Name: stereotaxic microinjection of viral vectors expressing cre recombinase to study the role of target genes in cocaine conditioned place preference
Uploaded: 2013-07-30T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke Anni Lee og Maureen Byrne for deres hjælp med at etablere den udvidede konditionerede sted præference protokol.

Alle procedurer udføres i overensstemmelse med Weill Cornell Medical College Institutional Animal Care og brugervilkår udvalgets regler. 1.. Forberedelse og opsætning for stereotaktisk Levering af virale vektorer <ol><li> Hvis et instrument, steril podepind, eller hånd iført sterile handske er forurenet med at komme i kontakt med en ikke-steril overflade, kasseres eller re-sterilisere instrumentet ved hjælp af en varm perle sterilisator, kasseres vatpind eller skifte til nye sterile ...

<ol>
	<li>Nestler, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+neurobiology+of+addiction.">Molecular neurobiology of addiction.</a> American Journal on Addictions. 10 (3), (2001).</li><li>Thomas, M. J., Kalivas, P. W., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroplasticity+in+the+mesolimbic+dopamine+system+and+cocaine+addiction.">Neuroplasticity in the mesolimbic dopamine system and cocaine addiction.</a> British Journal of Pharmacology. 154 (2), (2008).</li><li>Robinson, T. E., Browman, K. E., Crombag, H. S., Badiani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+the+induction+or+expression+of+psychostimulant+sensitization+by+the+circumstances+surrounding+drug+administration.">Modulation of the induction or expression of psychostimulant sensitization by the circumstances surrounding drug administration.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 22 (2), (1998).</li><li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+(CPP)+paradigm:+update+of+the+last+decade.">Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade.</a> Addiction Biology. 12 (3-4), (2007).</li><li>Mueller, D., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine-induced+conditioned+place+preference:+reinstatement+by+priming+injections+of+cocaine+after+extinction.">Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), (2000).</li><li>Itzhak, Y., Martin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine-induced+conditioned+place+preference+in+mice:+Induction,+extinction+and+reinstatement+by+related+psychostimulants.">Cocaine-induced conditioned place preference in mice: Induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants.</a> Neuropsychopharmacology. 26 (1), (2002).</li><li>Kreibich, A. S., Blendy, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+response+element-binding+protein+is+required+for+stress+but+not+cocaine-induced+reinstatement.">cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement.</a> Journal of Neuroscience. 24 (30), (2004).</li><li>Obrien, C. P., Childress, A. R., McLellan, T., Ehrman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+systematic+cue+exposure+with+standard+treatment+in+recovering+drug+dependent+patients.">Integrating systematic cue exposure with standard treatment in recovering drug dependent patients.</a> Addictive Behaviors. 15 (4), (1990).</li><li>O'Brien, C. P., Childress, A. R., McLellan, A. T., Ehrman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+learning+model+of+addiction.">A learning model of addiction.</a> Research publications - Association for Research in Nervous and Mental Disease. 70, (1992).</li><li>Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+and+neural+mechanisms+of+relapse.">Psychological and neural mechanisms of relapse.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 363 (1507), (2008).</li><li>Bueler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno+associated+viral+vectors+for+gene+transfer+and+gene+therapy.">Adeno associated viral vectors for gene transfer and gene therapy.</a> Biological Chemistry. 380, (1999).</li><li>Xiao, X., Li, J., McCown, T. J., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+by+adeno-associated+virus+vectors+into+the+central+nervous+system.">Gene transfer by adeno-associated virus vectors into the central nervous system.</a> Experimental Neurology. 144 (1), (1997).</li><li>Alexander, I. E., Russell, D. W., Spence, A. M., Miller, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gamma+irradiation+on+the+transduction+of+dividing+and+nondividing+cells+in+brain+and+muscle+of+rats+by+adeno-associated+virus+vectors.">Effects of gamma irradiation on the transduction of dividing and nondividing cells in brain and muscle of rats by adeno-associated virus vectors.</a> Human Gene Therapy. 7 (7), (1996).</li><li>Schierberl, K., Hao, J., Tropea, T. F., Ra, S., Giordano, T. P., Xu, Q., Garraway, S. M., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Inturrisi, C. E., Rajadhyaksha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(v)1.2+L-Type+Ca2++Channels+Mediate+Cocaine-Induced+GluA1+Trafficking+in+the+Nucleus+Accumbens,+a+Long-Term+Adaptation+Dependent+on+Ventral+Tegmental+Area+Ca(v)1.3+Channels.">Ca(v)1.2 L-Type Ca2+ Channels Mediate Cocaine-Induced GluA1 Trafficking in the Nucleus Accumbens, a Long-Term Adaptation Dependent on Ventral Tegmental Area Ca(v)1.3 Channels.</a> Journal of Neuroscience. 31 (38), (2011).</li><li>Schierberl, K., Giordano, T., Satpute, S., Hao, J., Kaur, G., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Rajadhyaksha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(v)1.3+L-type+Ca2++channels+mediate+long-term+adaptation+in+dopamine+D2L-mediated+GluA1+trafficking+in+the+dorsal+striatum+following+cocaine+exposure.">Ca(v)1.3 L-type Ca2+ channels mediate long-term adaptation in dopamine D2L-mediated GluA1 trafficking in the dorsal striatum following cocaine exposure.</a> Channels. 6 (1), 11-17 (2012).</li><li>Nestler, E. J., Bergson, C. M., Gultart, X., Hope, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neural+gene+expression+in+opiate+and+cocaine+addiction.">Regulation of neural gene expression in opiate and cocaine addiction.</a> NIDA Research Monograph. 125, (1993).</li><li>Hyman, S. E., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction+and+the+brain:+The+neurobiology+of+compulsion+and+its+persistence.">Addiction and the brain: The neurobiology of compulsion and its persistence.</a> Nature Reviews Neuroscience. 2 (10), (2001).</li><li>Lee, A. S., Ra, S., Rajadhyaksha, A. M., Britt, J. K., De Jesus-Cortes, H., Gonzales, K. L., Lee, A., Moosmang, S., Hofmann, F., Pieper, A. A., Rajadhyaksha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forebrain+elimination+of+cacna1c+mediates+anxiety-like+behavior+in+mice.">Forebrain elimination of cacna1c mediates anxiety-like behavior in mice.</a> Molecular Psychiatry. 17 (11), (2012).</li><li>Li, X., Wolf, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+virus-infected+brain+regions+using+a+GFP-illuminating+flashlight+enables+accurate+and+rapid+dissection+for+biochemical+analysis.">Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis.</a> Journal of Neuroscience Methods. 201 (1), 177-179 (2011).</li><li>Ahmed, B. Y., Chakravarthy, S., Eggers, R., Hermens, W., Zhang, J. Y., Niclou, S. P., Levelt, C., Sablitzky, F., Anderson, P. N., Lieberman, A. R., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+delivery+of+Cre-recombinase+to+neurons+in+vivo+and+stable+transduction+of+neurons+using+adeno-associated+and+lentiviral+vectors+-+art.+no.+5.">Efficient delivery of Cre-recombinase to neurons in vivo and stable transduction of neurons using adeno-associated and lentiviral vectors - art. no. 5.</a> BMC Neuroscience. 5, (2004).</li><li>Kaspar, B. K., Vissel, B., Bengoechea, T., Crone, S., Randolph-Moore, L., Muller, R., Brandon, E. P., Schaffer, D., Verma, I. M., Lee, K. F., Heinemann, S. F., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+virus+effectively+mediates+conditional+gene+modification+in+the+brain.">Adeno-associated virus effectively mediates conditional gene modification in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (4), 2320-2325 (2002).</li><li>Neve, R. L., Neve, K. A., Nestler, E. J., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+herpes+virus+amplicon+vectors+to+study+brain+disorders.">Use of herpes virus amplicon vectors to study brain disorders.</a> Biotechniques. 39 (3), 9 (2005).</li><li>Pohl, M., Braz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+of+pain:+emerging+strategies+and+future+directions.">Gene therapy of pain: emerging strategies and future directions.</a> European Journal of Pharmacology. 429 (1-3), (2001).</li><li>Rinaldi, A., Marshall, K. R., Preston, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-cytotoxic+herpes+simplex+virus+vector+which+expresses+Cre+recombinase+directs+efficient+site+specific+recombination.">A non-cytotoxic herpes simplex virus vector which expresses Cre recombinase directs efficient site specific recombination.</a> Virus Research. 65 (1), (1999).</li><li>Choi, V. W., McCarty, D. M., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV+hybrid+serotypes:+Improved+vectors+for+gene+delivery.">AAV hybrid serotypes: Improved vectors for gene delivery.</a> Current Gene Therapy. 5 (3), (2005).</li><li>Passini, M. A., Dodge, J. C., Bu, J., Yang, W., Zhao, Q., Sondhi, D., Hackett, N. R., Kaminsky, S. M., Mao, Q. W., Shihabuddin, L. S., Cheng, S. H., Sleat, D. E., Stewart, G. R., Davidson, B. L., Lobel, P., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+delivery+of+CLN2+reduces+brain+pathology+in+a+mouse+model+of+classical+late+infantile+neuronal+ceroid+lipofuscinosis.">Intracranial delivery of CLN2 reduces brain pathology in a mouse model of classical late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis.</a> Journal of Neuroscience. 26 (5), (2006).</li><li>Samulski, R. J., Chang, L. S., Shenk, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helper-free+stocks+of+recombinant+adeno-associated+viruses+-+normal+integration+does+not+require+viral+gene-expression.">Helper-free stocks of recombinant adeno-associated viruses - normal integration does not require viral gene-expression.</a> Journal of Virology. 63 (9), (1989).</li><li>Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., Omalley, K. L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+gene-expression+and+phenotypic+correction+using+adenoassociated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain.">Long-term gene-expression and phenotypic correction using adenoassociated virus vectors in the mammalian brain.</a> Nature Genetics. 8 (2), (1994).</li><li>Johansen, J. P., Hamanaka, H., Monfils, M. H., Behnia, R., Deisseroth, K., Blair, H. T., LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+activation+of+lateral+amygdala+pyramidal+cells+instructs+associative+fear+learning.">Optical activation of lateral amygdala pyramidal cells instructs associative fear learning.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (28), (2010).</li><li>Zhang, F., Gradinaru, V., Adamantidis, A. R., Durand, R., Airan, R. D., de Lecea, L., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+interrogation+of+neural+circuits:+technology+for+probing+mammalian+brain+structures.">Optogenetic interrogation of neural circuits: technology for probing mammalian brain structures.</a> Nature Protocols. 5 (3), (2010).</li></ol>

Regionalt og tidsligt-specifikt gen ablation via stereotaxic mikroinjektion af virale vektorer kombineret med CPP, der omfatter udryddelse og genindsættelse faser muliggør undersøgelse af de specifikke bidrag fra gener til tre forskellige faser af vanedannende-lignende opførsel. Mens betingede knockout, der er opnået udnytte den traditionelle Cre-LoxP system giver for spatio-tidsmæssigt begrænset gen ablation, stereotaksisk mikroinjektion Cre-recombinase i adskilte dele af hjernen hos floxet mus giver mulighed fo...

Kokain er et stærkt forstærkende psykostimulerende. Efter gentagen eksponering, forekomme flere molekylære og cellulære tilpasninger i belønning-relevant hjernen kredsløb, der menes at resultere i kompulsiv narkotika-søger adfærd, hvilket fik høje tilbagefald, der udgør et alvorligt klinisk problem 1.. Kokain udøver disse langvarige adfærdsmæssige effekter ved regulering af genekspression. At studere de tilpasninger, der opstår fra kronisk brug af kokain, har prækliniske gnavermodeller været brugt i udstrakt. En sådan model er den betingede sted præference (CPP) paradigme. Denne model indebærer udvikling af en lært forening mellem en tidligere neutralt miljø og givende egenskaber kokain. Efter flere fodboldmesterskaber af kokain med en bestemt kammer er dyr lov til frit at udforske kokain-parret og har non-kokain-parret miljøer, og hvis de foretrækker narkotika parrede rum, er de siges at have erhvervet en kokain-induceret place præference. Desuden efter en udslettelse træningsperiode, kan dette paradigme bruges til at studere kontekst-specifikke genindsættelse af kokain-søger adfærd. Sammenlignet med andre adfærdsmæssige modeller af vanedannende-lignende adfærd, såsom psykomotorisk sensibilisering, som bruges til at studere langsigtet kokain-induceret adfærdsmæssige og molekylær plasticitet 2,3 og selvadministration (SA), der menes at mere præcist efterligne vanedannende -lignende adfærd hos mennesker, er CPP paradigme en enkel procedure til at studere kokain kontekstuelle læring 4.. CPP protokoller kan bekvemt udvides til at omfatte udryddelse og genindsættelse faser ligeledes til SA, som giver mulighed for undersøgelse af de underliggende mekanismer narkotika trang og tilbagefald 5-7 og som menes at rekapitulere aspekter af, hvad der sker i humant lægemiddel-søgende adfærd og narkotika - og cue-induceret tilbagefald 8-10. En mekanisme, der ligger til grund forkokain-induceret adfærdsmæssige plasticitet, der er karakteristisk for hver af de forskellige faser af CPP, herunder erhvervelse, udryddelse, og genindsættelse, er aktivering af unikke signaturer genekspression inden for forskellige områder af hjernen. Til direkte teste, hvilke gener inden belønning-relevante områder af hjernen medierer kokain-induceret adfærdsmæssige ændringer, er det nyttigt at være i stand til at manipulere dem selektivt i et regionalt-specifik måde. En måde at opnå dette på er at microinject rekombinante adenoassociated viral (rAAV)-vektorer, der udtrykker Cre-rekombinase med stereotaktisk kirurgi, i særskilte områder i hjernen af ​​mus, der har målgener flankeret af loxP sites (floxet mus). Denne metode giver mulighed for meget præcis tidsmæssig og regional kontrol over, hvornår og hvor generne er poleres, i både delende og ikke-delende neuroner, uden at inducere immunresponser 11-13. Dette niveau af kontrol er en vigtig fordel i forhold til traditionelle Cre-LoxP teknologi af ynglende floxet mus wed mus, der udtrykker Cre-rekombinase under kontrol af et endogent gen promotor, idet timingen og fordelingen af ​​gendeletion kan mere stramt reguleret. Derudover viral vektor-medieret gen knockout omgår potentielle udviklingsmæssige kompenserende virkninger, der kan opstå ved brug af traditionelle knockout strategier. Foruden kokain CPP, som er beskrevet her, mikroinjektion af rAAV-Cre ind i hjernen på mus floxet at vurdere betydningen af ​​specifikke gener kan anvendes ubikvitært til adfærdsmæssige paradigmer, der involverer separate faser, herunder selvadministration og psykomotorisk sensibilisering. For eksempel har vores laboratorium udnyttet rAAV-Cre teknologi at undersøge den rolle, Ca V 1.2 L-type Ca2 +-kanaler i kokain psykomotorisk sensibilisering 14. Specifikt blev rAAV-Cre mikroinjiceres i nucleus accumbens (NAC) i mus med genet, som koder Ca v 1.2 floxet at påvise, at Ca v </sub&gt; 1.2 handler i denne region medierer ekspressionen fase af psykomotorisk sensibilisering 14,15. Dog kan rAAV-Cre strategi ikke anvendes, hvis mus med en floxet gen af interesse ikke eksisterer, som var vores erfaring, når vurderingen rolle Ca V 1.3 L-type Ca2 +-kanaler i psykomotorisk sensibilisering. Dermed en begrænsning af anvendelse rAAV-Cre præsenterer sig selv hvis betingede mus, ikke eksisterer for et bestemt gen af ​​interesse. Men rAAVs der udtrykker siRNA kan bruges til at Knockdown target gener, som vi har gjort for at undersøge, hvilken rolle Ca V 1.3 kanaler 14,15. Mikroinjektion rAAV-Cre i adskilte områder af hjernen i floxet mus og derefter teste dem i CPP paradigme tillader undersøgelse af de specifikke gener, der medierer de forskellige faser af vanedannende-lignende adfærd, og hvor de handler. Brug af dette paradigme har hjulpet i vores forståelse af, hvordan gentagen kokain administration i det væsentlige hijacks brains belønning kredsløb forårsager utilpasset forandringer i molekylær signaltransduktionsveje og genekspression, der fører til den afhængige tilstand 1,16,17.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioned place preference activity chambers</td>
			<td>Med Associates, Inc., St. Albans, VT, USA</td>
			<td>MED-CPP-MS</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic alignment system for mouse</td>
			<td>David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td>
			<td>model 900</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringes</td>
			<td>Hamilton Company, Reno, Nevada, USA</td>
			<td>7634-01</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-Cre-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7016</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7004</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotaxic microinjection of viral vectors expressing cre recombinase to study the role of target genes in cocaine conditioned place preference

Mikroinjektion rekombinante adenoassociated virale (rAAV) vektorer, der udtrykker Cre recombinase i særskilte mus hjerneområder til selektivt knockout gener af interesse giver mulighed for øget tidsmæssigt og regionalt specifikke kontrol af gendeletion sammenlignet med eksisterende metoder. Mens betinget sletning også kan opnås ved parring mus, der udtrykker Cre recombinase under kontrol af specifikke genpromotorer med mus, der bærer en floxet gen, stereotaxic mikroinjektion mulighed for målretning af diskrete områder i hjernen på forsøgslederen fastlagte tidspunkter af interesse. I forbindelse med kokain conditioned sted præference og andre kokain adfærdsmæssige paradigmer såsom selvadministration eller psykomotorisk overfølsomhed, der kan involvere tilbagetrækning udryddelse og / eller genindsættelse faser er denne teknik særligt nyttigt i at udforske den unikke bidrag target gener på disse særskilte faser af adfærdsmæssige modeller for kokain-induceret plasticitet. Specifiktdenne teknik giver mulighed for selektiv fjernelse af målgener under diskrete faser af en adfærd til at teste deres bidrag til adfærden tværs af tid. I sidste ende, denne forståelse giver mulighed for mere målrettede lægemidler, der er bedst i stand til at løse de mest potente risikofaktorer, der præsenterer sig selv i hver fase af vanedannende adfærd.

CPP Efter at have udført CPP om mikroinjicerede mus, bør man kontrollere, at den kohorte af kontrol-injicerede (rAAV-GFP) mus normalt have erhvervet præference for narkotika parrede kammer (figur 1A, 1B). Mus anses for at have erhvervet præference for en bestemt kammer, når kokain præference (tid i kokain-parret kammer minus tid brugt i saltvand parret kammer) er betydeligt højere sammenlignet med baseline præference score (figur 1B, A vs B) . Hvis vi, ...

Watch this Scientific Journal Video about Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference at JoVE.com

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Denne artikel beskriver, hvordan microinject virale vektorer i muse hjerne og derefter teste i klimatiseret sted præference paradigme, der omfatter en erhvervelse, udryddelse, og genindsættelse fasen.

Stereotaktisk Mikroinjektion af virale vektorer, der udtrykker Cre recombinase at undersøge den rolle, målgener i Kokain Konditioneret Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

Research

JoVE Journal

Behavior

Stereotactic Injection of MicroRNA-expressing Lentiviruses to the Mouse Hippocampus CA1 Region and Assessment of the Behavioral Outcome

Stereotaktisk Injektion af MicroRNA-udtrykkende lentivira til Mouse Hippocampus CA1 Region og vurdering af de Behavioral Outcome

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an ...

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

En procedure til at undersøge effekten af ​​langvarig mad begrænsning på Heroin Søger i afholdende Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Fat Preference: A Novel Model of Eating Behavior in Rats

Fat præference: A Novel Model af spiseadfærd i rotter

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

En procedure til at Overhold Kontekst-induceret Fornyelse af Pavlov-condition Alkohol-søger adfærd i rotter

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

Gnaverhjerne Mikroinjektion at studere Molekylær Substrater af motiveret adfærd

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

Vurdering af kokain-induceret Behavioral Sensibilisering og konditioneret Place Preference i mus

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

Placer og reaktion Læring i Open-feltet Tower Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Pavlovsk konditioneret Approach Træning i rotter

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Genindsættelse af stof-søgende i mus ved hjælp af konditioneret sted præference paradigme

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

En konditioneret sted præference protokol til måling af inkubation af trang hos rotter

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...