Name: stereotaxic microinjection of viral vectors expressing cre recombinase to study the role of target genes in cocaine conditioned place preference
Uploaded: 2013-07-30T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference at JoVE.com

De auteurs willen graag Anni Lee en Maureen Byrne bedanken voor hun hulp bij het vaststellen van de verlengde geconditioneerde plaats voorkeur protocol.

Alle procedures worden uitgevoerd in overeenstemming met het Weill Cornell Medical College Institutional Animal Care en regels comite gebruik. 1. Voorbereiding en Setup voor Stereotaxische Levering van virale vectoren <ol><li> Als een instrument, steriel wattenstaafje of hand dragen steriele handschoen wordt verontreinigd door in contact komen met een niet-steriele ondergrond, weggooien of opnieuw steriliseren het instrument met een hete kraal sterilisator, gooi het doekje of te wijzigen i...

<ol>
	<li>Nestler, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+neurobiology+of+addiction.">Molecular neurobiology of addiction.</a> American Journal on Addictions. 10 (3), (2001).</li><li>Thomas, M. J., Kalivas, P. W., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroplasticity+in+the+mesolimbic+dopamine+system+and+cocaine+addiction.">Neuroplasticity in the mesolimbic dopamine system and cocaine addiction.</a> British Journal of Pharmacology. 154 (2), (2008).</li><li>Robinson, T. E., Browman, K. E., Crombag, H. S., Badiani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+the+induction+or+expression+of+psychostimulant+sensitization+by+the+circumstances+surrounding+drug+administration.">Modulation of the induction or expression of psychostimulant sensitization by the circumstances surrounding drug administration.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 22 (2), (1998).</li><li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+(CPP)+paradigm:+update+of+the+last+decade.">Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade.</a> Addiction Biology. 12 (3-4), (2007).</li><li>Mueller, D., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine-induced+conditioned+place+preference:+reinstatement+by+priming+injections+of+cocaine+after+extinction.">Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), (2000).</li><li>Itzhak, Y., Martin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine-induced+conditioned+place+preference+in+mice:+Induction,+extinction+and+reinstatement+by+related+psychostimulants.">Cocaine-induced conditioned place preference in mice: Induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants.</a> Neuropsychopharmacology. 26 (1), (2002).</li><li>Kreibich, A. S., Blendy, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+response+element-binding+protein+is+required+for+stress+but+not+cocaine-induced+reinstatement.">cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement.</a> Journal of Neuroscience. 24 (30), (2004).</li><li>Obrien, C. P., Childress, A. R., McLellan, T., Ehrman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+systematic+cue+exposure+with+standard+treatment+in+recovering+drug+dependent+patients.">Integrating systematic cue exposure with standard treatment in recovering drug dependent patients.</a> Addictive Behaviors. 15 (4), (1990).</li><li>O'Brien, C. P., Childress, A. R., McLellan, A. T., Ehrman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+learning+model+of+addiction.">A learning model of addiction.</a> Research publications - Association for Research in Nervous and Mental Disease. 70, (1992).</li><li>Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+and+neural+mechanisms+of+relapse.">Psychological and neural mechanisms of relapse.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 363 (1507), (2008).</li><li>Bueler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno+associated+viral+vectors+for+gene+transfer+and+gene+therapy.">Adeno associated viral vectors for gene transfer and gene therapy.</a> Biological Chemistry. 380, (1999).</li><li>Xiao, X., Li, J., McCown, T. J., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+by+adeno-associated+virus+vectors+into+the+central+nervous+system.">Gene transfer by adeno-associated virus vectors into the central nervous system.</a> Experimental Neurology. 144 (1), (1997).</li><li>Alexander, I. E., Russell, D. W., Spence, A. M., Miller, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gamma+irradiation+on+the+transduction+of+dividing+and+nondividing+cells+in+brain+and+muscle+of+rats+by+adeno-associated+virus+vectors.">Effects of gamma irradiation on the transduction of dividing and nondividing cells in brain and muscle of rats by adeno-associated virus vectors.</a> Human Gene Therapy. 7 (7), (1996).</li><li>Schierberl, K., Hao, J., Tropea, T. F., Ra, S., Giordano, T. P., Xu, Q., Garraway, S. M., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Inturrisi, C. E., Rajadhyaksha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(v)1.2+L-Type+Ca2++Channels+Mediate+Cocaine-Induced+GluA1+Trafficking+in+the+Nucleus+Accumbens,+a+Long-Term+Adaptation+Dependent+on+Ventral+Tegmental+Area+Ca(v)1.3+Channels.">Ca(v)1.2 L-Type Ca2+ Channels Mediate Cocaine-Induced GluA1 Trafficking in the Nucleus Accumbens, a Long-Term Adaptation Dependent on Ventral Tegmental Area Ca(v)1.3 Channels.</a> Journal of Neuroscience. 31 (38), (2011).</li><li>Schierberl, K., Giordano, T., Satpute, S., Hao, J., Kaur, G., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Rajadhyaksha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(v)1.3+L-type+Ca2++channels+mediate+long-term+adaptation+in+dopamine+D2L-mediated+GluA1+trafficking+in+the+dorsal+striatum+following+cocaine+exposure.">Ca(v)1.3 L-type Ca2+ channels mediate long-term adaptation in dopamine D2L-mediated GluA1 trafficking in the dorsal striatum following cocaine exposure.</a> Channels. 6 (1), 11-17 (2012).</li><li>Nestler, E. J., Bergson, C. M., Gultart, X., Hope, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neural+gene+expression+in+opiate+and+cocaine+addiction.">Regulation of neural gene expression in opiate and cocaine addiction.</a> NIDA Research Monograph. 125, (1993).</li><li>Hyman, S. E., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction+and+the+brain:+The+neurobiology+of+compulsion+and+its+persistence.">Addiction and the brain: The neurobiology of compulsion and its persistence.</a> Nature Reviews Neuroscience. 2 (10), (2001).</li><li>Lee, A. S., Ra, S., Rajadhyaksha, A. M., Britt, J. K., De Jesus-Cortes, H., Gonzales, K. L., Lee, A., Moosmang, S., Hofmann, F., Pieper, A. A., Rajadhyaksha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forebrain+elimination+of+cacna1c+mediates+anxiety-like+behavior+in+mice.">Forebrain elimination of cacna1c mediates anxiety-like behavior in mice.</a> Molecular Psychiatry. 17 (11), (2012).</li><li>Li, X., Wolf, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+virus-infected+brain+regions+using+a+GFP-illuminating+flashlight+enables+accurate+and+rapid+dissection+for+biochemical+analysis.">Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis.</a> Journal of Neuroscience Methods. 201 (1), 177-179 (2011).</li><li>Ahmed, B. Y., Chakravarthy, S., Eggers, R., Hermens, W., Zhang, J. Y., Niclou, S. P., Levelt, C., Sablitzky, F., Anderson, P. N., Lieberman, A. R., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+delivery+of+Cre-recombinase+to+neurons+in+vivo+and+stable+transduction+of+neurons+using+adeno-associated+and+lentiviral+vectors+-+art.+no.+5.">Efficient delivery of Cre-recombinase to neurons in vivo and stable transduction of neurons using adeno-associated and lentiviral vectors - art. no. 5.</a> BMC Neuroscience. 5, (2004).</li><li>Kaspar, B. K., Vissel, B., Bengoechea, T., Crone, S., Randolph-Moore, L., Muller, R., Brandon, E. P., Schaffer, D., Verma, I. M., Lee, K. F., Heinemann, S. F., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+virus+effectively+mediates+conditional+gene+modification+in+the+brain.">Adeno-associated virus effectively mediates conditional gene modification in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (4), 2320-2325 (2002).</li><li>Neve, R. L., Neve, K. A., Nestler, E. J., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+herpes+virus+amplicon+vectors+to+study+brain+disorders.">Use of herpes virus amplicon vectors to study brain disorders.</a> Biotechniques. 39 (3), 9 (2005).</li><li>Pohl, M., Braz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+of+pain:+emerging+strategies+and+future+directions.">Gene therapy of pain: emerging strategies and future directions.</a> European Journal of Pharmacology. 429 (1-3), (2001).</li><li>Rinaldi, A., Marshall, K. R., Preston, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-cytotoxic+herpes+simplex+virus+vector+which+expresses+Cre+recombinase+directs+efficient+site+specific+recombination.">A non-cytotoxic herpes simplex virus vector which expresses Cre recombinase directs efficient site specific recombination.</a> Virus Research. 65 (1), (1999).</li><li>Choi, V. W., McCarty, D. M., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV+hybrid+serotypes:+Improved+vectors+for+gene+delivery.">AAV hybrid serotypes: Improved vectors for gene delivery.</a> Current Gene Therapy. 5 (3), (2005).</li><li>Passini, M. A., Dodge, J. C., Bu, J., Yang, W., Zhao, Q., Sondhi, D., Hackett, N. R., Kaminsky, S. M., Mao, Q. W., Shihabuddin, L. S., Cheng, S. H., Sleat, D. E., Stewart, G. R., Davidson, B. L., Lobel, P., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+delivery+of+CLN2+reduces+brain+pathology+in+a+mouse+model+of+classical+late+infantile+neuronal+ceroid+lipofuscinosis.">Intracranial delivery of CLN2 reduces brain pathology in a mouse model of classical late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis.</a> Journal of Neuroscience. 26 (5), (2006).</li><li>Samulski, R. J., Chang, L. S., Shenk, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helper-free+stocks+of+recombinant+adeno-associated+viruses+-+normal+integration+does+not+require+viral+gene-expression.">Helper-free stocks of recombinant adeno-associated viruses - normal integration does not require viral gene-expression.</a> Journal of Virology. 63 (9), (1989).</li><li>Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., Omalley, K. L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+gene-expression+and+phenotypic+correction+using+adenoassociated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain.">Long-term gene-expression and phenotypic correction using adenoassociated virus vectors in the mammalian brain.</a> Nature Genetics. 8 (2), (1994).</li><li>Johansen, J. P., Hamanaka, H., Monfils, M. H., Behnia, R., Deisseroth, K., Blair, H. T., LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+activation+of+lateral+amygdala+pyramidal+cells+instructs+associative+fear+learning.">Optical activation of lateral amygdala pyramidal cells instructs associative fear learning.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (28), (2010).</li><li>Zhang, F., Gradinaru, V., Adamantidis, A. R., Durand, R., Airan, R. D., de Lecea, L., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+interrogation+of+neural+circuits:+technology+for+probing+mammalian+brain+structures.">Optogenetic interrogation of neural circuits: technology for probing mammalian brain structures.</a> Nature Protocols. 5 (3), (2010).</li></ol>

Regionaal-als in de tijd-specifiek gen ablatie via stereotactische micro-injectie van virale vectoren in combinatie met CPP die uitsterven en herplaatsing fasen omvat maakt voor het onderzoek van de specifieke bijdragen van genen tot drie verschillende fasen van verslavende-achtig gedrag. Terwijl conditionele knockout dat wordt bereikt met behulp van de traditionele Cre-LoxP systeem biedt voor spatio-temporeel beperkt gen ablatie, stereotaxically microinjecting Cre-recombinase in discrete hersengebieden van floxed muize...

Cocaïne is een zeer versterkende psychostimulantia. Na herhaalde blootstelling, verschillende moleculaire en cellulaire adaptaties optreden in beloning-relevante hersenen circuits die worden verondersteld te resulteren in dwangmatige drug-zoekend gedrag, wordt gevraagd een hoge mate van terugval die een ernstig klinisch probleem 1 opleveren. Cocaïne oefent deze langdurige gedrags-effecten door het reguleren van genexpressie. Om de aanpassingen die voortvloeien uit chronische cocaïnegebruik studeren, hebben preklinische diermodellen uitgebreid gebruikt. Een dergelijk model is de plaats voorkeur (CPP) paradigma airconditioning. Dit model omvat de ontwikkeling van een geleerde associatie tussen een eerder neutrale omgeving en lonende eigenschappen van cocaïne. Na verschillende paringen van cocaïne met een bepaalde kamer, worden dieren toegelaten om de cocaïne-gepaarde en niet-cocaïne-gepaarde omgevingen vrij te verkennen en als ze liever de drug-gepaarde compartiment, worden ze zei een cocaïne-geïnduceerde Plac te hebben verworvene voorkeur. Bovendien, na een uitsterven stage, dit paradigma kan worden gebruikt om context-specifieke herstel van cocaïne-zoekend gedrag te bestuderen. Vergeleken met andere gedragsmodellen verslavend-achtig gedrag, zoals psychomotorische sensibilisatie, die wordt gebruikt om te bestuderen langdurige cocaïne geïnduceerde gedrag en moleculaire plasticiteit 2,3 en zelftoediening (SA), dat wordt verondersteld om nauwkeuriger na te bootsen verslavend -achtig gedrag gevonden bij de mens, het CPP paradigma is een eenvoudige procedure om cocaïne contextueel leren 4 bestuderen. CPP-protocollen kunnen gemakkelijk worden uitgebreid tot uitsterven en herstel fasen omvatten, net als bij SA, die het mogelijk maken voor onderzoek naar de mechanismen die ten grondslag liggen aan drugs verlangen en terugval 5-7 en die worden verondersteld om aspecten van wat er gebeurt in de menselijke recapituleren drug-zoekend gedrag en drugs - en cue-geïnduceerde terugval 8-10. Een mechanisme dat ten grondslag ligt aan decocaïne geïnduceerde gedrag plasticiteit die kenmerken van elk van de afzonderlijke fasen van CPP, inclusief aankoop, extinctie en herstel, is activatie van unieke signaturen van genexpressie in verschillende hersengebieden. Om direct testen welke genen binnen beloning-relevante hersengebieden bemiddelen cocaïne-geïnduceerde gedragsveranderingen, is het handig om te kunnen om ze selectief te manipuleren in een regionaal-specifieke wijze. Een manier om dit te bereiken is om recombinant adeno-geassocieerde virale (rAAV) vectoren die uitdrukken Cre recombinase met stereotaxische chirurgie, in verschillende hersengebieden van muizen die doelwit genen geflankeerd door LoxP sites (floxed muizen) hebben microinject. Deze methode zorgt voor een zeer nauwkeurige temporele en regionale controle over wanneer en waar genen worden weggenomen, in zowel delende als niet-delende neuronen, zonder het induceren van immuunreacties 11-13. Dit niveau van controle vormt een belangrijk voordeel ten opzichte van traditionele Cre-LoxP technologie van de fokkerij floxed muizen with muizen die Cre recombinase onder de controle van een endogeen gen promoter, dat de timing en de distributie van gendeletie kan strakker geregeld. Bovendien, virale vector-gemedieerde gen-knockout omzeilt mogelijke ontwikkelingsstoornissen compenserende effecten die zich kunnen voordoen met behulp van traditionele knockout strategieën. Naast cocaïne CPP, die hier in de hersenen van muizen floxed beschreven, micro-injectie van rAAV-Cre om de rol van specifieke genen kan worden alom toegepast gedragsparadigma&#39;s die afzonderlijke fasen, waaronder zelf-toediening en psychomotorische overgevoeligheid betrokken beoordelen. Zo heeft ons laboratorium gebruik gemaakt van de rAAV-Cre technologie om de rol van Ca v 1.2 L-type Ca2 +-kanalen in cocaïne psychomotorische sensibilisatie 14 bestuderen. Specifiek rAAV-Cre werd microgeïnjecteerd in de nucleus accumbens (NAC) van muizen met het gen dat codeert Ca v 1.2 floxed, aantonen dat Ca v </sub&gt; 1.2 handelt in deze regio bemiddelt de uitdrukking fase van psychomotorische overgevoeligheid 14,15. Echter, kan het rAAV-Cre strategie niet worden gebruikt als muizen met een floxed gen van belang niet bestaan, als onze ervaring was bij de beoordeling van de rol van Ca v 1.3 L-type Ca2 + kanalen in psychomotorische overgevoeligheid. Vandaar dat een beperking van het gebruik van rAAV-Cre aandient conditionele muizen bestaan ​​niet voor een bepaald gen van belang. Echter, rAAVs dat uitdrukkelijke siRNA kan worden gebruikt om knockdown doelwit-genen, zoals wij hebben gedaan om de rol van Ca v 1.3 kanalen 14,15 onderzoeken. Microinjecting rAAV-Cre in discrete hersengebieden floxed muizen en testen daarvan in het CPP paradigma maakt onderzoek naar de specifieke genen die de verschillende fasen van verslavende-achtige gedrag en wanneer hun activiteiten mediëren. Gebruik van dit paradigma heeft geholpen in ons begrip van hoe herhaalde cocaïne administratie in wezen kaapt de brAins beloningsschakelschema waardoor onaangepast veranderingen in de moleculaire signaaltransductie en genexpressie die leiden tot de verslaafde toestand 1,16,17.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioned place preference activity chambers</td>
			<td>Med Associates, Inc., St. Albans, VT, USA</td>
			<td>MED-CPP-MS</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic alignment system for mouse</td>
			<td>David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td>
			<td>model 900</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringes</td>
			<td>Hamilton Company, Reno, Nevada, USA</td>
			<td>7634-01</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-Cre-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7016</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7004</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotaxic microinjection of viral vectors expressing cre recombinase to study the role of target genes in cocaine conditioned place preference

Microinjecting recombinant adeno-geassocieerde virale (rAAV) vectoren die Cre-recombinase in aparte muis hersengebieden selectief knockout genen van belang maakt voor verbeterde tijdelijk-en regionaal-specifieke controle van gen-deletie, in vergelijking met bestaande methoden. Terwijl voorwaardelijke deletie kan ook worden bereikt door voortplanting muizen die uitdrukken Cre recombinase onder de controle van promoters specifiek gen met muizen die een floxed gen stereotaxische microinjectie maakt targeting van discrete hersengebieden bij experimentator bepaalde tijdstippen plaats. In de context van cocaïne geconditioneerde plaatsvoorkeur en andere cocaïne gedragsparadigma&#39;s zoals zelf-toediening of psychomotorische overgevoeligheid die intrekking, uitsterven en / of herstel fasen omvatten, deze techniek is bijzonder bruikbaar bij de unieke bijdrage van doelgenen onderzoeken om deze verschillende fasen van gedragsmodellen van cocaïne geïnduceerde plasticiteit. Specifiek,Deze techniek maakt het mogelijk voor selectieve ablatie van target genen tijdens discrete fasen van het gedrag van hun bijdrage aan het gedrag in de tijd te testen. Uiteindelijk is dit begrip kunnen gerichtere therapieën die het best in staat om de meest potente risicofactoren die zich tijdens elke fase van verslavend gedrag te presenteren pakken.

CPP Na het uitvoeren van CPP op gemicroinjecteerd muizen, moet men controleren of de cohort van controle-geïnjecteerde (rAAV-GFP) muizen normaal hebben verworven voorkeur voor de drug-gepaarde kamer (Figuur 1A, 1B). Muizen worden geacht te hebben verworven voorkeur voor een bepaalde kamer toen cocaïne voorkeur (tijd doorgebracht in de cocaïne-gepaarde kamer minus de tijd doorgebracht in de zoutoplossing-gepaarde kamer) is significant hoger in vergelijking met de uitgangssitu...

Watch this Scientific Journal Video about Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference at JoVE.com

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

In dit artikel wordt beschreven hoe u virale vectoren microinject in de hersenen van muizen en vervolgens te testen in een geconditioneerde voorkeur paradigma plaats die een overname, uitsterven en herstel fase omvat.

Stereotactische Micro-injectie van virale vectoren uitdrukken Cre Recombinase om de rol van Target Genen in Cocaine Geconditioneerd Place Voorkeur Studie

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

Research

JoVE Journal

Behavior

Stereotactic Injection of MicroRNA-expressing Lentiviruses to the Mouse Hippocampus CA1 Region and Assessment of the Behavioral Outcome

Stereotactische injectie van MicroRNA expressie Lentivirussen om de muis Hippocampus CA1 regio en Evaluatie van de Behavioral Outcome

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an ...

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

Een procedure om het effect van langdurig Eten Beperking Heroïne zoek naar in Abstinent Ratten Studie

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Fat Preference: A Novel Model of Eating Behavior in Rats

Vet voorkeur: A Novel Model van eetgedrag bij ratten

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Een procedure om-Context geïnduceerde Vernieuwing Observeer van Pavlov-geconditioneerde Alcohol-zoekend gedrag bij ratten

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

Knaagdieren Brain Micro-injectie om te studeren Molecular substraten van gemotiveerd gedrag

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

Evaluatie van cocaïne geïnduceerde sensitisatie en geconditioneerd Place Preference in Muizen

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

Plaats en Response Leren in de Open-veld Toren Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Pavlov geconditioneerde Aanpak Training in Ratten

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Herstel van de Drug-zoekende in muizen met behulp van de geconditioneerde plaats voorkeur paradigma

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

Een geconditioneerde plaats voorkeur Protocol voor het meten van de incubatie van verlangen bij ratten

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...