Name: use of image cytometry for quantification of pathogenic fungi in association with host cells
Uploaded: 2013-06-19T12:00:00
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1. एच. के साथ मैक्रोफेज का संक्रमण capsulatum, सी. albicans <ol><li> संक्रमण से पहले 16 घंटा, 24 अच्छी तरह प्लेटें में वांछित घनत्व में बीज मैक्रोफेज. इस प्रोटोकॉल में, अच्छी तरह से एक 3.0 x 10 5 कोशिकाओं के घनत्व / इस्तेम?...

<ol>
	<li>Worsham, P. L., Goldman, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+plating+of+Histoplasma+capsulatum+without+addition+of+conditioned+medium+or+siderophores.">Quantitative plating of Histoplasma capsulatum without addition of conditioned medium or siderophores.</a> J. Med. Vet. Mycol. 26, 137-143 (1988).</li><li>Goihman-Yahr, M., Pine, L., Albornoz, M. C., Yarzabal, L., de Gomez, M. H., San Martin, B., Ocanto, A., Molina, T., Convit, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+plating+efficiency+and+estimation+of+viability+of+suspensions+of+Paracoccidioides+brasiliensis+yeast+cells.">Studies on plating efficiency and estimation of viability of suspensions of Paracoccidioides brasiliensis yeast cells.</a> Mycopathologia. 71, 73-83 (1980).</li><li>Bhatti, M. A., Hjertstedt, J., Hahn, B. L., Sohnle, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+delivery+of+yeast+cells+as+an+explanation+for+reduced+plating+efficiency+of+Candida+albicans.">Inefficient delivery of yeast cells as an explanation for reduced plating efficiency of Candida albicans.</a> Med. Mycol. 40, 465-469 (2002).</li><li>Chang, W. L., vander Heyde, H. C., Klein, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+quantitation+of+yeast:+a+novel+technique+for+use+in+animal+model+work+and+in+vitro+immunologic+assays.">Flow cytometric quantitation of yeast: a novel technique for use in animal model work and in vitro immunologic assays.</a> Journal of Immunological Methods. 211, 51-63 (1998).</li><li>Green, L., Petersen, B., Steimel, L., Haeber, P., Current, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+determination+of+antifungal+activity+by+flow+cytometry.">Rapid determination of antifungal activity by flow cytometry.</a> Journal of Clinical Microbiology. 32, 1088-1091 (1994).</li><li>Kirk, S. M., Callister, S. M., Lim, L. C., Schell, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+by+flow+cytometry.">Rapid susceptibility testing of Candida albicans by flow cytometry.</a> Journal of Clinical Microbiology. 35, 358-363 (1997).</li><li>Chan, L. L. -. Y., Lai, N., Wang, E., Smith, T., Yang, X., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+detection+method+for+apoptosis+and+necrosis+measurement+using+the+Cellometer+imaging+cytometry.">A rapid detection method for apoptosis and necrosis measurement using the Cellometer imaging cytometry.</a> Apoptosis. 16, 1295-1303 (2011).</li><li>Chan, L. L. -. Y., Shen, D., Wilkinson, A. R., Patton, W., Lai, N., Chan, E., Kuksin, D., Lin, B., Qiu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+image-based+cytometry+method+for+autophagy+detection+in+living+cells.">A novel image-based cytometry method for autophagy detection in living cells.</a> Autophagy. 8, 1371-1382 (2012).</li><li>Chan, L. L., Wilkinson, A. R., Paradis, B. D., Lai, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Image-based+Cytometry+for+Comparison+of+Fluorescent+Viability+Staining+Methods.">Rapid Image-based Cytometry for Comparison of Fluorescent Viability Staining Methods.</a> Journal of Fluorescence. 22, 1301-1311 (2012).</li><li>Chan, L. L., Zhong, X., Pirani, A., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+kinetic+measurements+of+rare+cell+proliferation+using+Cellometer+image-based+cytometry.">A novel method for kinetic measurements of rare cell proliferation using Cellometer image-based cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 377, 8-14 (2012).</li><li>Chan, L. L., Zhong, X., Qiu, J., Li, P. Y., Lin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellometer+Vision+as+an+alternative+to+flow+cytometry+for+cell+cycle+analysis,+mitochondrial+potential,+and+immunophenotyping.">Cellometer Vision as an alternative to flow cytometry for cell cycle analysis, mitochondrial potential, and immunophenotyping.</a> Cytom. Part A. 79, 507-517 (2011).</li><li>Hull, C. M., Johnson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mating+type-like+locus+in+the+asexual+pathogenic+yeast+Candida+albicans.">Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans.</a> Science. 285, 1271-1275 (1999).</li><li>Berkes, C. A., Chan, L. L., Wilkinson, A., Paradis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Quantification+of+Pathogenic+Fungi+by+Cellometer+Image-Based+Cytometry.">Rapid Quantification of Pathogenic Fungi by Cellometer Image-Based Cytometry.</a> J. Micro. Meth. 91, 468-476 (2012).</li><li>Nguyen, V. Q., Sil, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-induced+switch+to+the+pathogenic+yeast+form+of+Histoplasma+capsulatum+requires+Ryp1,+a+conserved+transcriptional+regulator.">Temperature-induced switch to the pathogenic yeast form of Histoplasma capsulatum requires Ryp1, a conserved transcriptional regulator.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (12), 4880-4885 (2008).</li><li>Wenisch, C., Linnau, K. F., Parschalk, B., Zedtwitz-Liebenstein, K., Georgopoulos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+susceptibility+testing+of+fungi+by+flow+cytometry+using+vital+staining.">Rapid susceptibility testing of fungi by flow cytometry using vital staining.</a> Journal of Clinical Microbiology. 35, 5-10 (1997).</li></ol>

छवि cytometry के उपयोगकर्ता उच्च गुणवत्ता के चित्र पर कब्जा है और, विशेष सॉफ्टवेयर का उपयोग कर, कोशिकाओं का तेजी से मात्रा का ठहराव प्रदर्शन करने की अनुमति देता है. माइक्रोबियल रोगजनन के क्षेत्र में छवि cytometry ?...

उनके मेजबान और / या मेजबान कोशिकाओं के सहयोग से रोगजनक कवक का अध्ययन अक्सर एक समय के पाठ्यक्रम पर या अलग संक्रमण की शर्तों के तहत व्यवहार्य फंगल कोशिकाओं की मात्रा की आवश्यकता होती है. कॉलोनी के गठन इकाइयों की गणन (CFU) व्यवहार्य फंगल कोशिकाओं की संख्या में मापा गया है जिसके द्वारा मानक पद्धति है, हालांकि, इस तकनीक को कई कमियां और सीमाएँ हैं. सबसे पहले, कई कवक प्रजातियों धीमी गति से बढ़ रहे हैं. ठोस मीडिया पर दिखाई कालोनियों के विकास में महत्वपूर्ण अनुसंधान की गति को धीमा, 1-2 सप्ताह लग सकते हैं. कई dilutions के कालोनियों के एक गणनीय संख्या सुनिश्चित करने के लिए चढ़ाया जाना चाहिए के बाद दूसरा, CFU चढ़ाना दौरान नमूने के हेरफेर, एक थका देने वाली प्रक्रिया है. चढ़ाना दक्षता अच्छी तरह से 100% नीचे है क्योंकि तीसरा, CFU की संख्या मढ़वाया व्यवहार्य जीवों की संख्या की तुलना में आम तौर पर कम है. उदाहरण के लिए, द्विरूपी कवक रोगज़नक़ Histoplasma capsulatum के लिए चढ़ाना क्षमता 90% तक हो, लेकिन के रूप में नियमित रूप में कम कर रहे हैं कर सकते हैं30% और संबंधित कवक dimorph Paracoccidioides brasiliensis 1, 2 के लिए (10%) भी कम कर रहे हैं. Candida albicans के लिए चढ़ाना दक्षता भी परिवर्तनशीलता 3 के अधीन है. कई स्थितियों में, यह मर चुका है और / या पाचन निष्क्रिय कोशिकाओं की उपस्थिति और एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए उपयोगी होगा जबकि अंत में, CFU के विश्लेषण, ठोस मीडिया पर विकास को स्थापित करने में सक्षम ही रहते हैं और सक्रिय रूप से विभाजित कोशिकाओं के लिए खातों. इससे पहले, कई रोगजनक कवक प्रजातियों की मात्रा का ठहराव के लिए प्रवाह cytometric तरीकों 4-6 वर्णित किया गया है. हालांकि, साझा प्रवाह cytometers पर जैव सुरक्षा स्तर 2 (BSL2) या BSL3 स्तरीय रोगजनकों का उपयोग कर के साथ शामिल जैव सुरक्षा नियंत्रण के मुद्दों के कारण, इस तकनीक के गोद लेने सीमित किया गया है. प्रवाह की तरह, छवि cytometry के सेल मात्रा का ठहराव के एक संवेदनशील और तेजी से विधि है. हालांकि, छवि cytometry के तुलनीय परिणाम 7 के साथ लागत के एक अंश पर किया जा सकता है -11. यहाँ, हम मेजबान कोशिकाओं के सहयोग से रोगजनक कवक की छवि cytometry के प्रदर्शन के लिए विधियों का वर्णन. हम दो मानव कवक रोगजनकों का उपयोग कर हमारे तरीकों का प्रदर्शन: Histoplasma capsulatum और कैंडिडा सफेद एच.. capsulatum सांस की बीमारी का कारण बनता है कि एक द्विरूपी कवक रोगज़नक़ है, मनुष्यों में, यह के रूप में नवोदित खमीर बढ़ता है और वायुकोशीय मैक्रोफेज भीतर replicates कैंडिडा सफेद कभी कभी कैंडिडिआसिस का कारण बनता है कि एक मानव खानेवाला प्रजाति है.. हम छवि cytometry के दृश्य क्षमता के साथ एक साथ, इन yeasts के तेजी से मात्रा का ठहराव की अनुमति देता है दिखाते हैं.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="always">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>16000044</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>AO/PI Solution</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td>CSK-0102</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Disposable Counting Chamber</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td>CHT4-SD100 </td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cellometer Vision</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cellometer Vision Software</td>
			<td>Nexcelom Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

use of image cytometry for quantification of pathogenic fungi in association with host cells

ऐसे कैंडिडा सफेद, Histoplasma capsulatum, और क्रिप्टोकोकस neoformans रूप रोगजनक yeasts के सेलुलर रोगजनन तंत्र के अध्ययन सामान्यतः इकाई विश्लेषण या प्रवाह cytometry कॉलोनी बनाने का उपयोग कर खमीर मात्रा का ठहराव के द्वारा पीछा स्तनधारी मेजबान या मेजबान कोशिकाओं (यानी मैक्रोफेज) के संक्रमण को रोजगार. कॉलोनी बनाने इकाई गणन के क्षेत्र में सबसे अधिक इस्तेमाल किया विधि किया गया है, इस तकनीक के विकास की तुलना करते समय विशेष चिंता का विषय है जो ठोस मीडिया और कम और / या चर चढ़ाना क्षमता, पर कुछ कवक प्रजातियों की धीमी गति से विकास सहित, नुकसान और सीमाएँ जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती उपभेदों की. प्रवाह cytometry खमीर व्यवहार्यता के बारे में तेजी से मात्रात्मक जानकारी प्रदान कर सकते हैं, तथापि, रोगजनक yeasts के लिए प्रवाह cytometric का पता लगाने के गोद लेने के अपने उच्च लागत और जैव सुरक्षा कारणों से सहित व्यावहारिक कारणों से एक नंबर के लिए सीमित किया गया है. यहाँ, हम एक छवि के आधार पर प्रदर्शितमैक्रोफेज साथ सह संस्कृति में व्यवहार्य रोगजनक yeasts की मात्रा का ठहराव के लिए Cellometer विजन (बायोसाइंस Nexcelom, एलएलसी) का उपयोग cytometric कार्यप्रणाली. Histoplasma capsulatum और कैंडिडा सफेद एच.:. हमारी पढ़ाई दो मानव कवक रोगजनकों का पता लगाने पर ध्यान capsulatum बृहतभक्षककोशिका फेगोसोम भीतर नकल से वायुकोशीय मैक्रोफेज colonizes, और यहाँ, हम मात्रात्मक एच. के विकास का आकलन छवि cytometry के साथ संयोजन में acridine नारंगी / propidium आयोडाइड धुंधला का उपयोग रॉ 264.7 मैक्रोफेज में capsulatum yeasts. हमारे विधि ईमानदारी इकाई शुमार गठन पारंपरिक कॉलोनी द्वारा मापा के रूप में स्मरण दिलाता विकास प्रवृत्तियों, लेकिन काफी बढ़ संवेदनशीलता के साथ. इसके अतिरिक्त, हम सीधे सी का एक GFP-व्यक्त तनाव के साथ रहते मैक्रोफेज के संक्रमण का आकलन श्वेत. हमारी कार्यप्रणाली संघ बुद्धि में महत्वपूर्ण मानव कवक रोगजनकों का पता लगाने और मात्रा का ठहराव के लिए एक तेजी से, सही, और किफायती साधन प्रदान करता हैज मेजबान कोशिकाओं.

हम एच. के विकास पर नजर रखने के लिए Cellometer विजन छवि कोशिकामापी इस्तेमाल किया मैक्रोफेज कोशिकाओं में capsulatum. रॉ 264.7 कोशिकाओं एच. से संक्रमित थे विभिन्न बिंदुओं पर समय capsulatum खमीर कोशिकाओं और, नमूने छव?...

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Use of Image Cytometry for Quantification of Pathogenic Fungi in Association with Host Cells

यहाँ, हम छवि cytometry संस्कृति में मेजबान कोशिकाओं के सहयोग से रोगजनक कवक की मात्रा का ठहराव के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि कैसे प्रदर्शित करता है. इस तकनीक CFU गणना के लिए एक विकल्प के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है.

मेजबान कोशिकाओं के साथ एसोसिएशन में रोगजनक कवक की मात्रा के लिए छवि Cytometry का प्रयोग करें

Studies of the cellular pathogenesis mechanisms of pathogenic yeasts such as Candida albicans, Histoplasma capsulatum, and Cryptococcus neoformans ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantitative Assessment of Immune Cells in the Injured Spinal Cord Tissue by Flow Cytometry:  a Novel Use for a Cell Purification Method

घायल प्रवाह cytometry द्वारा स्पाइनल कॉर्ड ऊतक में प्रतिरक्षा कोशिकाओं के मात्रात्मक मूल्यांकन: एक सेल शोधन विधि के लिए एक उपन्यास का प्रयोग करें

Detection of immune cells in the injured central nervous system (CNS) using morphological or histological techniques has not always provided true ...

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

गतिशील लाइव सेल इमेजिंग के लिए मेजबान पैथोजन सहभागिता के अध्ययन के लिए एक ऑप्टिकल जाल का प्रयोग करें

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

लंबे समय तक मेजबान रोगज़नक़ सहभागिता निस्र्पक के लिए EpiAirway मॉडल का उपयोग

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

Fluorescence Microscopy Methods for Determining the Viability of Bacteria in Association with Mammalian Cells

स्तनधारी कोशिकाओं के सहयोग से बैक्टीरिया की व्यवहार्यता का निर्धारण के लिए प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी तरीके

Central to the field of bacterial pathogenesis is the ability to define if and how microbes survive after exposure to eukaryotic cells. Current protocols ...

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

छवि आधारित फ्लो तकनीक granulocyte फंक्शन में परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए<em&gt; इन विट्रो</em

Granulocytes play a key role in the body&#8217;s innate immune response to bacterial and viral infections. While methods exist to measure granulocyte ...

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

Porphyromonas gingivalis as a Model Organism for Assessing Interaction of Anaerobic Bacteria with Host Cells

मेजबान कोशिकाओं के साथ anaerobic बैक्टीरिया की बातचीत के मूल्यांकन के लिए एक मॉडल जीव के रूप Porphyromonas gingivalis

Anaerobic bacteria far outnumber aerobes in many human niches such as the gut, mouth, and vagina. Furthermore, anaerobic infections are common and ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

फ्लो का उपयोग टी कोशिकाओं में chromatin की स्थिति का आकलन करने के लिए

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

बहुरंगा प्रवाह Cytometry-टी कोशिकाओं में Mitochondria और Lysosomes के ठहराव आधारित

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...

An Advanced Murine Model for Nonalcoholic Steatohepatitis in Association with Type 2 Diabetes

प्रकार 2 मधुमेह के साथ सहयोग में Nonalcoholic Steatohepatitis के लिए एक उन्नत Murine मॉडल

Obesity is associated with chronic low-grade inflammation and insulin resistance, contributing to an increasing prevalence of chronic metabolic diseases, ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

न्यूट्रोफिल-लाइनेज सेल के मास साइटोमेट्री विश्लेषण के लिए पूरे अस्थि मज्जा की तैयारी

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...