Name: use of image cytometry for quantification of pathogenic fungi in association with host cells
Uploaded: 2013-06-19T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Image Cytometry for Quantification of Pathogenic Fungi in Association with Host Cells at JoVE.com

1. إصابة الضامة مع H. المغمدة، C. البيض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 16 ساعة قبل العدوى، الضامة البذور في الكثافة المطلوبة في 24 لوحات جيدة. في هذا البروتوكول، تم استخدام كثافة من 3.0 × 10 5 خلايا / جيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الخلايا ا...

<ol>
	<li>Worsham, P. L., Goldman, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+plating+of+Histoplasma+capsulatum+without+addition+of+conditioned+medium+or+siderophores.">Quantitative plating of Histoplasma capsulatum without addition of conditioned medium or siderophores.</a> J. Med. Vet. Mycol. 26, 137-143 (1988).</li><li>Goihman-Yahr, M., Pine, L., Albornoz, M. C., Yarzabal, L., de Gomez, M. H., San Martin, B., Ocanto, A., Molina, T., Convit, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+plating+efficiency+and+estimation+of+viability+of+suspensions+of+Paracoccidioides+brasiliensis+yeast+cells.">Studies on plating efficiency and estimation of viability of suspensions of Paracoccidioides brasiliensis yeast cells.</a> Mycopathologia. 71, 73-83 (1980).</li><li>Bhatti, M. A., Hjertstedt, J., Hahn, B. L., Sohnle, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+delivery+of+yeast+cells+as+an+explanation+for+reduced+plating+efficiency+of+Candida+albicans.">Inefficient delivery of yeast cells as an explanation for reduced plating efficiency of Candida albicans.</a> Med. Mycol. 40, 465-469 (2002).</li><li>Chang, W. L., vander Heyde, H. C., Klein, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+quantitation+of+yeast:+a+novel+technique+for+use+in+animal+model+work+and+in+vitro+immunologic+assays.">Flow cytometric quantitation of yeast: a novel technique for use in animal model work and in vitro immunologic assays.</a> Journal of Immunological Methods. 211, 51-63 (1998).</li><li>Green, L., Petersen, B., Steimel, L., Haeber, P., Current, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+determination+of+antifungal+activity+by+flow+cytometry.">Rapid determination of antifungal activity by flow cytometry.</a> Journal of Clinical Microbiology. 32, 1088-1091 (1994).</li><li>Kirk, S. M., Callister, S. M., Lim, L. C., Schell, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+by+flow+cytometry.">Rapid susceptibility testing of Candida albicans by flow cytometry.</a> Journal of Clinical Microbiology. 35, 358-363 (1997).</li><li>Chan, L. L. -. Y., Lai, N., Wang, E., Smith, T., Yang, X., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+detection+method+for+apoptosis+and+necrosis+measurement+using+the+Cellometer+imaging+cytometry.">A rapid detection method for apoptosis and necrosis measurement using the Cellometer imaging cytometry.</a> Apoptosis. 16, 1295-1303 (2011).</li><li>Chan, L. L. -. Y., Shen, D., Wilkinson, A. R., Patton, W., Lai, N., Chan, E., Kuksin, D., Lin, B., Qiu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+image-based+cytometry+method+for+autophagy+detection+in+living+cells.">A novel image-based cytometry method for autophagy detection in living cells.</a> Autophagy. 8, 1371-1382 (2012).</li><li>Chan, L. L., Wilkinson, A. R., Paradis, B. D., Lai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Image-based+Cytometry+for+Comparison+of+Fluorescent+Viability+Staining+Methods.">Rapid Image-based Cytometry for Comparison of Fluorescent Viability Staining Methods.</a> Journal of Fluorescence. 22, 1301-1311 (2012).</li><li>Chan, L. L., Zhong, X., Pirani, A., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+kinetic+measurements+of+rare+cell+proliferation+using+Cellometer+image-based+cytometry.">A novel method for kinetic measurements of rare cell proliferation using Cellometer image-based cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 377, 8-14 (2012).</li><li>Chan, L. L., Zhong, X., Qiu, J., Li, P. Y., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellometer+Vision+as+an+alternative+to+flow+cytometry+for+cell+cycle+analysis,+mitochondrial+potential,+and+immunophenotyping.">Cellometer Vision as an alternative to flow cytometry for cell cycle analysis, mitochondrial potential, and immunophenotyping.</a> Cytom. Part A. 79, 507-517 (2011).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285, 1271-1275 (1999).</li><li>Berkes, C. A., Chan, L. L., Wilkinson, A., Paradis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Quantification+of+Pathogenic+Fungi+by+Cellometer+Image-Based+Cytometry.">Rapid Quantification of Pathogenic Fungi by Cellometer Image-Based Cytometry.</a> J. Micro. Meth. 91, 468-476 (2012).</li><li>Nguyen, V. Q., Sil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-induced+switch+to+the+pathogenic+yeast+form+of+Histoplasma+capsulatum+requires+Ryp1,+a+conserved+transcriptional+regulator.">Temperature-induced switch to the pathogenic yeast form of Histoplasma capsulatum requires Ryp1, a conserved transcriptional regulator.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (12), 4880-4885 (2008).</li><li>Wenisch, C., Linnau, K. F., Parschalk, B., Zedtwitz-Liebenstein, K., Georgopoulos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+susceptibility+testing+of+fungi+by+flow+cytometry+using+vital+staining.">Rapid susceptibility testing of fungi by flow cytometry using vital staining.</a> Journal of Clinical Microbiology. 35, 5-10 (1997).</li></ol>

صورة الخلوي يسمح للمستخدم التقاط صور ذات جودة عالية و، وذلك باستخدام البرمجيات المتخصصة، نفذ الكمي السريع للخلايا. واحد تحديا محتملا لاعتماد الخلوي صورة في مجال الجراثيم المرضية هو أن الميكروبات لفرزها موجودة في يسكنها خليط من الخلايا، بما في ذلك الخلايا المضيفة ا?...

وغالبا ما تتطلب دراسات من الفطريات المسببة للأمراض بالاشتراك مع مضيفيهم و / أو الخلايا المضيفة الكمي للخلايا قابلة للحياة الفطرية على دوام أو في ظل ظروف العدوى المختلفة. تعداد الوحدات تشكيل مستعمرة (كفو) هو الأسلوب المعيار الذي تم قياسه عدد الخلايا الفطرية قابلة للحياة، ولكن هذا الأسلوب له عيوب عدة والقيود. الأولى، العديد من الأنواع الفطرية هي بطيئة النمو. نمو المستعمرات مرئية على وسائل الاعلام الصلبة يمكن أن تأخذ 1-2 أسابيع، وتباطؤ ملحوظ وتيرة البحوث. الثانية، والتلاعب في عينات خلال كفو الطلاء هو عملية شاقة، حيث يجب أن يتم مطلي عدة التخفيفات لضمان وجود عدد معدود من المستعمرات. الثالث، وعدد من كفو أقل عادة من عدد من الكائنات قابلة للحياة مطلي لأن كفاءة الطلاء هو أقل بكثير من 100٪. على سبيل المثال، يمكن أن الكفاءة تصفيح لديمبرافيك الفطرية المغمدة النوسجة الممرض يكون مرتفعا كما 90٪، ولكن بشكل روتيني منخفضة مثل30٪ و هي أقل من (10٪) للذات صلة الفطرية dimorph نظيرة الكروانية البرازيلية 1، 2. كفاءة الطلاء عن المبيضات البيض هي أيضا عرضة للتقلب 3. وأخيرا، يمثل تحليل كفو للخلايا الحية فقط وتقسيم بنشاط قادرة على إنشاء النمو على وسائل الاعلام الصلبة، في حين، سيكون من المفيد في كثير من الحالات لتحديد وجود وتركيز من الخلايا الميتة غير نشط و / أو عملية الأيض. سابقا، وقد وصفت وسائل تدفق cytometric لتقدير من العديد من الأنواع الفطرية المسببة 4-6. ولكن نظرا لاحتواء قضايا السلامة الأحيائية المشاركة مع استخدام مستوى السلامة الأحيائية 2 (BSL2) أو مسببات الأمراض على مستوى BSL3 على أجهزة قياس التدفق الخلوي المشتركة، واعتماد هذا الأسلوب كانت محدودة. مثل التدفق الخلوي، الخلوي الصورة هي طريقة حساسة وسريعة الكمي الخلية. ومع ذلك، الخلوي صورة لا يمكن أن يؤديها في جزء صغير من التكلفة مع نتائج مماثلة 7 -11. هنا، نحن تصف الأساليب لأداء الخلوي صورة من الفطريات المسببة للأمراض بالاشتراك مع الخلايا المضيفة. علينا أن نظهر طرقنا باستخدام اثنين من مسببات الأمراض الفطرية الإنسان: المغمدة النوسجة والمبيضات البيض H.. المغمدة هو الممرض الفطرية ديمبرافيك التي تسبب أمراض الجهاز التنفسي؛ في البشر، وأنها تنمو الخميرة في مهدها كما ويعيد داخل الضامة السنخية المبيضات البيض هي الأنواع المتعايشة الإنسان التي تسبب أحيانا المبيضات. وتبين لنا أن صورة الخلوي يسمح الكمي السريع لهذه الخمائر، جنبا إلى جنب مع القدرة على التصور.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="always">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>16000044</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>AO/PI Solution</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td>CSK-0102</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Disposable Counting Chamber</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td>CHT4-SD100 </td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cellometer Vision</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cellometer Vision Software</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

use of image cytometry for quantification of pathogenic fungi in association with host cells

دراسات الآليات المرضية الخلوية من الخمائر المسببة للأمراض مثل المبيضات البيض، المغمدة المغمدة، والمستخفية المورمة عادة توظف إصابة الجنود الثدييات أو الخلايا المضيفة (أي الضامة) تليها الكمي باستخدام الخميرة مستعمرة تشكيل وحدة التحليل أو التدفق الخلوي. في حين كانت مستعمرة تشكيل وحدة التعداد الأسلوب الأكثر استخداما في هذا المجال، هذا الأسلوب له عيوب وأوجه القصور، بما في ذلك النمو البطيء لبعض الأنواع الفطرية على وسائل الاعلام الصلبة والكفاءة الطلاء منخفض و / أو المتغير، والذي هو مصدر قلق خاص عند مقارنة النمو من السلالات البرية من نوع ومتحولة. يمكن التدفق الخلوي توفير معلومات كمية سريع بشأن جدوى الخميرة، ومع ذلك، اعتماد تدفق cytometric الكشف عن الخمائر المسببة للأمراض كان محدودا لعدد من الأسباب العملية بما في ذلك تكاليف عالية واعتبارات السلامة الأحيائية. هنا، علينا أن نبرهن على الصورة القائمة علىمنهجية cytometric باستخدام الرؤية Cellometer (Nexcelom العلوم البيولوجية، LLC) لتقدير حجم الخمائر المسببة للأمراض قابلة للحياة في الثقافة المشتركة مع الضامة. تركز دراساتنا على الكشف عن مسببات الأمراض الفطرية اثنين الإنسان: المغمدة النوسجة والمبيضات البيض H.. المغمدة يستعمر الضامة السنخية بواسطة تكرار داخل يبلوع بلعم، وهنا، ونحن كميا تقييم نمو H. الخمائر المغمدة في RAW 264.7 الضامة باستخدام أكريدين البرتقال / propidium تلطيخ يوديد في تركيبة مع صورة الخلوي. لدينا وسيلة بأمانة اتجاهات النمو يلخص مقاسا مستعمرة التقليدية تشكيل وحدة التعداد، ولكن مع زيادة كبيرة حساسية. بالإضافة إلى ذلك، نقوم بتقييم مباشرة إصابة الضامة العيش مع سلالة GFP، معربا عن من C. البيض. يقدم منهجية لدينا وسيلة سريعة ودقيقة، واقتصادية للكشف والقياس الكمي لمسببات الأمراض الفطرية الهامة الإنسان في جمعية الطرافةالخلايا المضيفة ح.

استخدمنا صورة الرؤية Cellometer عداد الكريات لمراقبة نمو H. المغمدة في خلايا البلاعم. أصيب الخلايا 264.7 RAW مع H. خلايا الخميرة المغمدة وعند نقاط زمنية مختلفة، وتعرض العينات لAO / PI تلطيخ تليها تحليل cytometric المستندة إلى الصورة. في موازاة ذلك، تم تحليل عينات من قبل ?...

Watch this Scientific Journal Video about Use of Image Cytometry for Quantification of Pathogenic Fungi in Association with Host Cells at JoVE.com

Use of Image Cytometry for Quantification of Pathogenic Fungi in Association with Host Cells

هنا، علينا أن نظهر كيف الخلوي صورة يمكن استخدامها لتقدير حجم الفطريات المسببة للأمراض بالاشتراك مع الخلايا المضيفة في الثقافة. هذه التقنية يمكن استخدامها كبديل للتعداد كفو.

استخدام الخلوي على الصورة لعرض الكمي من الفطريات الممرضة في جمعية مع الخلايا المضيفة

Studies of the cellular pathogenesis mechanisms of pathogenic yeasts such as Candida albicans, Histoplasma capsulatum, and Cryptococcus neoformans ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantitative Assessment of Immune Cells in the Injured Spinal Cord Tissue by Flow Cytometry:  a Novel Use for a Cell Purification Method

التقييم الكمي لخلايا المناعة في الأنسجة النخاع الشوكي المصاب بواسطة التدفق الخلوي : رواية عن استخدام أسلوب خلية تنقية

Detection of immune cells in the injured central nervous system (CNS) using morphological or histological techniques has not always provided true ...

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

استخدام اعتراض البصرية لدراسة التفاعلات المرضي المضيف الحيوي للخلية الحية التصوير

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

استخدام نموذج لوصف EpiAirway طويل الأجل المضيف الممرض التفاعلات

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

مضان المجهري طرق لتحديد الجدوى من البكتيريا في جمعية مع خلايا الثدييات

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

الصورة القائمة على التدفق الخلوي وتقنيات لتقييم التغيرات في الحبيبية وظيفة<em&gt; في المختبر</em

Granulocytes play a key role in the body&#8217;s innate immune response to bacterial and viral infections. While methods exist to measure granulocyte ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

اللثوية Porphyromonas كما كائن نموذج لتقييم تفاعل البكتيريا اللاهوائية مع خلايا المضيف

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

استخدام التدفق الخلوي لتقييم حالة لونين في خلايا T

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

التدفق متعدد الألوان المستندة إلى الخلوي الكمي الميتوكوندريا وليسوسوميس في خلايا تي

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

An Advanced Murine Model for Nonalcoholic Steatohepatitis in Association with Type 2 Diabetes

نموذج Murine متقدم للتهاب الكبد غير الكحولية بالتعاون مع مرض السكري من النوع 2

Obesity is associated with chronic low-grade inflammation and insulin resistance, contributing to an increasing prevalence of chronic metabolic diseases, ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

إعداد نخاع العظام كله لتحليل الكتلة الخلايا من الخلايا العدلية النسب

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...