הכתם המערבי

סופג מערבי משמש לזיהוי נוכחות של חלבונים ספציפיים בדגימות מופרדות אלקטרופורטית. בעקבות הפרדה על ידי טכניקה המכונה נתרן דודסיל סולפט polyacrylamide ג'ל אלקטרופורזה, או SDS-PAGE, העברה מערבית משמשת להעברת חלבונים מג'ל polyacrylamide על פיסת ממברנה אשר לוכד את החלבונים במקומות המתאימים שלהם. לאחר מכן, הממברנות נבדקות עם נוגדנים בתהליך שנקרא אימונובלוט. אימונובלוטינג משתמש בחלבון נוגדנים ונוגדנים מחייבים דרך אתרי זיהוי ספציפיים, ומספקים את הספציפיות הגבוהה הנדרשת לזיהוי חלבון יחיד. איתור הנוגדנים מתבצע באמצעות מערכות עיתונאיות הכוללות שימוש באנזימים. אנזימים יכולים להיות מחוברים לסוף נוגדן ולהגיב עם מצעים כדי לייצר שינויים בצבע או באור. לאחר מכן ניתן לדמיין אותות אלה ולכימת באמצעות תהליך הנקרא densitometry.

מאמר וידאו זה מציג סקירה כללית של טכניקת הכתם המערבי על ידי תיאור העברה מערבית, שימוש בזיהוי נוגדנים וניתוח תמונה. השלבים הכרוכים בהעברה מערבית כגון הרכבת כריך ההעברה ותנאי ההעברה נדונים בפירוט, כמו גם התיאוריה שמאחורי כריכת הנוגדנים וזיהוי נוגדנים אלה. היישומים הרחבים של טכניקה זו מתוארים באמצעות מספר דוגמאות, כולל זיהוי של אינטראקציות חלבון חלבון וזיהוי של חלבונים בודדים בתוך מתחמי חלבון.