Name: culturing microglia from the neonatal and adult central nervous system
Uploaded: 2013-08-09T11:00:00
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우리는 그들의 조언과 도움 의견을 Tsirka 실험실의 구성원을 감사드립니다. 이 작품은 JCN에 RB, NSF-3MT IGERT와 LT에 터너 논문 교제와 NSF-3MT IGERT로 12PRE12060489을 설정하려면 R01NS42168에 의해 지원되었다.

1. 해부 (0 일) <ol><li> 저체온증을 가진 P0-2 마우스 새끼로 마취를 유도. 조직을 소독하기 위해 70 % 에탄올에 담가 Kimwipe와 새끼의 머리를 닦습니다. </li><li> 10cm 배양 접시 당 4 새끼을 사용하여 가위로 머리를 제거합니다. 얼음처럼 차가운 행크의 버퍼를 포함하는 페트리 접시에 머리를 놓습니다. </li><li> 눈 소켓을 통해 곡선 집게를 사용하여 머리를 고정하고 조심스럽게 똑바로 microforceps와 두개골...

<ol>
	<li>Ransohoff, R. M., Perry, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+Physiology:+Unique+Stimuli,+Specialized+Responses.">Microglial Physiology: Unique Stimuli, Specialized Responses.</a> Ann. Rev. Immunol. 27, 119-145 (2009).</li><li>Ginhoux, F., Greter, M., Leboeuf, M., Nandi, S., See, P., Gokhan, S., Mehler, M., Conway, S., Ng, L., Stanley, E., Samokhavalov, I., Merad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+analysis+reveals+that+adult+microglia+derive+from+primitive+macrophages.">Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages.</a> Science. 330, (2010).</li><li>Kraft, A. D., Harry, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Features+of+microglia+and+neuroinflammation+relevant+to+environmental+exposure+and+neurotoxicity.">Features of microglia and neuroinflammation relevant to environmental exposure and neurotoxicity.</a> Int. J. Env. Res. Pub. Health. 8, 2980-3018 (2011).</li><li>Sierra, A., Encinas, J. M., Deudero, J., Chancey, J., Enikolopov, G., Overstreet-Wadiche, L., Tsirka, S., Maletic-Savatic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+shape+adult+hippocampal+neurogenesis+through+apoptosis-coupled+phagocytosis.">Microglia shape adult hippocampal neurogenesis through apoptosis-coupled phagocytosis.</a> Cell Stem Cell. 7, 483-495 (2010).</li><li>Emmetsberger, J., Tsirka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+inhibitory+factor+(MIF/TKP)+mitigates+secondary+damage+following+spinal+cord+injury.">Microglial inhibitory factor (MIF/TKP) mitigates secondary damage following spinal cord injury.</a> Neurobiol. Dis. 47, 295-309 (2012).</li><li>Gao, Z., Tsirka, S. 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E., Tan, S., Wills, T. E., Porritt, M. J., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+inflammation+in+the+brain+and+spinal+cord+following+mechanical+injury.">Comparison of inflammation in the brain and spinal cord following mechanical injury.</a> J. Neurotrauma. 25, 1217-1225 (2008).</li><li>Schell, J. B., Crane, C. A., Smith, M. F., Roberts, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+ex+vivo+nitric+oxide+production+by+acutely+isolated+neonatal+and+adult+microglia.">Differential ex vivo nitric oxide production by acutely isolated neonatal and adult microglia.</a> J. Neuroimmunol. 189, 75-87 (2007).</li><li>Brannan, C. A., Roberts, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+microglia+from+adult+mice+are+refractory+to+nitric+oxide-inducing+stimuli+due+to+impaired+NOS2+gene+expression.">Resident microglia from adult mice are refractory to nitric oxide-inducing stimuli due to impaired NOS2 gene expression.</a> Glia. 48, 120-131 (2004).</li><li>Tamashiro, T. T., Dalgard, C. L., Byrnes, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+microglia+isolation+from+mixed+glial+cell+cultures+of+neonatal+rat+brain+tissue.">Primary microglia isolation from mixed glial cell cultures of neonatal rat brain tissue.</a> J. Vis. Exp. (66), e3814 (2012).</li><li>Yip, P. K., Kaan, T. K., Fenesan, D., Malcangio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+isolation+and+culture+of+primary+microglia+from+adult+mouse+spinal+cord.">Rapid isolation and culture of primary microglia from adult mouse spinal cord.</a> J. Neurosci. Methods. 183, 223-237 (2009).</li><li>Ponomarev, E. D., Novikova, M., Maresz, K., Shriver, L. P., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+culture+system+that+supports+adult+microglial+cell+proliferation+and+maintenance+in+the+resting+state.">Development of a culture system that supports adult microglial cell proliferation and maintenance in the resting state.</a> J. Immunol. Meth. 300, 32-46 (2005).</li><li>Ji, K., Akgul, G., Wollmuth, L. P., Tsirka, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+actively+regulate+the+number+of+functional+synapses.">Microglia actively regulate the number of functional synapses.</a> PLoS One. 8, e56293 (2013).</li><li>Tremblay, M. -. &. #. 2. 0. 0. ;., Majewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+microglia+in+synaptic+plasticity.">A role for microglia in synaptic plasticity.</a> Comm. Integr. Biol. 4, 220-222 (2011).</li><li>DeWitt, D. A., Perry, G., Cohen, M., Doller, C., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+regulate+microglial+phagocytosis+of+senile+plaque+cores+of+Alzheimer's+disease.">Astrocytes regulate microglial phagocytosis of senile plaque cores of Alzheimer's disease.</a> Expt. Neurol. 149, 329-340 (1998).</li><li>Aloisi, F., Penna, G., Cerase, J., Men&#233;ndez Iglesias, B., Adorini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-12+production+by+central+nervous+system+microglia+is+inhibited+by+astrocytes.">IL-12 production by central nervous system microglia is inhibited by astrocytes.</a> J. Immunol. 159, 1604-1612 (1997).</li><li>Min, K. -. J., Yang, M. -. S., Kim, S. -. U., Jou, I., Joe, E. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytes+induce+hemeoxygenase-1+expression+in+microglia:+a+feasible+mechanism+for+preventing+excessive+brain+inflammation.">Astrocytes induce hemeoxygenase-1 expression in microglia: a feasible mechanism for preventing excessive brain inflammation.</a> J. Neurosci. 26, 1880-1887 (2006).</li><li>Sasmono, R., Oceandy, D., Pollard, J., Tong, W., Pavli, P., Wainwright, B., Ostrowski, M., Himes, S., Hume, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+macrophage+colony-stimulating+factor+receptor-green+fluorescent+protein+transgene+is+expressed+throughout+the+mononuclear+phagocyte+system+of+the+mouse.">A macrophage colony-stimulating factor receptor-green fluorescent protein transgene is expressed throughout the mononuclear phagocyte system of the mouse.</a> Blood. 101, 1155-1163 (2003).</li><li>Ekdahl, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+activation+-+tuning+and+pruning+adult+neurogenesis.">Microglial activation - tuning and pruning adult neurogenesis.</a> Front Pharmacol. 3, 14 (2012).</li><li>Sierra, A., Gottfried-Blackmore, A., McEwen, B., Bulloch, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+derived+from+aging+mice+exhibit+an+altered+inflammatory+profile.">Microglia derived from aging mice exhibit an altered inflammatory profile.</a> Glia. 55, 412-424 (2007).</li></ol>

미세 아교 세포는 중추 신경계에게 정상적인 기능뿐만 아니라 다양한 병리에 염증 반응을 조절. 미세 아교 세포에 의하여 기능적인 시냅스 리모델링 정상적인 뇌의 항상성 (15)의 유지 보수에 연루되어있다. 신경성 놓기 동안 그들은 해마 4, 16 이가있는 이랑의 신경 전구 세포의 정리에 참여할 수 있습니다. 따라서, 미세 아교 세포가 여러 개별 기능을 갖고 걸쳐 개발 및 성인의 광?...

미세 아교 세포에 가장 가까운 구조와 기능 1 말초 대식 세포를 닮은 CNS의 주민 면역 세포입니다. 그것은 최근 출생 미세 아교 세포가 원시 골수 전구 세포에서 파생 출생 조혈 전구 세포는 성인 뇌의 2 미세 아교 세포의 근원이라는 기존 개념을 upending, 배 발생의 여덟 번째 날 이전에 생성 된 것을 증명하고있다. 그들은 여러 신경 질환의 주요 역할을 담당하고 신속하게 프로 염증 또는 항 염증성 사이토 카인에게 3 출시하여 감염이나 부상에 응답 할 수 있습니다. 따라서 미세 아교 세포는 질병의 진행에 영향을 조작 할 수 CNS의 독립형 장치를 포함. 분리하는 강력하고 재현 방식과 문화 신생아 또는 성인 미세 아교 세포를 개발하는 것은 미래의 연구에 중요합니다. 미세 아교 세포는 뇌 병변의 수가 중요한 선수로 알려져있다. 더 최근에, ROLES는 해마 1, 4의 이가있는 이랑의 미세 아교 세포 phagocytose 초과 신경 전구 세포의 정상적인 두뇌 발달과 기능에있는 셀에 등장하고있다. 미세 아교 세포는 또한 MS와 같은 척수에 영향을주는 여러 가지 신경 학적 상태, 신경 병증 성 통증, 척수 손상 5-7를 조절 할 수 있습니다. 척수 미세 아교 세포는 지역 환경의 차이 때문인 활성화 신호를 8, 9,에 대한 응답으로 뇌의 미세 아교 세포에 비해 다르게 반응합니다. 따라서 문화 체외 시스템에 적절한 설정 및 척수의 미세 아교 세포를 연구하는 것이 중요합니다. 신생아 미세 아교 세포는 IFN-γ 나 TNF-10,11 특정 질병의 맥락에서 미세 아교를 공부하는 성인 세포를 사용하는 필요성을 강조 더.와 생체 자극 후 성인 세포에 비해 프로 염증성 사이토 카인 질소 산화물의 훨씬 더 생산 우리는 세제곱에 실험실에서 채용 프로토콜lture 신생아 미세 아교 세포는 세포 배양 플라스크 (12)의 표면에서 미세 아교를 제거하기위한 노력의 일환으로 혼합 된 아교 문화의 흔들림 활용 최근 방법의 변형입니다. 우리는 또한 첫 번째 깨갱 거리는 소리, 등 (13)에 의해 기술 된 프로토콜을 기반으로 성인 마우스의 척수에서 문화 미세 아교로하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 다른 사용 가능한 프로토콜 14에 비해 문화 성인 세포에 빠른 방법을 제공합니다. 그 결과 준비는 70 % 미세 아교이며 나머지 비율은 성상 세포로 구성되어 있습니다. 우리 문화의 순도가 다른 발표 방법 13에 비해 낮은 있지만,이 문화 시스템은 주로 척수에 영향을 미치는 질병의 연구를위한 다양한 활성화 자극뿐만 아니라 문화의 응답에 아교를 탐험하는 데 유용합니다 강한되는 염증 반응이 주요 기능입니다. 설명 된 모든 프로토콜은 스토니 브룩 Universi에 의해 승인되었습니다타이 IACUC.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EDTA, 5mM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15567-028</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Lidocaine, 60mM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L-5647</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Trypsin/EDTA</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>25-052-CI</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMEM, 1X</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>10-017</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>25-000-Cl</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Gentamycin Sulfate</td>
			<td>Biowittaker</td>
			<td>17-518Z</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>35 x 10mm tissue culture dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353001</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Poly-D-Lysine, 100 &mu;g/ml</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dilute 1:20</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HBSS, 1X</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>20-023-CV</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

culturing microglia from the neonatal and adult central nervous system

미세 아교 같은 같은 CNS 개발의 성숙, 다발성 경화증, 척수 손상 등의 생리 및 병리 과정에서 중요한 역할을 가지고, 중추 신경계 (CNS)의 주민 대식 세포와 같은 호텔입니다. 미세 아교 세포가 활성화하고 MS 또는 뇌졸중으로 인한 허혈성 뇌 손상에서 볼 축삭 손상과 같은 신경 손상이나 자극에 의​​해 행동을 모집 할 수 있습니다. CNS의 이러한 면역 멤버도 아닌 병적 인 상태에서 시냅스 가소성의 역할을하는 것으로 생각된다. 우리는 다른 CNS 세포의 종류와 세포 배양 파편의 존재 등의 혼란 변수를 최소화하면서 가능한 세포 수를 극대화하기위한 것이다 신생아 및 성인 조직에서 배양 미세 아교 세포에 대한 프로토콜을 사용합니다. 우리는 전체 프로세스가 가능하고 재현하게 크고 쉽게 뚜렷한 CNS 구성 요소 (예를 들어, 피질 척수 세그먼트), 사용합니다. 성인 세포의 사용많은 병리는 주로 출생 후 척수에 영향을 미칠 공부로들, 신생아 뇌 미세 아교 세포의 사용에 적합한 대안이다. 이러한 문화 시스템은 또한 어느 억제 또는 아교 활성화를 촉진 할 수 화합물의 효과를 테스트하는 데 유용합니다. 미세 아교 활성화가 성인 CNS의 질병의 결과를 형성 할 수 있기 때문에, 신생아 및 성인 미세 아교 세포는 배양하고 연구 할 수있는 생체 시스템이 필요하다.

<html> 휴식 및 활성화 미세 아교 세포의 예는 그림 1에 표시됩니다. 미세 아교 세포는 도금 후 24 시간을 시각화 (그림 1a)과를내는 (휴식) 형태를 전시 하였다. 프라이밍 시약에 노출되면 세포와 같은 아교 형태의 변화 그람 음성 세균의 세포벽 성분 인 lipopolysaccharide (LPS) 결과 (그림 1b)가 활성화 될. 도금 세포를 계산의 예는 그림 2에</...

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Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

우리는 신생아 대뇌 피질 성인 척수 가능한 미세 아교 세포의 효율적이고 신속한 분리 / 문화 방법을 설명합니다. 대뇌 피질의 미세 아교 세포의 해부 및 도금은 초기 박리 다음 장소 ~ 10 일을 복용 이후 미세 아교 수확으로 90 분 이내에 수행 할 수 있습니다.

신생아와 성인 중추 신경계에서 배양 소교 세포

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Primary Microglia Isolation from Mixed Glial Cell Cultures of Neonatal Rat Brain Tissue

신생아 쥐 뇌 조직의 혼합 Glial 세포 배양의 기본 Microglia 격리

Microglia account for approximately 12% of the  total cellular population in the mammalian brain. While neurons and astrocytes are considered  the major ...

연구

면역학 및 감염병학

Purification and Visualization of Lipopolysaccharide from Gram-negative Bacteria by Hot Aqueous-phenol Extraction

핫 수성 - 페놀 추출에 의한 그람 음성 박테리아에서 정화와 Lipopolysaccharide의 시각화

Lipopolysaccharide (LPS)  is a major component of Gram-negative bacterial outer membranes. It is a tripartite molecule consisting of  lipid A, which is ...

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

쥐과 신생아에서 보존 면역 표현형과 기능으로 두피 소교 세포의 분리

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Neuropathogenic의 비 침습 모델<em&gt; 대장균</em&gt; 신생아 쥐에 감염

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

B 형 간염 바이러스 리포터 시스템 개발은 복제주기의 초기 단계를 모니터링하기

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Analysis of Microglia and Monocyte-derived Macrophages from the Central Nervous System by Flow Cytometry

유동 세포 계측법에 의한 중추 신경계에서 유래 된 대장 세포 및 단구 세포 유래 대 식세포의 분석

Numerous studies have demonstrated the role of immune cells, in particular macrophages, in central nervous system (CNS) pathologies. There are two main ...

Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System

마우스 작은 장의 면역 시스템에서 세포를 분리

The intestinal immune system plays an essential role in maintaining the barrier function of the gastrointestinal tract by generating tolerant responses to ...

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

절연 및 Extracellular 소포 특성 성인 Schistosoma 나무 에서

Extracellular vesicles (EVs) are membranous vesicles released by a variety of cells into the extracellular microenvironment. EVs represent a population of ...

A Positioning Device for the Placement of Mice During Intranasal siRNA Delivery to the Central Nervous System

중추 신경계에 비강 siRNA 전달 하는 동안 마우스의 배치에 대 한 위치 장치

Intranasal (IN) drug delivery to the brain has emerged as a promising method to bypass the blood-brain barrier (BBB) for the delivery of drugs into the ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

실험적인 자가면역 뇌척수염 중 중추신경계에서 림프구 침투의 흐름 세포 분석

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...