Name: feeding of ticks on animals for transmission and xenodiagnosis in lyme disease research
Uploaded: 2013-08-31T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Николь Hasenkampf и Аманда Tardo за технической поддержкой. Мы также благодарим доктора. Линден Ху и Адриана Marques для рекомендации удерживающего устройства LeFlap, и д-р Лиза Герн для обучения по методу капиллярного кормления. Эта работа была поддержана NIH / NCRR Грант 8 P20 GM103458-09 (КОЗ) и Национального центра научных исследований ресурсов и Управления научно-исследовательских программ в области инфраструктуры (ORIP) из Национального института здоровья в виде субсидий P51OD011104/P51RR000164.

Экспериментальная схема клещей прививки и кормления по животных для исследования болезни Лайма изображен на рисунке 1. 1. Бактериологические нимфальных иксодовых клещей с В. Burgdorferi Использование капиллярная трубка вскармливания При вы?...

Для того чтобы получить клещей этой гавани B. Burgdorferi для последующих исследований, клещи могут быть: (1) подается на зараженных мышей в личиночной стадии; (2) погружается в B. Burgdorferi культуры на обоих личиночной или нимф этапе 48; (3) микроинъекции с В. Burgdorferi 47; или (4) к?...

В 2011 году болезнь Лайма была шестая наиболее распространенным Национально болезнью, подлежащей регистрации в Северной Америке ( <a href="http://www.cdc.gov/lyme/stats/index.html" target="_blank">http://www.cdc.gov/lyme/stats/index.html</a> ). Б. Burgdorferi является универсальным микроб, как генетически и антигенно (отзывы в 1). Его генетический конституция включает в себя большой (&gt; 900 Kb) хромосому и до 21 плазмид (12 линейных, 9 круглых), с содержанием плазмиды различной среди изолятов. Многое предстоит узнал об этом спирохета, как более 90% плазмиды открытых рамок считывания не имеют отношения к любым известным бактериальных последовательностей 2,3. Б. Burgdorferi представляет широкий спектр антигенов в качестве потенциальных мишеней иммунитета хозяина. Тем не менее, лечить инфекции часто сохраняется. Взаимодействие спирохеты с клеща среды и позвоночных среде принимающей требует адаптации Б. Burgdorferi всей инфекционного процесса. Несколько плазмиды кодировкегены, как известно, дифференциально экспрессируются в ответ на изменения температуры, рН, плотности клеток и даже стадии жизненного цикла клещ 4-8. Изучение В. Burgdorferi адаптации на протяжении всей своей энзоотический цикл, и реакции хозяина после инфицирования по естественным путем полагается на способность кормить клещей на соответствующих животных моделях. Такие исследования будут выполнены с техническими проблемами генерации клещей, которые укрывают B. Burgdorferi, а также обеспечение эффективной передачи и / или подачу клещей на модели хозяина. Кроме того, локализация и сбор инфицированных клещей имеет важное значение. Среди моделей, используемых являются мыши и приматов, каждый из которых служит в качестве ценного инструмента в исследованиях болезни Лайма. Как и в белой ногой мыши, который является естественным резервуаром для B. Burgdorferi, лаборатория мыши очень восприимчивы хост, который поддерживает постоянное заражение B. Burgdorferi 9. Фолщие инфекции болезни восприимчивы мышей, таких как штамма С3Н, спирохеты распространять на многих тканях, включая кожу, мочевого пузыря, мышц, суставов и сердца. Воспалительные реакции на инфекции приводят к больного сердца и совместной ткани. В то время как спирохеты упорствовать в этом хозяина и остаются инфекционные, воспалительные поражения может стать прерывистым, мало чем отличается от процесса в организме человека. Модель мыши, таким образом, при условии, много информации о В. Burgdorferi-индуцированной патологии, в том числе артрит и кардитом и иммунного ответа 10-12. С точки зрения патогена, определенные гены дифференциально экспрессируются во время инфекции у млекопитающих были охарактеризованы, как и некоторые необходимые для передачи от клеща вектора 13-21. Хотя несколько видов животных были использованы для изучения болезнь Лайма 22, макак-резусов наиболее близко имитируют полиорганной характер болезни человека 23. В отличие от другихживотные модели, широта проявлений болезни, таких как мигрирующая эритема, кардит, артрит, и невропатии из периферической и центральной нервной систем наблюдаются в макак. У мышей, являются природным резервуаром для B. Burgdorferi, болезнь зависит от линии мышей и возрасте 24 лет, в то время как ранние и поздние-вкрапленных проявления встречаются редко 9. Кроме того, другие грызуны, зайцеобразных, и клыки все не в проявляют неврологическое заболевание из B. Burgdorferi инфекции 25. Важно отметить, что макаки проявлять признаки, которые характерны для всех трех фаз болезни Лайма, а именно, в начале-локализованы, раннего распространяться и на поздней стадии болезни Лайма 26-28. Мигрирующая эритема (ЭМ), как полагают, происходят в 70-80% случаев заболевания людей 29, а также рассматривается в макак-резус 28,30. После инфицирования спирохеты распространять с месте прививки к нескольким органам. Спирохетозный ДНК была обнаружена в скелетных муscles, сердце, мочевой пузырь, периферических нервов и сплетений, а также в центральной нервной системе (головного мозга, мозжечка и ствола мозга, спинного мозга и твердой мозговой оболочки) 31. Отметьте кормления на мышах была использована нами и другими исследовательскими группами для распространения клещей колоний, в водохранилище компетенции изучает 32-36 и в исследованиях В. Burgdorferi патогенез 37-40. Этот метод также используется для ксенодиагностика и испытания эффективности вакцины у мышей 41-44. Мы накормили иксодовых клещей на приматов для разработки модели 28, исследование эффективности вакцины 45, а для ксенодиагностика в оценке настойчивости лечения пост-антибиотика 46. Клещи этой гавани B. Burgdorferi можно поддерживать в естественном энзоотический цикл путем подачи личинок на инфицированных мышей и использование нимф для исследований, а спирохеты передаются через этапах жизни. В этом докладе, Мы поручаем о том, как генерировать клещей, инфицированных дикого типа или мутантного B. Burgdorferi, используя капиллярную трубку грудью. Это также может быть достигнуто путем микроинъекции 47 и 48 путем погружения. Цель искусственного введения B. Burgdorferi в клещи могут быть для изучения штаммов мутантных чьи трансмиссивности неизвестно, генерировать группу клещей с высоким уровнем инфекции, а также уменьшить вероятность возникновения ошибки на сохранении чистой и иным неинфицированных колонию галочку. Кроме того, мы демонстрируем галочку кормление на мышах и приматах, с тем чтобы обеспечить сдерживание и восстановление изобилует клещей. Использование клещевого кормления имеет важное значение для будущих исследований иммунного ответа на B. Burgdorferi инфекция, потенциальная эффективность вакцины Лайма, и ксенодиагностика для обнаружения оккультных инфекций.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BSK-H</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B-8291</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ketamine HCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Tangle Trap coating Paste</td>
			<td>Ladd research</td>
			<td>T-131</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>SkinPrep</td>
			<td>Allegro Medical Supplies</td>
			<td>177364</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>LeFlap, 3" x 3"</td>
			<td>Monarch Labs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hypafix tape</td>
			<td>Allegro Medical Supplies</td>
			<td>191523</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>SkinBond</td>
			<td>Allegro Medical Supplies</td>
			<td>554536</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>UniSolve</td>
			<td>Allegro Medical Supplies</td>
			<td>176640</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Biatane Foam, adhesive 4"x4"</td>
			<td>Coloplast</td>
			<td>3420</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DuoDerm CGF Dressing - 4" x 4", (3/4)" adhesive border </td>
			<td>Convatec</td>
			<td>187971 </td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Nonhuman primate jackets with flexible 2" back panels; add drawstrings at top and bottom</td>
			<td>Lomir Biomedical Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT </td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pipet puller</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>Model 700C</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dark field microscope</td>
			<td>Leitz Wetzlar</td>
			<td>Dialux</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Zoom 2000</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Mouse caging</td>
			<td>Allentown caging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

feeding of ticks on animals for transmission and xenodiagnosis in lyme disease research

Передача этиологического агента болезни Лайма, Borrelia Burgdorferi, происходит путем присоединения и кормления крови видов иксодовых клещей на хостах млекопитающих. В природе этот зоонозных бактериальный возбудитель может использовать различные резервуарных хозяев, но белый ногой мышь (Реготузсиз leucopus) является основным резервуаром для личинок и нимф клещей в Северной Америке. Человек является случайным хозяином наиболее часто инфицированные B. Burgdorferi через укус клещей в нимфальной этапе. Б. Burgdorferi адаптируется к его хозяев на протяжении всего энзоотический цикл, поэтому возможность исследовать функции этих спирохеты и их влияние на хозяев млекопитающих требует использования клеща кормления. Кроме того, методика ксенодиагностика (используя естественный вектор для обнаружения и восстановления инфекционного агента) был полезным при изучении загадочного инфекции. Для того чтобы получить нимф клещей, которые укрывают B. Burgdorferi,клещи питаются живыми спирохеты в культуре через капиллярные трубки. Две модели на животных, мышей и приматов, наиболее часто используются для исследований болезни Лайма, связанных галочку кормление. Мы демонстрируем методы, с помощью которых эти клещи могут быть поданы на, и оправился от животных для любой инфекции или ксенодиагностика.

После завершения капиллярной кормления, клещи, как правило, отдыхали при 23 ° С в течение 2-3 недель, прежде чем они поступают на животных для передачи. Используя технику капиллярной грудью, мы обнаружили, что более 90% от подаваемого клещей гавань B. Burgdorferi. Процент положительных клещей...

Watch this Scientific Journal Video about Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research at JoVE.com

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

Болезнь Лайма является наиболее часто сообщил трансмиссивных заболеваний в Северной Америке. Возбудитель, Borrelia Burgdorferi является спирохета бактерия передается иксодовые клещи. Передача и обнаружение инфекции в животных моделях оптимизирована с использованием клеща питания, который мы описываем здесь.

Кормление клещей на животных для передачи и ксенодиагностика в Лайма исследования заболеваний

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Biocontained Carcass Composting for Control of Infectious Disease Outbreak in Livestock

Biocontained Компостирование Carcass по контролю за инфекционными вспышки заболевания в животноводстве

Intensive livestock production systems are particularly vulnerable to natural or intentional (bioterrorist) infectious disease outbreaks. Large numbers of ...

RNA Interference in Ticks

РНК-интерференция в клещи

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors ...

Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut

Методы для быстрой передачи и локализации патогенов Болезнь Лайма В Tick Gut

Lyme disease is caused by infection with the spirochete pathogen Borrelia burgdorferi, which is maintained in nature by a tick-rodent infection cycle 1.  ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Слюна, слюнные железы, и гемолимфы Коллекция от иксодовых клещей Scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Swab Sampling Method for the Detection of Human Norovirus on Surfaces

Метод тампон Отбор проб для обнаружения человека норовирус на поверхностях

Human noroviruses are a leading cause of epidemic and sporadic gastroenteritis worldwide. Because most infections are either spread directly via the ...

Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm

Протоколы для исследования распределения Хоста-ткань, Transmission-режим, и эффекта на хост приспособленности Densovirus в хлопковой совке

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Оценка цитотоксических и иммуномодулирующих эффектов веществ в легкое человека точности cut ломтики

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

Сбор и обработка лимфатических узлов от крупных животных для анализа РНК: подготовка исследований транскриптомики Лимфоузел крупных видов животных

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...

Sexual Transmission of American Trypanosomes from Males and Females to Naive Mates

Половым путем американских трипаносом в наивный товарищей от мужчин и женщин

American trypanosomiasis is transmitted to humans by triatomine bugs through the ingestion of contaminated food, by blood transfusions or accidently in ...

Highly Efficient Transfection of Primary Macrophages with In Vitro Transcribed mRNA

Высокоэффективная трансфекция первичных макрофагов с помощью In Vitro транскрибированная мРНК

Macrophages are phagocytic cells specialized in detecting molecules of non-self origin. To this end, they are equipped with a large array of pattern ...