Name: isolation of primary myofibroblasts from mouse and human colon tissue
Uploaded: 2013-10-12T19:00:00
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1。結腸組織を得るマウス研究の根拠と目的を詳細に動物実験を行うためのプロトコルでは、提出され動物実験的監督の私たちの事業オフィスによって承認された。 <ol><li>頸椎脱臼に続いて吸入イソフルランでマウスを安楽死させる。 </li><li>腹側正中切開を行い、離れて小腸を撤回し、コロンを識別します。横方向に膀胱と子宮（存在する場合）を撤...

<ol>
	<li>Armaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+cell+targeting+by+TNF+as+a+common+pathogenic+principle+in+chronic+inflammatory+joint+and+intestinal+diseases.">Mesenchymal cell targeting by TNF as a common pathogenic principle in chronic inflammatory joint and intestinal diseases.</a> J. Exp. Med. 205, 331-337 (2008).</li><li>Powell, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+cells+important+in+health+and+disease.">Paracrine cells important in health and disease.</a> Am. J. Physiol. 277, C1-C9 (1999).</li><li>Yoo, J., Rodriguez Perez, C. E., Nie, W., Sinnett-Smith, J., Rozengurt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+kinase+D1+mediates+synergistic+MMP-3+expression+induced+by+TNF-alpha+and+bradykinin+in+human+colonic+myofibroblasts.">Protein kinase D1 mediates synergistic MMP-3 expression induced by TNF-alpha and bradykinin in human colonic myofibroblasts.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 413, 30-35 (2011).</li><li>Yoo, J., Chung, C., Slice, L., Sinnett-Smith, J., Rozengurt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+kinase+D+mediates+synergistic+expression+of+COX-2+induced+by+TNF-{alpha}+and+bradykinin+in+human+colonic+myofibroblasts.">Protein kinase D mediates synergistic expression of COX-2 induced by TNF-{alpha} and bradykinin in human colonic myofibroblasts.</a> Am. J. Physiol. 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Liver Physiol. 300, G637-G646 (2011).</li><li>Yoo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+induces+upregulation+of+EGFR+expression+and+signaling+in+human+colonic+myofibroblasts.">TNF-alpha induces upregulation of EGFR expression and signaling in human colonic myofibroblasts.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 302, G805-G814 (2012).</li><li>Mahida, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+human+colonic+subepithelial+myofibroblasts+express+extracellular+matrix+proteins+and+cyclooxygenase-1+and+-2.">Adult human colonic subepithelial myofibroblasts express extracellular matrix proteins and cyclooxygenase-1 and -2.</a> Am. J. Physiol. 273, G1341-G1348 (1997).</li><li>De Wever, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priming+and+potentiation+of+DNA+damage+response+by+fibronectin+in+human+colon+cancer+cells+and+tumor-derived+myofibroblasts.">Priming and potentiation of DNA damage response by fibronectin in human colon cancer cells and tumor-derived myofibroblasts.</a> Int. J. Oncol. 39, 393-400 (2011).</li><li>Edwards, R. A., Smock, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+arachidonate+release+and+PGE2+production+in+Gi+alpha2-deficient+intestinal+and+colonic+subepithelial+myofibroblasts.">Defective arachidonate release and PGE2 production in Gi alpha2-deficient intestinal and colonic subepithelial myofibroblasts.</a> Inflamm. Bowel Dis. 12, 153-165 (2006).</li><li>Hoang, B., Trinh, A., Birnbaumer, L., Edwards, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+MAPK-+and+PGE2-dependent+IL-11+production+in+Gialpha2-/-+colonic+myofibroblasts.">Decreased MAPK- and PGE2-dependent IL-11 production in Gialpha2-/- colonic myofibroblasts.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 292, G1511-G1519 (2007).</li><li>Li, Z. B., Kollias, H. D., Wagner, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myostatin+directly+regulates+skeletal+muscle+fibrosis.">Myostatin directly regulates skeletal muscle fibrosis.</a> J. Biol. Chem. 283, 19371-19378 (2008).</li><li>Saada, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subepithelial+myofibroblasts+are+novel+nonprofessional+APCs+in+the+human+colonic+mucosa.">Subepithelial myofibroblasts are novel nonprofessional APCs in the human colonic mucosa.</a> J. Immunol. 177, 5968-5979 (2006).</li><li>Lahar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+subepithelial+myofibroblasts+support+in+vitro+and+in+vivo+growth+of+human+small+intestinal+epithelium.">Intestinal subepithelial myofibroblasts support in vitro and in vivo growth of human small intestinal epithelium.</a> PLoS One. 6, e26898 (2011).</li></ol>

マウスまたはヒトの結腸のいずれかを使用するときの一般的な手法は同様である。この技術はまた、小腸からの筋線維芽細胞を単離するために使用することができる。 1からの筋線維芽細胞を単離するための具体的な詳細。マウスと2。ヒトの大腸を以下に説明します。 1。マウス結腸マウス結腸の灌注は、結腸の一端に16 Gポッパー平滑末端針4を取り付...

胃腸（GI）管の機能の調節は、粘膜層とその下にある間葉との間の複雑で動的な相互作用を伴う。これらの相互作用は、通常は恒常性を維持するのに役立つだけでなく、病的条件1での疾患状態の発症につながる可能性がある。筋線維芽細胞は、粘膜の再生、修復、および線維症2を含む重大な胃腸管プロセスの数を調節する細胞亜集団を包囲してパラクリン様式で通信する上皮層への直下に位置する間質細胞の亜集団である。 18 CO細胞株は、それがインサイチュ筋線維芽細胞の一次の特徴の多くを共有しているため、広く筋線維芽細胞の機能を研究するために使用されているヒト結腸筋線維芽細胞株の一例である。これらは、タンパク質-平滑筋アクチン（α-SMA）の発現およびビメンチン、並びに多数の発現を含む例えば、上皮成長因子受容体、又はリゾホスファチジン酸、3,4に対する受容体などの細胞表面受容体。なぜならこれらの共有超微細構造特性、ならびに生物学的機能5の類似性、18 CO細胞株は、炎症性腸疾患または結腸直腸癌3,6のような多くの疾患状態のコンテキストで筋線維芽細胞の機能を研究するために広く使用されている。しかし、細胞株を用いて固有の限界や懸念がある。これらは他の細胞集団との成長率との相互作用など、細胞の表現型および生物学的機能を変化させる、一次細胞から細胞株を区別し、経時的遺伝子型不安定性が含まれる。細胞株もまた、その使用に対する主な制限である消化管の微小環境（上皮、間質、および血管成分）を、通常の構成要素を欠いている。したがって、実験的な細胞株の研究から引き出された結論は、里を減少させるためにさらなる検証が必要で誤解のSK。 一次筋線維芽細胞は、細胞株7において同定実験結果を確認するために、ヒトおよびマウスの結腸組織から得ることができる。この方法は、もともとMahida ら 8によって記述され、我々のプロトコルは、マウスおよびヒト結腸9から一次筋線維芽細胞を単離するために用いることができる多くのよく説明される技術の一つであるした。結腸疾患の任意のマウスモデルについては、この技術は、GI 10,11を処理し、それらが隣接細胞とどのように対話するかを研究するために、一次筋線維芽細胞を単離するか、正常または病的両方に寄与するために使用することができる。この技術は、筋線維芽細胞は、治癒、線維症、および結腸直腸腺腫および癌腫の発生を粘膜に寄与する方法を研究するために使用することができる。一次筋線維芽細胞はまた、良性（炎症性腸疾患、狭窄、憩室炎）または悪性のc運転時に切除されたヒト結腸組織から得ることができるonditions。ヒトおよびマウスの結腸組織から単離した初代細胞は、細胞培養で増殖させ、継代の数が限られにわたって利用することができる。

Table of specific reagents and equipment:
<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <th>Name of the reagent</th>
 <th>Company</th>
 <th>Catalogue number</th>
 <th>Comments (optional)</th>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dispase I</td>
 <td>Invitrogen/GIBCO</td>
 <td>#17105-041</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase D</td>
 <td>Roche</td>
 <td>#1 088 858</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>4 in, 16 G Popper blunt-end needle</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>#14-825-16K</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolation of primary myofibroblasts from mouse and human colon tissue

筋線維芽細胞は、多くのGI機能におけるその重要な役割のためにかなりの注目を集めている胃腸（GI）管の間質細胞である。いくつかの筋線維芽細胞株は、インビトロでこれらの細胞を研究するために市販されているが、実験的な細胞培養条件に曝露された細胞株からの研究結果は、作業の過度に還元主義的性質に起因する固有の限界を有する。一次筋線維芽細胞の使用は、細胞株で特定された実験結果を確認するという点で大きな利点を提供しています。動物モデルからの一次筋線維芽細胞の単離は、より厳密に検討されて疾患状態を模倣する条件下での筋線維芽細胞の研究を可能にする。細胞は基礎疾患を持つ患者から直接来ているので、ヒト結腸組織からの一次筋線維芽細胞の単離は、間違いなく、最も関連性の高い実験データを提供しています。我々はUであり得る、十分に確立された技術を説明マウスおよびヒト結腸組織の両方からの一次筋線維芽細胞を分離するためにtilized。これらの単離された細胞は、上皮下腸の筋線維芽細胞と一致してα-平滑筋アクチンとビメンチン陽性、およびデスミン陰性であることが特徴づけられている。一次筋線維芽細胞は、細胞培養で増殖させ、継代の数が限られにわたって実験目的のために使用することができる。

一旦単離される、初代ヒト筋線維芽細胞は、細胞培養で増殖させ（継代4まで）の通路の限られた数の上で使用することができる。これらの細胞は腸管上皮下筋線維芽細胞5,7と一致して、平滑筋アクチンとビメンチン陽性であると特徴づけ、およびデスミン陰性（ 図1A）されています。それらはまた、特徴的な星状形態（ 図1B）を有する。一次筋線維芽細胞は...

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Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

筋線維芽細胞は、正常および疾患状態の両方において重要な生理学的プロセスを調節、胃腸管の有力な間質細胞である。我々は、マウスおよびインビトロ実験のために利用することができるヒト結腸組織の両方からの一次筋線維芽細胞の単離を可能にする技術が記載されている。

マウスおよびヒト結腸組織からの一次筋線維芽細胞の分離

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Research

JoVE Journal

Biology

Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

人間の死後の脳組織から神経細胞核の単離

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

原発腫瘍から免疫細胞の分離

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

初代ヒト線維芽細胞培養からナイーブ成人幹細胞の分離

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

マウスプライマリ膵臓腺房細胞の単離と培養

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

マウス膵臓からのRNAの単離：リボヌクレアーゼが豊富な組織

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

培養細胞およびマウス組織から単離とミトコンドリアの機能解析

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Isolation of Myofibroblasts from Mouse and Human Esophagus

マウスおよびヒト食道から筋線維芽細胞の単離

Murine and human esophageal myofibroblasts are generated via enzymatic digestion. Neonate (8-12 day old) murine esophagus is harvested, minced, washed, ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

マウス大動脈内皮細胞の単離および初代培養

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

新生児および成人マウス皮膚由来の初代マウスケラチノサイトの単離および培養

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Isolation and Characterization of Adult Cardiac Fibroblasts and Myofibroblasts

成人心臓線維芽細胞と筋線維芽細胞の分離と特徴付け

Cardiac fibrosis in response to injury is a physiological response to wound healing. Efforts have been made to study and target fibroblast subtypes that ...