Name: the tomato/gfp-flp/frt method for live imaging of mosaic adult drosophila photoreceptor cells
Uploaded: 2013-09-20T18:00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells at JoVE.com

फ्रांस UMS3444 बायोसाइंसेज, ल्योन की PLATIM और Droso-उपकरण की सुविधा. बी.एम. अनुसंधान Fondation से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया CNRS (ATIP) से ला Recherche médicale डालना और ANR-12-BSV1-0019-01. पीडी रेटिना फ्रांस एसोसिएशन और ल्योन के इकोले नॉर्मले Supérieure (फ्रांस) द्वारा समर्थित किया गया. सी.एल. ला लीग नेशनल contre Le कैंसर एसोसिएशन द्वारा समर्थित किया गया.

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	<li>Hardie, R. C., Ottoson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Sensory physiology 5. 5, 1-79 (1985).</li><li>Wolff, T., Ready, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death+in+normal+and+rough+eye+mutants+of+Drosophila.">Cell death in normal and rough eye mutants of Drosophila.</a> Development. 113, 825-839 (1991).</li><li>Rister, J., Desplan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+mosaics+of+opsin+expression+in+invertebrates+and+vertebrates.">The retinal mosaics of opsin expression in invertebrates and vertebrates.</a> Dev Neurobiol. 71, 1212-1226 (2011).</li><li>Halder, G., Callaerts, P., Gehring, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+ectopic+eyes+by+targeted+expression+of+the+eyeless+gene+in+Drosophila.">Induction of ectopic eyes by targeted expression of the eyeless gene in Drosophila.</a> Science. 267, 1788-1792 (1995).</li><li>Mollereau, B., Domingos, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor+differentiation+in+Drosophila:+from+immature+neurons+to+functional+photoreceptors.">Photoreceptor differentiation in Drosophila: from immature neurons to functional photoreceptors.</a> Dev Dyn. 232, 585-592 (2005).</li><li>Mollereau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+death:+what+can+we+learn+from+flies?+Editorial+for+the+special+review+issue+on+Drosophila+apoptosis.">Cell death: what can we learn from flies? Editorial for the special review issue on Drosophila apoptosis.</a> Apoptosis. 14, 929-934 (2009).</li><li>Charlton-Perkins, M., Brown, N. L., Cook, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lens+in+focus:+a+comparison+of+lens+development+in+Drosophila+and+vertebrates.">The lens in focus: a comparison of lens development in Drosophila and vertebrates.</a> Mol Genet Genomics. 286, 189-213 (2011).</li><li>Jenny, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Planar+cell+polarity+signaling+in+the+Drosophila+eye.">Planar cell polarity signaling in the Drosophila eye.</a> Curr Top Dev Biol. 93, 189-227 (2010).</li><li>Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+visual+transduction.">Drosophila visual transduction.</a> Trends Neurosci. 35, 356-363 (2012).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery-based+science+education:+functional+genomic+dissection+in+Drosophila+by+undergraduate+researchers.">Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers.</a> PLoS Biol. 3, e59 (2005).</li><li>Tomlinson, A., Ready, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+differentiation+in+the+Drosophila+ommatidium.">Neuronal differentiation in the Drosophila ommatidium.</a> Dev Biol. 120, 366-376 (1987).</li><li>Mendes, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER+stress+protects+from+retinal+degeneration.">ER stress protects from retinal degeneration.</a> Embo J. 28, 1296-1307 (2009).</li><li>Jenny, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+adult+Drosophila+eyes+for+thin+sectioning+and+microscopic+analysis.">Preparation of adult Drosophila eyes for thin sectioning and microscopic analysis.</a> J Vis Exp. , (2011).</li><li>Mollereau, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-step+process+for+photoreceptor+formation+in+Drosophila.">Two-step process for photoreceptor formation in Drosophila.</a> Nature. 412, 911-913 (2001).</li><li>Domingos, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spalt+transcription+factors+are+required+for+R3/R4+specification+and+establishment+of+planar+cell+polarity+in+the+Drosophila+eye.">Spalt transcription factors are required for R3/R4 specification and establishment of planar cell polarity in the Drosophila eye.</a> Development. 131, 5695-5702 (2004).</li><li>Mendes, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+c-d+regulates+developmental+apoptosis+in+the+Drosophila+retina.">Cytochrome c-d regulates developmental apoptosis in the Drosophila retina.</a> EMBO Rep. 7, 933-939 (2006).</li><li>Domingos, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+R7+and+R8+differentiation+by+the+spalt+genes.">Regulation of R7 and R8 differentiation by the spalt genes.</a> Dev Biol. 273, 121-133 (2004).</li><li>Mollereau, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+green+fluorescent+protein+enhancer+trap+screen+in+Drosophila+photoreceptor+cells.">A green fluorescent protein enhancer trap screen in Drosophila photoreceptor cells.</a> Mech Dev. 93, 151-160 (2000).</li><li>Pichaud, F., Desplan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+visualization+approach+for+identifying+mutations+that+affect+differentiation+and+organization+of+the+Drosophila+ommatidia.">A new visualization approach for identifying mutations that affect differentiation and organization of the Drosophila ommatidia.</a> Development. 128, 815-826 (2001).</li><li>Gambis, A., Dourlen, P., Steller, H., Mollereau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-color+in+vivo+imaging+of+photoreceptor+apoptosis+and+development+in+Drosophila.">Two-color in vivo imaging of photoreceptor apoptosis and development in Drosophila.</a> Dev Biol. 351, 128-134 (2011).</li><li>Golic, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-specific+recombination+between+homologous+chromosomes+in+Drosophila.">Site-specific recombination between homologous chromosomes in Drosophila.</a> Science. 252, 958-961 (1991).</li><li>Porter, J. A., Hicks, J. L., Williams, D. S., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+localizations+of+and+requirements+for+the+two+Drosophila+ninaC+kinase/myosins+in+photoreceptor+cells.">Differential localizations of and requirements for the two Drosophila ninaC kinase/myosins in photoreceptor cells.</a> J Cell Biol. 116, 683-693 (1992).</li><li>Johnson, K., Grawe, F., Grzeschik, N., Knust, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+crumbs+is+required+to+inhibit+light-induced+photoreceptor+degeneration.">Drosophila crumbs is required to inhibit light-induced photoreceptor degeneration.</a> Curr Biol. 12, 1675-1680 (2002).</li><li>Dourlen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+fatty+acid+transport+protein+regulates+rhodopsin-1+metabolism+and+is+required+for+photoreceptor+neuron+survival.">Drosophila fatty acid transport protein regulates rhodopsin-1 metabolism and is required for photoreceptor neuron survival.</a> PLoS Genet. 8, e1002833 (2012).</li><li>Mlodzik, M., Hiromi, Y., Weber, U., Goodman, C. S., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+seven-up+gene,+a+member+of+the+steroid+receptor+gene+superfamily,+controls+photoreceptor+cell+fates.">The Drosophila seven-up gene, a member of the steroid receptor gene superfamily, controls photoreceptor cell fates.</a> Cell. 60, 211-224 (1990).</li><li>Gaul, U., Chang, H., Choi, T., Karim, F., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+ras+targets+using+a+genetic+approach.">Identification of ras targets using a genetic approach.</a> Ciba Found Symp. 176, 85-92 (1993).</li><li>Wassarman, D. A., Therrien, M., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ras+signaling+pathway+in+Drosophila.">The Ras signaling pathway in Drosophila.</a> Curr Opin Genet Dev. 5, 44-50 (1995).</li><li>Janody, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mosaic+genetic+screen+reveals+distinct+roles+for+trithorax+and+polycomb+group+genes+in+Drosophila+eye+development.">A mosaic genetic screen reveals distinct roles for trithorax and polycomb group genes in Drosophila eye development.</a> Genetics. 166, 187-200 (2004).</li><li>Legent, K., Steinhauer, J., Richard, M., Treisman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+screen+for+X-linked+mutations+affecting+Drosophila+photoreceptor+differentiation+identifies+Casein+kinase+1alpha+as+an+essential+negative+regulator+of+wingless+signaling.">A screen for X-linked mutations affecting Drosophila photoreceptor differentiation identifies Casein kinase 1alpha as an essential negative regulator of wingless signaling.</a> Genetics. 190, 601-616 (2012).</li><li>Newsome, T. P., Asling, B., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Drosophila+photoreceptor+axon+guidance+in+eye-specific+mosaics.">Analysis of Drosophila photoreceptor axon guidance in eye-specific mosaics.</a> Development. 127, 851-860 (2000).</li><li>Berger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+identification+of+genes+that+regulate+neuronal+wiring+in+the+Drosophila+visual+system.">Systematic identification of genes that regulate neuronal wiring in the Drosophila visual system.</a> PLoS Genet. 4, e1000085 (2008).</li><li>Bayat, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+mitochondrial+methionyl-tRNA+synthetase+cause+a+neurodegenerative+phenotype+in+flies+and+a+recessive+ataxia+(ARSAL)+in+humans.">Mutations in the mitochondrial methionyl-tRNA synthetase cause a neurodegenerative phenotype in flies and a recessive ataxia (ARSAL) in humans.</a> PLoS Biol. 10, e1001288 (2012).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

ड्रोसोफिला आँख व्यापक रूप से विकास, प्रसार और अस्तित्व को विनियमित संकेत दे रास्ते को समझने के लिए इस्तेमाल किया गया है. 1990 के दशक में, आनुवंशिक स्क्रीन की एक बड़ी संख्या पीआर विकास 25-27 के प्रारंभिक चरणों के दौरान आवश्यक रास्ते की पहचान करने के लिए किया जाता था. आनुवंशिक स्क्रीन की दक्षता यह संभव मोज़ेक क्लोन 21 में नुकसान के समारोह म्यूटेशनों परीक्षण करने के लिए बनाता है जो mitotic पुनर्संयोजन तकनीक, द्वारा काफी बढ़ गया था. इसलिए, भ्रूण घातक परिवर्तन की भूमिका को व्यवस्थित रूप अन्यथा विषमयुग्मजी थे कि मक्खियों की आंखों में homozygous उत्परिवर्ती क्लोन में परीक्षण किया जा सकता है. अधिकांश मोज़ेक चोकर जल्दी पीआर भर्ती, भेदभाव, axonal प्रक्षेपण या विकासशील लार्वा या pupae 10,25-31 में होने वाली morphogenesis पर ध्यान केंद्रित किया है. तिथि करने के लिए, केवल एक मोज़ेक स्क्रीन electroretin के माध्यम से दृश्य प्रतिक्रिया की निगरानी के द्वारा, वयस्क पीआर समारोह को विनियमित तंत्र की जांच की गई हैogram 32 रिकॉर्डिंग. टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि और उत्परिवर्ती रहने वाले जानवरों में समय जरूर विश्लेषण प्रदर्शन करने की संभावना के साथ, हम वयस्क पीआर व्यवहार्यता को विनियमित करने वाले कारकों की पहचान करने के लिए एक नई विधि तैयार की है और 20,24 समारोह है. टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि राल एम्बेडेड आंखों की शास्त्रीय ऊतकीय सेक्शनिंग पर कई प्रमुख फायदे हैं. सबसे पहले, इस पद्धति बहुत तेजी से, सस्ता और ऊतकीय विधि से प्रदर्शन करने के लिए आसान, एक उपयुक्त पानी की सूई उद्देश्य से सुसज्जित एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (अभिकर्मकों और उपकरणों की तालिका देखें) उपलब्ध है बशर्ते कि है. दूसरा, टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि एक मिनी सफेद transgene ले जाने, इस तरह के (+ W यूएएस) पी की अभिव्यक्ति के रूप में, transgene अभिव्यक्ति के साथ संयोजन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. टमाटर / GFP-FLP / FRT प्रणाली, पी डब्ल्यू + प्रतिरूप का पता लगाने के लिए प्रयोग किया जाता है, जिसमें ऊतकीय वर्गों, के विपरीत (यूएएस, w +) प्रतिरूप डी के साथ हस्तक्षेप नहीं करता हैटमाटर फ्लोरोसेंट प्रोटीन पर आधारित etection. पी का प्रयोग (यूएएस fatp, w +) ट्रांसजेनिक मक्खियों, हम fatp उत्परिवर्ती पीआरएस का बचाव (चित्रा 7) कल्पना करने में सक्षम थे. तीसरा, टमाटर / GFP-FLP / FRT पर आधारित, खो पीआरएस के जीनोटाइप की अस्पष्टता है कि सहित प्रतिरूप विश्लेषण के सभी प्रकार के एक प्रमुख ख़तरा. दरअसल, यह एक पीआर क्योंकि एक विशेष जीन समारोह की कमी की वजह से या विशेष रूप से उत्परिवर्ती क्लोन की सीमा पर एक सेल गैर स्वायत्त प्रभाव, के अनुपस्थित है स्पष्ट नहीं है कि हो सकता है. टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि यह संभव कई सप्ताह की अवधि में ही पशुओं में जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती पीआरएस का पालन करने बनाकर अध: पतन के लिए इस समस्या को हल हो जाता है. हम गतिज द्वारा व्यक्तिगत पीआरएस के भाग्य अलग fatp उत्परिवर्ती मक्खियों पर विश्लेषण (चित्रा 6) का पालन करने में सक्षम थे. एक ही क्लोन क्योंकि आसपास के जंगली प्रकार के क्लोन का सटीक आकार के, अलग अलग समय पर एक दिया पशु में पहचाना जा सकता है. हम स्पष्ट दिखाने के लिए सक्षम थेसभी लापता पीआरएस पीआरएस में fatp म्यूटेंट की भूमिका सेल स्वायत्त है यह दर्शाता है कि fatp के लिए उत्परिवर्ती थे कि ly. इस प्रकार, एक काइनेटिक विश्लेषण में पीआरएस के नुकसान की निगरानी के द्वारा, यह वयस्क शुरुआत अध: पतन के मॉडल में पीआरएस के जीनोटाइप निर्धारित करने के लिए संभव है. अंत में, टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि पीसीपी 20 की स्थापना को विनियमित करने वाले कारकों की पहचान के लिए बहुत शक्तिशाली साबित कर दिया है. वर्गों के लिए आवश्यकता के बिना एक ध्रुवता phenotype के लिए पच्चीकारी ommatidia की एक बड़ी संख्या में स्कोरिंग की संभावना, पीसीपी की स्थापना के लिए पीआर आवश्यकता के तेजी से दृढ़ संकल्प की सुविधा. फिर भी, पीआर अखंडता के महीन विश्लेषण चरण विपरीत या इलेक्ट्रॉनिक microscopies द्वारा पीछा पारंपरिक सेक्शनिंग की आवश्यकता होगी. अंत में, टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि इस तरह की तुलना के रूप में पीआर विकास की प्रक्रिया और वयस्क पीआर कार्यों को विनियमित करने वाले कारकों की पहचान करने के लिए कुशल मोज़ेक जांच के लिए नई संभावनाएं खुलतीयौन प्रतिक्रिया और व्यवहार्यता.

ड्रोसोफिला रेटिना polarity के एक स्पष्ट रूप से परिभाषित अक्ष (चित्रा 1 बी) के साथ ठीक आयोजित कर रहे हैं जो लगभग 800 ommatidial इकाइयों (चित्रा 1 ए), से बना है. आठ फोटोरिसेप्टर कोशिकाओं (पीआरएस) और शंकु कोशिकाओं, वर्णक कोशिकाओं और कोशिकाओं 1,2 बाल खड़े सहित 12 सहायक कोशिकाओं,: प्रत्येक इकाई में 20 कक्ष हैं. पीआर के दो वर्गों वे व्यक्त rhodopsin के प्रकार (आरएच) के आधार पर प्रतिष्ठित हैं. छह बाहरी पीआरएस (R1-6) RH1 एक्सप्रेस और एक trapezoid पैटर्न (चित्रा 1C) में व्यवस्थित कर रहे हैं. चतुर्भुज के केंद्र में, दो भीतरी पीआरएस (R7/R8) rhodopsin की चार संभव प्रकार (Rh3, RH4, Rh5 या RH6) एक्सप्रेस और R7 R8 3 के शीर्ष पर है कि इस तरह के आयोजन कर रहे हैं. 2,500 से ज्यादा जीन आँख विकास के उद्देश्यों सहित प्रक्रियाओं की एक व्यापक पैनल, के अध्ययन के लिए एक बहुत शक्तिशाली मॉडल साबित कर दिया है जो ड्रोसोफिला आँख 4, के morphogenesis में शामिल कर रहे हैंlopment, पीआर भर्ती, भेदभाव, तलीय सेल polarity, morphogenesis, अस्तित्व, apoptosis और दृश्य पारगमन 5-9. ड्रोसोफिला आंख पर काम कर रहे शोधकर्ताओं ने कई वर्षों से, रेटिना इमेजिंग और व्यवस्थित आनुवंशिक स्क्रीन से बाहर ले जाने के लिए तकनीक विकसित की है. छवि के लिए सबसे आसान तरीका वयस्क रेटिना एक स्थिर जानवर (चित्रा 1 ए) में कॉर्निया पर लग रहा है. कॉर्निया की संरचना स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा ठीक से देखे जा सकते हैं और URCFG संघ द्वारा एक बड़े पैमाने पर आनुवंशिक स्क्रीन में इस्तेमाल किया गया था ( <a href="http://www.bruinfly.ucla.edu" target="_blank">http://www.bruinfly.ucla.edu</a> ) 10. इस बार विकास या सेल व्यवहार्यता में प्रारंभिक कदम को नियंत्रित करने के जीन में उत्परिवर्तन से प्रेरित इस तरह के नेत्र खुरदरापन या चमक के रूप में कार्निया संरचना में वैश्विक morphological परिवर्तन, दृश्यमान करने के लिए एक बहुत प्रभावी तरीका है. हालांकि, कॉर्निया की वैश्विक दृश्य सु नहीं हैपीआर rhabdomere morphogenesis या वयस्क पीआर व्यवहार्यता और समारोह को विनियमित करने वाले कारकों की पहचान करने के लिए fficient. इस तरह के विश्लेषण रेटिना 11-13 की स्पर्शरेखा अर्द्ध पतली राल वर्गों के चरण विपरीत माइक्रोस्कोपी पर आधारित पीआर अखंडता का एक और अधिक गहन जांच की आवश्यकता होती है. इस तकनीक उत्परिवर्ती पीआरएस लाल रंग 14,15 की कमी से पहचाना जा सकता है जिसमें मोज़ेक विश्लेषण के लिए उपयुक्त है. मोजाइक उत्परिवर्ती क्लोन भी प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी 16,17 पर हरे रंग का फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) के संकेत की कमी के आधार पर, पोटा संबंधी या वयस्क रेटिना के पूरे माउंट dissections में देखे जा सकते हैं. इन दोनों तकनीक बहुत उपयोगी होते हैं, लेकिन दोनों श्रम और समय लेने वाली होती हैं और इसलिए बड़े पैमाने पर प्रदर्शन के लिए उपयुक्त नहीं हैं. हम और दूसरों को तेजी से जनसंपर्क का विश्लेषण करती है सुविधाजनक बनाने के लिए, फ्लोरोसेंट प्रोटीन 18,19 उत्पादन पीआरएस की इमेजिंग के लिए कॉर्निया निराकरण तकनीकों के उपयोग के लिए विकसित किया है. इस तकनीक, उत्परिवर्ती के साथक्लोन मोज़ेक वयस्क ड्रोसोफिला क्लोन में लाल (डब्ल्यू) वर्णक के autofluorescence के आधार पर पहचाना जा सकता है. हालांकि, इस विधि सेल स्वायत्तता का समाधान आवश्यक एकल कोशिका संकल्प 19 issues प्रदान नहीं करता है. हम mitotic पुनर्संयोजन 20 के साथ कॉर्निया निराकरण द्वारा फ्लोरोसेंट प्रोटीन की इमेजिंग जोड़ती है जो टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि, विकास के द्वारा इस समस्या overcame. इस विधि एकल कोशिका प्रस्ताव पर उच्च throughput, मोज़ेक क्लोन में उत्परिवर्ती पीआरएस का तेजी से और सटीक पहचान, (अनुमति देता <a href="http://www.ens-lyon.fr/LBMC/ApoDrosoDatabase/" target="_blank">http://www.ens-lyon.fr/LBMC/ApoDrosoDatabase/</a> ). यह ड्रोसोफिला में रहने वाले हफ्तों की अवधि में व्यक्तिगत पीआरएस निम्नलिखित के लिए, गतिज विश्लेषण में इस्तेमाल के लिए उपयुक्त है. हम मोज़ेक आंखों की सरल, गतिज विश्लेषण में इसके उपयोग के लिए यहां टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि और सुझावों का वर्णन.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Agarose</td>
			<td>
				Euromedex</td>
			<td>
				D5-E</td>
			<td>
				Regular agarose is used to immobilize the flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Petri dish</td>
			<td>
				BD Falcon</td>
			<td>
				353001</td>
			<td>
				35 x 10 mm, 1.37 x 0.39 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Cold-ice water</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				To maintain the flies anesthetized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				[HEADER]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
			<td>
				Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Dissecting microscope</td>
			<td>
				Dutcher</td>
			<td>
				SMZ645</td>
			<td>
				&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				Water Bath</td>
			<td>
				Julabo</td>
			<td>
				9550102</td>
			<td>
				To keep the agarose solution at warm temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>
				40X Water objective</td>
			<td>
				Zeiss</td>
			<td>
				420967-9900-000</td>
			<td>
				Water dipping objective for the confocal microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

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the tomato/gfp-flp/frt method for live imaging of mosaic adult drosophila photoreceptor cells

ड्रोसोफिला आँख व्यापक रूप से विकास और neuronal अध: पतन के अध्ययन के लिए एक मॉडल के रूप में प्रयोग किया जाता है. शक्तिशाली mitotic पुनर्संयोजन तकनीक के साथ, प्रतिरूप विश्लेषण पर आधारित सुरुचिपूर्ण आनुवंशिक स्क्रीन आँख विकास और लार्वा चरणों में फोटोरिसेप्टर (पीआर) भेदभाव में शामिल संकेत दे रास्ते की पहचान करने के लिए नेतृत्व किया है. हम यहाँ वयस्क ड्रोसोफिला रहने वाले की आंख में तेजी प्रतिरूप विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है जो टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि का वर्णन है. फ्लोरिसेंट फोटोरिसेप्टर कोशिकाओं flipase की मध्यस्थता पुनर्संयोजन द्वारा उत्पन्न मोज़ेक क्लोन के साथ रेटिना पर, कॉर्निया निराकरण तकनीक के साथ imaged हैं. इस विधि रेटिना के शास्त्रीय ऊतकीय सेक्शनिंग पर कई प्रमुख फायदे हैं: यह उच्च throughput स्क्रीनिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और पीआर अस्तित्व और समारोह को विनियमित करने वाले कारकों की पहचान करने के लिए एक प्रभावी तरीका साबित कर दिया है. यह वही रहने anim में पीआर अध: पतन की गतिज विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैअल कई सप्ताहों में, वयस्क मक्खी में पीआर अस्तित्व या समारोह के लिए विशेष जीन के लिए आवश्यकता प्रदर्शित करने के लिए. इस विधि को भी इस तरह के तलीय सेल polarity की स्थापना प्रभावित है, जिसमें उन लोगों के रूप में विकास म्यूटेंट, में सेल स्वायत्तता मुद्दों को संबोधित करने के लिए उपयोगी है.

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The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि ड्रोसोफिला में रहने वाले मोज़ेक फोटोरिसेप्टर कोशिकाओं visualizing शामिल है. यह कई दिनों या हफ्तों के लिए रेटिना में व्यक्तिगत फोटोरिसेप्टर सेल भाग्य का पालन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस विधि रेटिना अध: पतन और neurodegenerative रोगों या फोटोरिसेप्टर सेल के विकास के अध्ययन के लिए आदर्श है.

मोजाइक सेक्स का लाइव इमेजिंग के लिए टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; फोटोरिसेप्टर कोशिकाओं

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

Live Imaging of Glial Cell Migration in the Drosophila Eye Imaginal Disc

ड्रोसोफिला आँखों Imaginal डिस्क में Glial सेल प्रवासन के इमेजिंग लाइव

Glial cells of both vertebrate and invertebrate organisms must migrate to final target regions in order to ensheath and support associated neurons.  While ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

की तैयारी ड्रोसोफिला लाइव इमेजिंग के लिए भ्रूण हैंगिंग ड्रॉप प्रोटोकॉल का उपयोग करना

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा Zebrafish भ्रूण मस्तिष्क की इमेजिंग लाइव

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

के लाइव इमेजिंग ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर भ्रूण Hemocyte migrations

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

विकास और वयस्क की तैयारी ड्रोसोफिला दिमाग और लाइव इमेजिंग के लिए Retinae

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Electron Spin Resonance Micro-imaging of Live Species for Oxygen Mapping

इलेक्ट्रॉन स्पिन आक्सीजन मानचित्रण के लिए लाइव प्रजाति की माइक्रो इमेजिंग अनुनाद

This protocol describes an electron spin resonance (ESR) micro-imaging method for three-dimensional mapping of oxygen levels in the immediate environment ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

व्यक्तिगत तैयारी ड्रोसोफिला अंडे मंडलों लाइव इमेजिंग के लिए

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

Live Imaging of GFP-labeled Proteins in Drosophila Oocytes

में प्रोटीन GFP लेबल की इमेजिंग लाइव<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; Oocytes

The  Drosophila oocyte has been established as a versatile system for investigating  fundamental questions such as cytoskeletal function, cell ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Apoptotic सेल क्लीयरेंस की इमेजिंग के दौरान जीते<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; Embryogenesis

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

वयस्क माउस Calvarial अस्थि मज्जा में hematopoietic स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के Vivo 4 आयामी ट्रैकिंग में

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...