper</td>
 <td>Cellgro</td>
 <td>25-056-C1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ovation PicoSL WTA</td>
 <td>NuGEN</td>
 <td>3310-048</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Agencourt RNAClean XP</td>
 <td>Beckman Coulter Genomics</td>
 <td>A63987</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>pHrodo BioParticles</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>P35361</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>CCL4 TaqMan qRT-PCR assay</td>
 <td>Applied Biosystems</td>
 <td>Mm00443111_m1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>CCL5 TaqMan qRT-PCR assay</td>
 <td>Applied Biosystems</td>
 <td>Mm01302428_m1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PTGS2 TaqMan qRT-PCR assay</td>
 <td>Applied Biosystems</td>
 <td>Mm00478374_m1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TNF TaqMan qRT-PCR assay</td>
 <td>Applied Biosystems</td>
 <td>Mm00443258_m1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>GAPDH TaqMan qRT-PCR assay</td>
 <td>Applied Biosystems</td>
 <td>Mm99999915_g1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pluronic F127</td>
 <td>Sigma Chemical</td>
 <td>2594628</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorinert FC-40</td>
 <td>Sigma Chemical</td>
 <td>51142-49-5</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Parylene C dimer</td>
 <td>Specialty Coating Systems</td>
 <td>28804-46-8</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Teflon-AF</td>
 <td>DuPont</td>
 <td>AF1600</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Polyimide tape</td>
 <td>ULINE</td>
 <td>S-11928</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Indium tin oxide (ITO) coated glass substrates </td>
 <td>Delta Technologies </td>
 <td>CB-40IN-1107</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMF hub Teflon-coated fused-silica microcapillaries</td>
 <td>Polymicro Technologies</td>
 <td>TSU100375</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Perfusion chamber microcapillaries</td>
 <td>Polymicro Technologies</td>
 <td>TSP530700</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tubing and microcapillary fittings</td>
 <td>Sandia National Laboratories</td>
 <td>&nbsp;</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Polycarbonate tubing</td>
 <td>Paradigm Optics</td>
 <td>CTPC100-500-5</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>8-port precision syringe pump equipped with 30 mm (500 &mu;l capacity) syringes</td>
 <td>Hamilton Company</td>
 <td>54848-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Parylene-C vapor deposition instrument</td>
 <td>Specialty Coating Systems</td>
 <td>PDS 2010 Labcoter 2</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>High-voltage function generator</td>
 <td>Trek</td>
 <td>615A-1 615-3</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MVX10 microscope</td>
 <td>Olympus</td>
 <td></td>
 <td>Optional (facilitates tracking of droplets on DMF hub)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>QIClick digital CCD camera</td>
 <td>QImaging</td>
 <td>QIClick-F-CLR-12</td>
 <td>Optional (facilitates tracking of droplets on DMF hub)</td>
 </tr>
</tbody>
</table>

a versatile automated platform for micro-scale cell stimulation experiments

Estudio de las células en cultivo (análisis in vitro) ha proporcionado datos importantes en los sistemas biológicos complejos. Métodos y equipos convencionales para el análisis in vitro son muy adecuadas para el estudio de un gran número de células (≥ 10 5) en volúmenes de escala ≥ mililitro (0,1 ml). Sin embargo, hay muchos casos en los que es necesario o deseable que reducir el tamaño cultura para reducir el consumo de las células de interés y / o reactivos necesarios para su cultura, estimulación, o de procesamiento. Desafortunadamente, los enfoques convencionales no soportan una manipulación precisa y reproducible de cultivos de micro-escala, y los sistemas automatizados de microfluidos basados ​​actualmente disponibles son demasiado complejas y especializadas para el uso rutinario por la mayoría de los laboratorios. Para hacer frente a este problema, hemos desarrollado una plataforma de tecnología simple y versátil para el cultivo automatizado, estimulación, y la recuperación de pequeñas poblaciones de células (100 - 2000 células) en el volumen de micro-escalas (1 - 20 l). La plataforma consta de un conjunto de microcapilares recubiertos de fibronectina (&quot;cámaras de perfusión de células&quot;), dentro de la cual se establecieron cultivos de micro-escala, mantienen, y se estimularon; un dispositivo digital de microfluidos (DMF) equipado con &quot;transferencia&quot; microcapilares (&quot;cubo central &quot;), el cual las células rutas y reactivos hacia y desde las cámaras de perfusión; una bomba de jeringa de alta precisión, que alimenta el transporte de materiales entre las cámaras de perfusión y el eje central, y una interfaz electrónica que proporciona control sobre el transporte de materiales, que es coordinado y automatizado a través de scripts predeterminados. Como un ejemplo, se utilizó la plataforma para facilitar el estudio de las respuestas transcripcionales provocados en las células inmunes al reto con bacterias. El uso de la plataforma nos ha permitido reducir el consumo de las células y los reactivos, minimizar la variabilidad experimento a experimento, y re-directos práctica laboral. Dadas las ventajas que ésta confiere, así como su accesibilidad y versatilidad, Oplataforma ur debe encontrar uso en una amplia variedad de laboratorios y aplicaciones, y ser especialmente útil para facilitar el análisis de las células y los estímulos que están disponibles sólo en cantidades limitadas.

Como una demostración de la plataforma automatizada, lo usamos para llevar a cabo un estudio en el que pequeñas poblaciones de células inmunes se cultivaron en cultivos de micro-escala, desafió con bacterias, y zadas para el análisis fuera de la plataforma de las respuestas pro-inflamatorias (Figura 2 ). Cada una de las seis cámaras de perfusión de células se sembró con 10 4 células inmunes (P388D.1 macrófagos murinos) se resuspendieron en 10 l de medio...

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A Versatile Automated Platform for Micro-scale Cell Stimulation Experiments

Hemos desarrollado un cultivo de células automatizado y la plataforma de interrogación para experimentos de estimulación de células micro-escala. La plataforma ofrece un control sencillo, versátil y precisa en el cultivo y estimular las pequeñas poblaciones de células, y la recuperación de lisados ​​de análisis moleculares. La plataforma se adapta bien a los estudios que utilizan las células preciosos y / o reactivos.

Una plataforma automatizada versátil para Micro escala experimentos de estimulación celular

Study of cells in culture (in vitro analysis) has provided important insight into complex biological systems. Conventional methods and equipment for in ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

GENPLAT: an Automated Platform for Biomass Enzyme Discovery and Cocktail Optimization

GENPLAT: una plataforma automatizada para el descubrimiento de enzimas de la biomasa y la optimización Cocktail

The high cost of enzymes for biomass deconstruction is a major impediment to the economic conversion of lignocellulosic feedstocks to liquid ...

Investigación

Bioingeniería

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Exprimir la célula como un robusto, Microfluidic intracelular Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

A Novel Stretching Platform for Applications in Cell and Tissue Mechanobiology

Una Plataforma Novela Estiramiento para Aplicaciones en Celular y Tisular Mecanobiología

Tools that allow the application of mechanical forces to cells and tissues or that can quantify the mechanical properties of biological tissues have ...

A Microfluidic Platform for High-throughput Single-cell Isolation and Culture

Una plataforma microfluídica para el aislamiento de gran procesamiento de celda única y Cultura

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet ...

Layered Alginate Constructs: A Platform for Co-culture of Heterogeneous Cell Populations

Las construcciones en capas de alginato: Una plataforma para el co-cultivo de poblaciones celulares heterogéneas

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Una de alto rendimiento plataforma de microarrays de células para análisis correlativo de la diferenciación celular y las fuerzas de tracción

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A Versatile Method of Patterning Proteins and Cells

Un método versátil de Patterning proteínas y células

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Nanotubos de ADN como una herramienta versátil para el estudio de polímeros Semiflexible

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Una plataforma microfluídica multicapa para la conducción de la expresión génica sin células prolongada

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A Microfluidic Platform for Stimulating Chondrocytes with Dynamic Compression

Una plataforma microfluídica para estimular los condrocitos con compresión dinámica

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