Name: a microfluidic chip for the versatile chemical analysis of single cells
Uploaded: 2013-10-15T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells at JoVE.com

लेखकों कृतज्ञता पांडुलिपि, कस्टम निर्मित दबाव नियंत्रण प्रणाली के निर्माण के लिए सी. Bärtschi और एच. बेंज के सबूत पढ़ने के लिए टॉम रॉबिन्सन को स्वीकार करते हैं. हम यह भी साफ कमरे सुविधा पहले और दोनों ETH ज्यूरिख में प्रकाश माइक्रोस्कोपी सेंटर (एलएमसी) के उपयोग को स्वीकार करना होगा. काम 7 फ्रेमवर्क कार्यक्रम (ईआरसी अनुदान शुरू, परियोजना नहीं. 203428, nμLIPIDs) के तहत मर्क Serono और यूरोपीय अनुसंधान परिषद (ईआरसी) द्वारा वित्त पोषित किया गया.

1. SU-8 मास्टर निर्माण निम्नलिखित प्रोटोकॉल के साथ, लेकिन अलग मुखौटा पैटर्न के साथ (schematics और आयाम देखें चित्र 2 के लिए, fluidic और नियंत्रण) चैनलों के लिए दोनों मास्टर molds तैयार करें. प्रक्रिया चित...

<ol>
	<li>Walling, M. A., Shepard, J. R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+heterogeneity+and+live+cell+arrays.">Cellular heterogeneity and live cell arrays.</a> Chem. Soc. Rev. 40 (7), 4049-4076 (2011).</li><li>Schmid, A., Kortmann, H., Dittrich, P. S., Blank, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+biological+single+cell+analysis.">Chemical and biological single cell analysis.</a> Curr. Opin. Biotechnol. 20 (1), 12-20 (2010).</li><li>Lecault, V., White, A. K., Singhal, A., Hansen, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+single+cell+analysis:+from+promise+to+practice.">Microfluidic single cell analysis: from promise to practice.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 16 (3-4), 381-390 (2012).</li><li>Faley, S., Seale, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+platform+for+real-time+signaling+analysis+of+multiple+single+T+cells+in+parallel.">Microfluidic platform for real-time signaling analysis of multiple single T cells in parallel.</a> Lab Chip. 8 (10), 1700-1712 (2008).</li><li>Huang, B., Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+low-copy+number+proteins+in+a+single+cell.">Counting low-copy number proteins in a single cell.</a> Science. 315 (5808), 81-84 (2007).</li><li>Di Carlo, D., Aghdam, N., Lee, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+enzyme+concentrations,+kinetics,+and+inhibition+analysis+using+high-density+hydrodynamic+cell+isolation+arrays.">Single-cell enzyme concentrations, kinetics, and inhibition analysis using high-density hydrodynamic cell isolation arrays.</a> Anal. Chem. 78 (15), 4925-4930 (2006).</li><li>Cecala, C., Rubakhin, S. S., Mitchell, J. W., Gillette, M. U., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hyphenated+optical+trap+capillary+electrophoresis+laser+induced+native+fluorescence+system+for+single-cell+chemical+analysis.">A hyphenated optical trap capillary electrophoresis laser induced native fluorescence system for single-cell chemical analysis.</a> Analyst. 137 (13), 2965-2972 (2012).</li><li>Eyer, K., Kuhn, P., Hanke, C., Dittrich, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microchamber+array+for+single+cell+isolation+and+analysis+of+intracellular+biomolecules.">A microchamber array for single cell isolation and analysis of intracellular biomolecules.</a> Lab Chip. 12 (4), 765-772 (2012).</li><li>Agresti, J. J., Antipov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh-throughput+screening+in+drop-based+microfluidics+for+directed+evolution.">Ultrahigh-throughput screening in drop-based microfluidics for directed evolution.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (9), 4004-4009 (2010).</li><li>Ma, C., Fan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+microchip+for+evaluation+of+single+immune+cells+reveals+high+functional+heterogeneity+in+phenotypically+similar+T+cells.">A clinical microchip for evaluation of single immune cells reveals high functional heterogeneity in phenotypically similar T cells.</a> Nat. Methods. 17 (6), 738-743 (2011).</li><li>Shi, Q., Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+proteomic+chip+for+profiling+intracellular+signaling+pathways+in+single+tumor+cells.">Single-cell proteomic chip for profiling intracellular signaling pathways in single tumor cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109 (2), 419-424 (2012).</li><li>Powell, A. A., Talasaz, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+profiling+of+circulating+tumor+cells:+transcriptional+heterogeneity+and+diversity+from+breast+cancer+cell+lines.">Single cell profiling of circulating tumor cells: transcriptional heterogeneity and diversity from breast cancer cell lines.</a> PLoS ONE. 7 (5), e33788 (2012).</li><li>Martin-Belmonte, F., Perez-Moreno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell+polarity,+stem+cells+and+cancer.">Epithelial cell polarity, stem cells and cancer.</a> Nature. 12 (1), 23-38 (2012).</li><li>Unger, M. A., Chou, H. P., Thorsen, T., Scherer, A., Quake, S. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+large-scale+integration.">Microfluidic large-scale integration.</a> Science. 298 (5593), 580-584 (2002).</li><li>Gao, Y., Majumdar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+versatile+valve-enabled+microfluidic+cell+co-culture+platform+and+demonstration+of+its+applications+to+neurobiology+and+cancer+biology.">A versatile valve-enabled microfluidic cell co-culture platform and demonstration of its applications to neurobiology and cancer biology.</a> Biomed. Microdevices. 13 (3), 539-548 (2011).</li><li>White, A. K., VanInsberghe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+microfluidic+single-cell+RT-qPCR.">High-throughput microfluidic single-cell RT-qPCR.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108 (34), 13999-14004 (2011).</li><li>Schwanh&#228;usser, B., Busse, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+quantification+of+mammalian+gene+expression+control.">Global quantification of mammalian gene expression control.</a> Nature. 473 (7437), 337-342 (2011).</li><li>Kortmann, H., Kurth, F., Blank, L. M., Dittrich, P. S., Schmid, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+real+time+analysis+of+protein+secretion+from+single+cells.">Towards real time analysis of protein secretion from single cells.</a> Lab Chip. 9 (21), 3047-3049 (2009).</li><li>Huang, Y., Cai, D., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-+and+Nanotechnologies+for+Study+of+Cell+Secretion.">Micro- and Nanotechnologies for Study of Cell Secretion.</a> Anal. Chem. 83 (12), 4393-4406 (2011).</li><li>Huang, N. T., Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrated+microfluidic+platform+for+in+situ+cellular+cytokine+secretion+immunophenotyping.">An integrated microfluidic platform for in situ cellular cytokine secretion immunophenotyping.</a> Lab Chip. 12 (20), 4093-4101 (2012).</li><li>Eyer, K., Stratz, S., Kuhn, P., K&#252;ster, S. K., Dittrich, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementing+enzyme-linked+immunosorbent+assays+on+a+microfluidic+chip+to+quantify+intracellular+molecules+in+single+cells.">Implementing enzyme-linked immunosorbent assays on a microfluidic chip to quantify intracellular molecules in single cells.</a> Anal. Chem. 85 (6), 3280-3287 .</li><li>Aebi, U., Pollard, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glow+discharge+unit+to+render+electron+microscope+grids+and+other+surfaces+hydrophilic.">A glow discharge unit to render electron microscope grids and other surfaces hydrophilic.</a> J. Electron Microsc. Tech. 7 (1), 29-33 (1987).</li><li>Pandolfi, P. P., Sonati, F., Rivi, R., Mason, P., Grosveld, F., Luzzatto, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+the+housekeeping+gene+encoding+glucose+6-phosphate+dehydrogenase+(G6PD):+G6PD+is+dispensable+for+pentose+synthesis+but+essential+for+defense+against+oxidative+stress.">Targeted disruption of the housekeeping gene encoding glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PD): G6PD is dispensable for pentose synthesis but essential for defense against oxidative stress.</a> EMBO J. 14 (21), 5209-5215 (1995).</li></ol>

Microfluidics प्रौद्योगिकी एकल कोशिका विश्लेषण के लिए नए और आकर्षक संभावनाएं खोल दिया गया है. विशेष रूप से, फंसाने के लिए संभावना और microfluidic उपकरणों के द्वारा अलग - अलग कक्षों स्थिर एकल कक्ष गुण और प्रतिक्रिया पर व...

अतीत में कई अध्ययनों सेल करने वाली सेल एक बड़ी सेल आबादी 1-3 भीतर मतभेद, विशेष रूप से संकेत दे 4 प्रक्रियाओं, या इस तरह के प्रोटीन 5,6, मेटाबोलाइट्स, और cofactors 7,8 रूप में intracellular biomolecules की मात्रा का पता चला है. इन विषमताओं के सेल अनुकूलन और विकास 9 के लिए मूल रूप से महत्वपूर्ण हो सकता है, लेकिन यह भी इस तरह के कैंसर के 10-13 जैसे रोगों के उद्भव और उपचार में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा माना जाता है. इसलिए, एकल कोशिका स्तर पर अध्ययन के लिए इन अध्ययनों bioactive रासायनिक पदार्थों के साथ उपचार के बाद अलग सेल प्रतिक्रिया प्रकट करते हैं, खासकर यदि जैविक और औषधीय अनुसंधान के क्षेत्र में उच्च ब्याज की हैं. हाल के वर्षों में, कई विश्लेषणात्मक प्लेटफार्मों एकल जीवित कोशिकाओं का विश्लेषण या सेल सामग्री की रासायनिक संरचना की सुविधा है कि विकसित किया गया है. छँटाई फ्लोरोसेंट सक्रिय सेल (FACS) सोना सेंट हैandard एकल जीवित कोशिकाओं की बहुत उच्च throughput विश्लेषण के लिए, विधि intracellular या स्रावित यौगिकों की मात्रा का ठहराव के लिए नियोजित नहीं किया जा सकता. microfluidic प्लेटफार्मों के उद्भव स्थिति, इलाज और एकल कक्षों का अवलोकन के लिए उपन्यास विश्लेषणात्मक रणनीतियों का वादा किया है. Microfluidics में एक मील का पत्थर भूकंप और सहकर्मियों 14,15 द्वारा एहसास लचीला PDMS वाल्व के एकीकरण के साथ पहुँच गया था. वे चिप पर क्षेत्रों को अलग कर सकते हैं क्योंकि ये वाल्व उपयोगी होते हैं, जैसे दो संस्कृतियों अलग 16. इसके अलावा, वे एकल कोशिका विश्लेषण के लिए विशेष रूप से लागू कर रहे हैं और इसलिए analyte कमजोर पड़ने की समस्याओं को कम करने में मदद. एकल कोशिका विश्लेषण के लिए इस दृष्टिकोण की शक्ति हाल ही में हैनसेन और समानांतर 17 में एकल कक्षों के सैकड़ों से जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण किया जो सहकर्मियों द्वारा प्रदर्शन किया गया है. प्रोटीन और मेटाबोलाइट्स को लक्ष्य करते समय विश्लेषण के कारण उपयुक्त एक की कमी के कारण बहुत मुश्किल हैmplification तरीकों, विभिन्न मौजूद यौगिकों, और रासायनिक प्रकृति में उनकी विविधताओं के बड़ी संख्या में. इसके अलावा, सबसे intracellular biomolecules कुछ दस हजार 18 के क्रम में कम प्रतिलिपि संख्या में उपस्थित होने की उम्मीद कर रहे हैं, इसलिए इस्तेमाल किया विश्लेषणात्मक विधि एक उच्च संवेदनशीलता होनी चाहिए. ऐसे immunoassays और एंजाइम से जुड़ी immunoassays (एलिसा) के रूप में और अधिक शक्तिशाली assays वे कई धोने और ऊष्मायन कदम के साथ ही सतह स्थिरीकरण की आवश्यकता के बाद से microfluidic उपकरणों में एकीकृत करने के लिए मुश्किल हैं. कारण इन चुनौतियों के लिए, यह प्रोटीन या मेटाबोलाइट्स एकल कोशिका स्तर पर मात्रा निर्धारित किया गया है, जहां केवल कुछ उदाहरण सूचित किया गया है कि आश्चर्य की बात नहीं है. उदाहरण के लिए, फ्लोरोसेंट यौगिकों के स्राव पर पढ़ाई 19,20 सूचित किया गया है. हाल ही में, एलिसा के साथ कार्यान्वयन एक सेल संस्कृति से स्रावित (nonfluorescent) प्रोटीन (THP-1 कोशिकाओं) 21 और एकल (मैं के विश्लेषण के लिए प्रस्तुत किया गया थाmmune सेल) 10. Intracellular प्रोटीन का लक्ष्य शि एट अल. एक immunoassay 11 के माध्यम से ट्यूमर कोशिकाओं में संकेत दे रास्ते के विश्लेषण के लिए intracellular प्रोटीन की पहचान में मदद की है कि एक microfluidic डिवाइस विकसित की है. हालांकि, प्रोटीन के ही रिश्तेदार मात्रा निर्धारित किया गया है और कोई enzymatic प्रवर्धन कम बहुतायत प्रोटीन के लिए संकेत बढ़ाने के लिए इस्तेमाल किया गया था. हाल ही में, हम प्रतिदीप्ति assays 8 और immunoassays 22 के साथ एक एकल कक्ष फँसाने microdevice (चित्रा 1) गठबंधन करने में सक्षम थे. कोशिकाओं निष्क्रिय आपूर्ति और कोशिकाओं के किसी भी आंदोलन के बिना मध्यम और अन्य रासायनिक एजेंटों की (तेजी) के विनिमय की अनुमति जो microsized बाधा संरचनाओं में फंस रहे हैं. प्रत्येक जाल चारों ओर एक अंगूठी के आकार का वाल्व एक बहुत छोटी मात्रा (&quot;microchamber&quot;) में सेल के अलगाव के लिए सक्षम बनाता है. यह वाल्व तुरंत वह एक सेल lysing (hypoosmolar) बफर शुरू करने के बाद actuated हैnce दूर फैलाना intracellular अणुओं या स्रावित अणुओं को रोकने. सबसे महत्वपूर्ण बात, देय मात्रा (625 पी एल) के छोटे आकार के अणुओं की बड़ी कमजोर पड़ने से बचा है. सेल और विश्लेषण चिप में एक ही स्थिति में में प्रदर्शन कर रहे हैं, क्योंकि इसके अलावा, परिवहन के कारण analytes का कोई नुकसान नहीं है. यहाँ वर्णित चिप डिजाइन 60 microchambers कुल 7 या 8 या तो microchambers के 8 बारी पंक्तियाँ शामिल हैं. एक रेखा के साथ पार संदूषण रोका जाता है ताकि कक्षों, पंक्तियों में actuated हैं. मंच प्रतिदीप्ति assays के साथ ही प्रतिरक्षा assays (चित्रा -1) के साथ संयोजन में उपयोग किया जा सकता है. बाद के लिए, हम चिप उत्पादन और विधानसभा की प्रक्रिया के साथ संगत कर रहे हैं जो एंटीबॉडी के स्थिरीकरण के लिए प्रोटोकॉल की स्थापना की. इसलिए मंच एकल कोशिका के स्तर पर, संवेदनशील विश्वसनीय और quantifiable assays के लिए रास्ता खुल जाता है. अब तक, हम मैं के विश्लेषण के लिए डिवाइस का इस्तेमाल किया हैntracellular और स्रावित एंजाइमों (enzymatic assays के द्वारा रिश्तेदार मात्रा का ठहराव), intracellular cofactors, प्रोटीन और छोटे अणुओं (endpoint assays या एलिसा द्वारा पूर्ण मात्रा का ठहराव). बाद में, हम microcontact मुद्रण और सतह के रसायन शास्त्र के माध्यम से बहुपरत नरम लिथोग्राफी और एंटीबॉडी के patterning के लिए प्रोटोकॉल के माध्यम से चिप निर्माण की प्रक्रिया का वर्णन. इसके अतिरिक्त, चिप का उपयोग और संचालन के कुछ उदाहरण दिए गए हैं.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="884">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:344px;">REAGENTS:</td>
			<td style="width:284px;"></td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:344px;">Name of the Reagent</td>
			<td style="width:284px;">Company</td>
			<td style="width:103px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:153px;">Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">SU-8 2015</td>
			<td style="width:284px;">MicroChem Corp. (Netwon, MA)</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">1H,1H,2H,2H-Perfluorodecyl-dimethylchloro-silane</td>
			<td style="width:284px;">ABCR (Karlsruhe, Germany)</td>
			<td style="width:103px;">AB103608</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">4-Methylumbelliferyl &#946;-D-N,N&#8242;-diacetylchitobioside hydrate</td>
			<td style="width:284px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">M9763</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Acetone</td>
			<td style="width:284px;">Merck VWR (Darmstadt, Germany)</td>
			<td style="width:103px;">100014</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Avidin</td>
			<td style="width:284px;">AppliChem (Axon Lab AG)</td>
			<td style="width:103px;">A-2568</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">AZ 1518</td>
			<td style="width:284px;">AZ Electronic Materials (Wiesbaden, Germany)</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">AZ 726 developer</td>
			<td style="width:284px;">AZ Electronic Materials (Wiesbaden, Germany)</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:284px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">A-4503</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Bovine serum albumin, biotin</td>
			<td style="width:284px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">A-8549</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Cell dissociation buffer</td>
			<td style="width:284px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:103px;">13151-014</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Hexamethyldisilazane (HDMS)</td>
			<td style="width:284px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:103px;">40215</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Hydrochloric acid</td>
			<td style="width:284px;">Fluka</td>
			<td style="width:103px;">84422</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Isopropanol</td>
			<td style="width:284px;">Merck VWR (Darmstadt, Germany)</td>
			<td style="width:103px;">109634</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td style="width:284px;">Fluka</td>
			<td style="width:103px;">63068</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">MR developer 600</td>
			<td style="width:284px;">Microresist technology GmbH (Berlin, Germany)</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">PBS</td>
			<td style="width:284px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:103px;">10010-031</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">PLL-g-PEG grafted</td>
			<td style="width:284px;">SuSoS, (D&#252;bendorf, Switzerland)</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">PLL-g-PEG grafted biotin</td>
			<td style="width:284px;">SuSoS, (D&#252;bendorf, Switzerland)</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:284px;">Fluka</td>
			<td style="width:103px;">60132</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Protein G, biotin</td>
			<td style="width:284px;">Sigma Fine Chemicals</td>
			<td style="width:103px;">41624</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Silicon wafer</td>
			<td style="width:284px;">Si-Mat (Kaufering, Germany)</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit (PDMS)</td>
			<td style="width:284px;">Dow Corning</td>
			<td>39100000</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Tris(hydroxymethyl)-aminomethan</td>
			<td style="width:284px;">Biorad</td>
			<td style="width:103px;">1610716</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Tween 20</td>
			<td style="width:284px;">Biorad</td>
			<td style="width:103px;">1706531</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EQUIPMENT:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:344px;">Material Name</td>
			<td style="width:284px;">Company</td>
			<td style="width:103px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:153px;">Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">0.22 &#181;m PES syringe filter</td>
			<td style="width:284px;">TRP</td>
			<td style="width:103px;">99722</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">1/1.5 mm biopsy puncher</td>
			<td style="width:284px;">Miltex, York PA</td>
			<td style="width:103px;">33-31AA/33-31A</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Cell Trics filter 20 &#181;m</td>
			<td style="width:284px;">Partec</td>
			<td style="width:103px;">04-004-2325</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Centrifuge Sigma 3-18K</td>
			<td style="width:284px;">Kuehner</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Hotplate HP 160 III BM</td>
			<td style="width:284px;">Sawatec, Sax, Switzerland</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">MA-6 mask aligner</td>
			<td style="width:284px;">Karl Suess</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Multizoom AZ100M microscope</td>
			<td style="width:284px;">Nikon Corporation</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Photomask</td>
			<td style="width:284px;">Microlitho, Essex, U.K.</td>
			<td style="width:103px;">n.a</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Plasma Cleaner PDC-32G</td>
			<td style="width:284px;">Harrick</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Spin coater Modell WS-400 BZ-6NPP/LITE</td>
			<td style="width:284px;">Laurell</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Spin Modules SM 180 BM</td>
			<td style="width:284px;">Sawatec, Sax, Switzerland</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Step profiler Dektak XT Advanced</td>
			<td style="width:284px;">Bruker</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:344px;">Syringe pump neMESYS</td>
			<td style="width:284px;">Cetoni</td>
			<td style="width:103px;">n.a.</td>
			<td style="width:153px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a microfluidic chip for the versatile chemical analysis of single cells

हम समानांतर में एकाधिक एकल कक्षों में intracellular biomolecules के मात्रात्मक निर्धारण के लिए सक्षम बनाता है कि एक microfluidic युक्ति उपस्थित थे. इस प्रयोजन के लिए, कोशिकाओं निष्क्रिय एक microchamber के बीच में फंस रहे हैं. नियंत्रण परत की सक्रियता पर, सेल एक छोटे से कक्ष में आसपास मात्रा से अलग है. आसपास मात्रा तो अलग सेल को प्रभावित किए बिना विमर्श किया जा सकता है. हालांकि, चैंबर के कम उद्घाटन और समापन पर, कक्ष में समाधान कुछ सौ मिसे के भीतर बदला जा सकता है. कारण कक्षों के उलटने के लिए, कोशिकाओं ऊष्मायन, कपड़े धोने, और अंत में, सेल के लिए उदाहरण के लिए एक अत्यधिक चलाया फैशन में अलग अलग समाधान क्रमिक रूप से उजागर करने के लिए किया जा सकता है. कसकर बंद microchambers, lysate के प्रतिधारण सक्षम कम करने और सेल के बाद कमजोर पड़ने नियंत्रित करते हैं. सेल और विश्लेषण को एक ही स्थान पर होते हैं के बाद से, उच्च संवेदनशीलता को बनाए रखा है और आगे नहीं घ क्योंकिanalytes की ilution या नुकसान परिवहन के दौरान होता है. microchamber डिजाइन इसलिए व्यक्ति की कोशिकाओं से जारी intracellular अणुओं (attomoles, zeptomoles) के बहुत छोटे प्रतिलिपि संख्या के विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विश्लेषण में सक्षम बनाता है. इसके अलावा, कई microchambers उपयुक्त ऑप्टिकल उपकरण निगरानी के लिए उपयोग किया जाता है, यह देखते हुए एक बार में कई कोशिकाओं का विश्लेषण की अनुमति, एक सरणी स्वरूप में व्यवस्थित किया जा सकता है. हम पहले से ही intracellular प्रोटीन, एंजाइमों, cofactors और सापेक्ष या निरपेक्ष या तो quantifiable तरीके से दूसरे दूतों का विश्लेषण करने के लिए सबूत की अवधारणा अध्ययन के लिए मंच का इस्तेमाल किया है.

हमारे मंच में उपस्थित या एकल कोशिकाओं द्वारा निर्मित एक intracellular की विविधता के रूप में अच्छी तरह से स्रावित अणुओं का विश्लेषण करने में सक्षम है. यहाँ, हम संभव assays की विविधता को रेखांकित करने के लिए विभिन्न उ...

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A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells

इस लेख में हम एकल कोशिका विश्लेषण के लिए एक microfluidic चिप प्रस्तुत करते हैं. यह अनुमति देता है intracellular प्रोटीन, एंजाइमों, cofactors, और फ्लोरोसेंट assays या immunoassays के माध्यम से दूसरे दूतों की मात्रा का ठहराव.

एकल कक्षों के बहुमुखी रासायनिक विश्लेषण के लिए एक microfluidic चिप

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Microfluidic Device for Recreating a Tumor Microenvironment in Vitro

Microfluidic Device for Recreating a Tumor Microenvironment in Vitro

Microfluidic युक्ति एक ट्यूमर microenvironment पुनः के लिए<em&gt; इन विट्रो में</em

We have developed a microfluidic device that mimics the delivery and systemic clearance of drugs to heterogeneous three-dimensional tumor tissues in ...

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एक microfluidic आधारित एकल कण के लिए द्रव्यगतिकी जाल

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एक multichannel दोहरे बिजली क्षेत्र microfluidic चिप का उपयोग कर लंग कैंसर कोशिकाओं के Electrotaxis अध्ययन

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में Microengineered मानव आंत्र Villi साथ रहने का Microbiome के सह-संस्कृति एक आंत-ऑन-ए-चिप Microfluidic डिवाइस

Here, we describe a protocol to perform long-term co-culture of multi-species human gut microbiome with microengineered intestinal villi in a human ...

Designing Microfluidic Devices for Studying Cellular Responses Under Single or Coexisting Chemical/Electrical/Shear Stress Stimuli

एकल या coexisting रासायनिक / इलेक्ट्रिकल / कतरनी तनाव उत्तेजनाओं के तहत सेलुलर प्रतिक्रियाएँ के अध्ययन के लिए microfluidic उपकरणों डिजाइनिंग

Microfluidic devices are capable of creating a precise and controllable cellular micro-environment of pH, temperature, salt concentration, and other ...

A Versatile Method of Patterning Proteins and Cells

Patterning के प्रोटीन और कोशिकाओं की एक बहुमुखी विधि

Substrate and cell patterning techniques are widely used in cell biology to study cell-to-cell and cell-to-substrate interactions. Conventional patterning ...