Name: isolation of primary myofibroblasts from mouse and human colon tissue
Uploaded: 2013-10-12T19:00:00
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इस काम के जे के लिए स्वास्थ्य अनुदान 5KO8DK085136-02 के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया.

1. पेट के ऊतक प्राप्त माउस तर्क और अनुसंधान के उद्देश्यों का ब्यौरा, पशु प्रयोगों प्रदर्शन करने के लिए एक प्रोटोकॉल, प्रस्तुत और पशु अनुसंधान पर्यवेक्षण के हमारे संस्थागत कार्यालय ...

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	<li>Armaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+cell+targeting+by+TNF+as+a+common+pathogenic+principle+in+chronic+inflammatory+joint+and+intestinal+diseases.">Mesenchymal cell targeting by TNF as a common pathogenic principle in chronic inflammatory joint and intestinal diseases.</a> J. Exp. Med. 205, 331-337 (2008).</li><li>Powell, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+cells+important+in+health+and+disease.">Paracrine cells important in health and disease.</a> Am. J. Physiol. 277, C1-C9 (1999).</li><li>Yoo, J., Rodriguez Perez, C. E., Nie, W., Sinnett-Smith, J., Rozengurt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+kinase+D1+mediates+synergistic+MMP-3+expression+induced+by+TNF-alpha+and+bradykinin+in+human+colonic+myofibroblasts.">Protein kinase D1 mediates synergistic MMP-3 expression induced by TNF-alpha and bradykinin in human colonic myofibroblasts.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 413, 30-35 (2011).</li><li>Yoo, J., Chung, C., Slice, L., Sinnett-Smith, J., Rozengurt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+kinase+D+mediates+synergistic+expression+of+COX-2+induced+by+TNF-{alpha}+and+bradykinin+in+human+colonic+myofibroblasts.">Protein kinase D mediates synergistic expression of COX-2 induced by TNF-{alpha} and bradykinin in human colonic myofibroblasts.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 297, C1576-C1587 (2009).</li><li>Valentich, J. D., Popov, V., Saada, J. I., Powell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+characterization+of+an+intestinal+subepithelial+myofibroblast+cell+line.">Phenotypic characterization of an intestinal subepithelial myofibroblast cell line.</a> Am. J. Physiol. 272, C1513-C1524 (1997).</li><li>Rodriguez Perez, C. E., Nie, W., Sinnett-Smith, J., Rozengurt, E., Yoo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+potentiates+lysophosphatidic+acid-induced+COX-2+expression+via+PKD+in+human+colonic+myofibroblasts.">TNF-alpha potentiates lysophosphatidic acid-induced COX-2 expression via PKD in human colonic myofibroblasts.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 300, G637-G646 (2011).</li><li>Yoo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+induces+upregulation+of+EGFR+expression+and+signaling+in+human+colonic+myofibroblasts.">TNF-alpha induces upregulation of EGFR expression and signaling in human colonic myofibroblasts.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 302, G805-G814 (2012).</li><li>Mahida, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+human+colonic+subepithelial+myofibroblasts+express+extracellular+matrix+proteins+and+cyclooxygenase-1+and+-2.">Adult human colonic subepithelial myofibroblasts express extracellular matrix proteins and cyclooxygenase-1 and -2.</a> Am. J. Physiol. 273, G1341-G1348 (1997).</li><li>De Wever, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priming+and+potentiation+of+DNA+damage+response+by+fibronectin+in+human+colon+cancer+cells+and+tumor-derived+myofibroblasts.">Priming and potentiation of DNA damage response by fibronectin in human colon cancer cells and tumor-derived myofibroblasts.</a> Int. J. Oncol. 39, 393-400 (2011).</li><li>Edwards, R. A., Smock, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+arachidonate+release+and+PGE2+production+in+Gi+alpha2-deficient+intestinal+and+colonic+subepithelial+myofibroblasts.">Defective arachidonate release and PGE2 production in Gi alpha2-deficient intestinal and colonic subepithelial myofibroblasts.</a> Inflamm. Bowel Dis. 12, 153-165 (2006).</li><li>Hoang, B., Trinh, A., Birnbaumer, L., Edwards, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+MAPK-+and+PGE2-dependent+IL-11+production+in+Gialpha2-/-+colonic+myofibroblasts.">Decreased MAPK- and PGE2-dependent IL-11 production in Gialpha2-/- colonic myofibroblasts.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 292, G1511-G1519 (2007).</li><li>Li, Z. B., Kollias, H. D., Wagner, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myostatin+directly+regulates+skeletal+muscle+fibrosis.">Myostatin directly regulates skeletal muscle fibrosis.</a> J. Biol. Chem. 283, 19371-19378 (2008).</li><li>Saada, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subepithelial+myofibroblasts+are+novel+nonprofessional+APCs+in+the+human+colonic+mucosa.">Subepithelial myofibroblasts are novel nonprofessional APCs in the human colonic mucosa.</a> J. Immunol. 177, 5968-5979 (2006).</li><li>Lahar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+subepithelial+myofibroblasts+support+in+vitro+and+in+vivo+growth+of+human+small+intestinal+epithelium.">Intestinal subepithelial myofibroblasts support in vitro and in vivo growth of human small intestinal epithelium.</a> PLoS One. 6, e26898 (2011).</li></ol>

माउस या मानव बृहदान्त्र या तो उपयोग करते समय सामान्य तकनीक के समान है. इस तकनीक को भी छोटी आंत से myofibroblasts अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. 1 से myofibroblasts के अलगाव के लिए विशिष्ट विवरण. माउस और 2. मानव पेट क?...

जठरांत्र (सैनिक) पथ समारोह के नियमन mucosal परत और उसके अंतर्निहित mesenchyme के बीच जटिल, गतिशील बातचीत शामिल है. इन मुलाकातों सामान्य रूप से homeostasis को बनाए रखने के लिए की सेवा भी है लेकिन वैकृत शर्तों 1 के तहत रोग राज्यों के विकास के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. Myofibroblasts mucosal उत्थान, मरम्मत, और फाइब्रोसिस 2 शामिल है कि महत्वपूर्ण सैनिक पथ प्रक्रियाओं की एक संख्या को विनियमित करने के लिए सेल subpopulations आसपास के साथ एक पैराक्राइन फैशन में संवाद है कि उपकला परत को आधारस्थित स्थित stromal कोशिकाओं के एक subpopulation हैं. यह सीटू myofibroblasts में प्राथमिक की विशेषताओं के कई शेयरों क्योंकि 18Co सेल लाइन व्यापक रूप से myofibroblast समारोह का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है कि एक मानव colonic myofibroblast सेल लाइन का एक उदाहरण है. ये प्रोटीन एक चिकनी पेशी actin की अभिव्यक्ति (α-SMA) और vimentin, साथ ही एक नंबर की अभिव्यक्ति में शामिलऐसे epidermal वृद्धि कारक रिसेप्टर, या lysophosphatidic एसिड 3,4 के लिए रिसेप्टर्स के रूप में कोशिका की सतह रिसेप्टर्स की. क्योंकि इन साझा ultrastructural विशेषताओं, साथ ही जीवविज्ञान कार्य 5 में समानता की, 18Co सेल लाइन सूजन आंत्र रोग या कोलोरेक्टल कैंसर 3,6 के रूप में कई रोग राज्यों के संदर्भ में myofibroblast समारोह का अध्ययन करने के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, एक सेल लाइन का उपयोग करते समय निहित सीमाओं और चिंताएं हैं. ये विकास दर और अन्य सेल आबादी के साथ बातचीत सहित सेल के phenotype और जीवविज्ञान कार्य, फेरबदल, प्राथमिक कोशिकाओं से कोशिका लाइनों को अलग करता है कि समय के साथ genotypic अस्थिरता शामिल हैं. सेल लाइनों भी इसके उपयोग के लिए एक प्रमुख सीमा है जो सैनिक microenvironment (उपकला, stromal, और संवहनी घटक), के सामान्य घटकों की कमी है. इसलिए, प्रयोगात्मक सेल लाइन अनुसंधान से निष्कर्ष निकाला आरआई को कम करने के लिए आगे सत्यापन की आवश्यकताअशुद्ध अर्थ के एस. प्राथमिक myofibroblasts एक सेल लाइन 7 में पहचान की प्रयोगात्मक निष्कर्षों की पुष्टि करने के लिए मानव और माउस पेट के ऊतकों से प्राप्त किया जा सकता है. विधि मूल रूप से महीदा, एट अल. 8 द्वारा वर्णित है, और हमारे प्रोटोकॉल माउस और मानव पेट के 9 से प्राथमिक myofibroblasts अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि बहुत अच्छी तरह से वर्णित तकनीकों में से एक है. Colonic रोग के किसी भी माउस मॉडल के लिए, इस तकनीक वे पड़ोसी कोशिकाओं के साथ बातचीत कैसे अध्ययन या सामान्य या नैदानिक ​​सैनिक 10,11 प्रक्रियाओं दोनों में योगदान के लिए प्राथमिक myofibroblasts अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस तकनीक myofibroblasts चिकित्सा, फाइब्रोसिस, और कोलोरेक्टल adenomas और कार्सिनोमा के विकास mucosal के लिए योगदान कैसे अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. प्राथमिक myofibroblasts भी सौम्य (सूजन आंत्र रोग, strictures, विपुटीप्रदाह) या घातक ग के लिए आपरेशन के समय में resected किया गया है कि मानव पेट के ऊतकों से प्राप्त किया जा सकता हैonditions. मानव और माउस पेट के ऊतकों से अलग प्राथमिक कोशिकाओं सेल संस्कृति में बड़े और मार्ग की एक सीमित संख्या में उपयोग किया जा सकता है.

Table of specific reagents and equipment:
<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <th>Name of the reagent</th>
 <th>Company</th>
 <th>Catalogue number</th>
 <th>Comments (optional)</th>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dispase I</td>
 <td>Invitrogen/GIBCO</td>
 <td>#17105-041</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase D</td>
 <td>Roche</td>
 <td>#1 088 858</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>4 in, 16 G Popper blunt-end needle</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>#14-825-16K</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolation of primary myofibroblasts from mouse and human colon tissue

myofibroblast कई सैनिक कार्यों में अपनी महत्वपूर्ण भूमिका के लिए काफी ध्यान प्राप्त किया गया है कि जठरांत्र (सैनिक) पथ का एक stromal सेल है. कई myofibroblast सेल लाइनों विट्रो में इन कोशिकाओं का अध्ययन करने के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, प्रयोगात्मक सेल संस्कृति की स्थिति से अवगत कराया एक सेल लाइन से शोध के परिणामों काम की पीढ़ी न्यूनकारी प्रकृति के कारण अंतर्निहित सीमाएँ होती हैं. प्राथमिक myofibroblasts का प्रयोग एक सेल लाइन में पहचान की प्रयोगात्मक निष्कर्षों की पुष्टि के मामले में एक महान लाभ प्रदान करता है. एक पशु मॉडल से प्राथमिक myofibroblasts के अलगाव और अधिक बारीकी से रोग राज्य अध्ययन किया जा रहा है कि नकल की शर्तों के तहत myofibroblasts के अध्ययन के लिए अनुमति देता है. कोशिकाओं अंतर्निहित रोग के साथ रोगियों से सीधे आने के बाद से मानव पेट के ऊतक से प्राथमिक myofibroblasts के अलगाव, यकीनन सबसे प्रासंगिक प्रयोगात्मक डेटा प्रदान करता है. हम यू हो सकता है कि एक अच्छी तरह से स्थापित तकनीक का वर्णनमाउस और मानव पेट के ऊतक दोनों से प्राथमिक myofibroblasts अलग करने के लिए tilized. ये अलग कक्षों subepithelial आंतों myofibroblasts साथ संगत अल्फा चिकनी पेशी actin और vimentin पॉजिटिव, और desmin नकारात्मक होने का लक्षण वर्णन किया गया है. प्राथमिक myofibroblast कोशिकाओं सेल संस्कृति में बड़े और मार्ग की एक सीमित संख्या में प्रायोगिक उद्देश्यों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

एक बार अलग, प्राथमिक मानव myofibroblasts सेल संस्कृति में विकसित और (बीतने 4 तक) मार्ग की एक सीमित संख्या में इस्तेमाल किया जा सकता है. इन कोशिकाओं, आंतों subepithelial myofibroblasts 5,7 के साथ लगातार एक चिकनी पेशी actin और vimentin सकारात...

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Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

myofibroblast सामान्य और बीमारी दोनों राज्यों में महत्वपूर्ण शारीरिक प्रक्रियाओं को नियंत्रित करता है कि जठरांत्र संबंधी मार्ग के एक प्रभावशाली stromal सेल है. हम माउस और इन विट्रो प्रयोगों के लिए उपयोग किया जा सकता है, जो मानव पेट के ऊतक, दोनों से प्राथमिक myofibroblasts के अलगाव के लिए अनुमति देता है एक तकनीक का वर्णन.

माउस और मानव आंतों के ऊतकों से प्राथमिक myofibroblasts का अलगाव

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Research

JoVE Journal

Biology

Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

मानव शवपरीक्षा मस्तिष्क के ऊतकों से neuronal नाभिक अलगाव

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

प्राथमिक ट्यूमर से प्रतिरक्षा कोशिकाओं का अलगाव

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

प्राथमिक मानव तंतुकोशिका संस्कृति से भोले वयस्क स्टेम सेल अलगाव

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

माउस प्राथमिक अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

माउस अग्न्याशय से शाही सेना अलगाव: एक ribonuclease युक्त ऊतक

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

अलगाव और संवर्धित कोशिकाओं और माउस के ऊतकों से माइटोकॉन्ड्रिया के कार्यात्मक विश्लेषण

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Isolation of Myofibroblasts from Mouse and Human Esophagus

माउस और मानव घुटकी से myofibroblasts का अलगाव

Murine and human esophageal myofibroblasts are generated via enzymatic digestion. Neonate (8-12 day old) murine esophagus is harvested, minced, washed, ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

अलगाव और माउस महाधमनी endothelial कोशिकाओं के प्राथमिक संस्कृति

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

नवजात और वयस्क माउस त्वचा से प्राथमिक माउस केराटिनोसाइट्स के अलगाव और संस्कृति

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Isolation and Characterization of Adult Cardiac Fibroblasts and Myofibroblasts

एडल्ट कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट और माओफीब्रोब्लास्ट का अलगाव और लक्षण वर्णन

Cardiac fibrosis in response to injury is a physiological response to wound healing. Efforts have been made to study and target fibroblast subtypes that ...