Name: polymalic acid-based nano biopolymers for targeting of multiple tumor markers: an opportunity for personalized medicine?
Uploaded: 2014-06-13T13:00:00
Duration: 14 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine? at JoVE.com

We greatly acknowledge financial support by NIH R01 CA123495, U01 CA151815, R01 CA136841, grants from the Department of Neurosurgery at Cedars-Cedars Medical Center and Arrogene Technology Inc.

Todos os experimentos cumprir com os regulamentos oficiais, incluindo animais de procedimentos cirúrgicos e não cirúrgicos realizados in vivo e estão em plena conformidade com os protocolos IACUC. 1. Bioprodução de ácido Polymalic <ol><li> Crescer uma cultura de sementes de esférulas em agar e transferir plasmódios a 100 ml de meio de cultura com a 25 ° C thermo afirmou incubadora e meio de cultura basal 8,9. </li><li> Produzir uma quantidade de repleto de gravidade de 500 ml plasmódios micro, com exclusão de luz, a fim de evitar a esporulação. </li><li> Prepare 80 g CaCO3 suspensas em 8 L meio basal em 10 L navio biorreator. Transferir 500 ml de micro plasmódio embalados dentro do recipiente de reacção e permitem a montagem de bioprocessos para 75 horas a 25 ° C, de 10 L / min, fluxo de ar filtrado e 150 rpm de agitação por um agitador segmento. </li><li> Termina quando o caldo de cultura tem pH 4,8, indicando o fim da produção de MPLA e medir o teor de PMLA por tele hidroxamato / Fe (III) de ensaio. </li><li> Arrefece-se o caldo a 17 ° C e permitir que as células assentar por gravidade. </li><li> Arrefece-se até 4 ° C e o pH ajustado a 7,5, utilizar NaOH 2 M. Bombear o sobrenadante através de uma coluna cheia com 1,5 L de DEAE-celulose, em direcção ao fundo para o topo (DEAE grãos grosseiros, equilibrada com 20 mM Tris-HCl pH 7,5 a 5 ° C). </li><li> Lavar com 3 colunas de tampão contendo 0,3 M de NaCl, após a alteração da direcção de cima para baixo e eluir PMLA na presença de 0,7 M de NaCl. </li><li> Ajuste a 0,1 M CaCl 2 e precipitar PMLA-Cálcio com 80% de gelo etanol frio. Fraccionar sobre Sephadex G25 em PMLA-cálcio de 80-300 kDa, 50 - 80 kDa, e 10 - 50 kDa, usar água na ausência de tampão e de sal. </li><li> Passar cada fracção através de uma Amberlite IR 120H + coluna, e congelar imediatamente o ácido polymalic fluxo através de azoto líquido para a liofilização. </li><li> Dissolve-se em acetona seca. Após filtração, remover solventeno fluxo de ar seco, Liofilizar e loja a menos 20 ° C. </li></ol> 2. Síntese de base de ácido Polymalic Nano droga <ol><li> Activar os grupos carboxilo de MPLA (P) através da mistura de 116 mg (1 mmol unidades malil) de MPLA-H em 1 ml de acetona anidra e 1 mmol de N-hidroxissuccinimida e 1 mmol de diciclo-carbodiimida em 2 ml de dimetil formamida (DMF). Agita-se a 20 ° C durante 3 hr. Adicionar 0,05 mmol de mPEG 5000-NH 2 (0,05% em moles de unidades malil) em 1 mL de DMF seguido de 0,05 mmol de trietilamina (TEA). </li><li> Adicionar gota a gota, dissolvido em DMF de 0,4 mmoles de éster etílico leucina (Loet) (40% em mol de unidades malil), 0,1 mmol de 2-tiol-1-etilamina (2-MEA) (10% em mol de unidades malil) e 0,5 mmol de TEA, tudo dissolvido em DMF. Após cada adição, deixe 1 hora e verificar a existência de final da reacção negativa por ninidrina resposta (layer-cromatografia de camada delgada, TLC). </li><li> Não remover restos de NHS-éster por hidrólise espontânea com solução salina tamponada com fosfato (30 min, pH 6,8). Dessalinizar sobre PD-10 Coluna, obter &quot;preconjugate&quot;, como um pó branco por liofilização. Seco loja a menos 20 ° C. </li><li> Dissolve-se 30 mg de anticorpos (mAb, IgG2a-κ) em 4,5 ml de fosfato de sódio 100 mM, NaCl 150 mM, pH 5,5. </li><li> Reduzir ligações dissulfureto com 5 mM de tris (etil-2-carboxi) de cloridrato de fosfina durante 30 min a 20 ° C e purifica-se sobre coluna de PD-10. </li><li> Dissolve-Mal-PEG 3400-Mal em 2 ml do mesmo tampão e adicionar o mAb reduzida a um volume final de 10 ml e agitou-se durante a noite a 4 ° C. Concentre-se para 2,5 ml sobre Vivaspin 20, a exclusão de 30 kDa, e purificar sobre Sephadex G75. Verifique produto sobre seg-HPLC e medir quantidade fotometria no comprimento de onda de 280 nm. </li><li> Anexar Mal-PEG-Mal-mAb &quot;preconjugate&quot; tióis obtenção P / PEG 5000 (5%) / Loet (40%) / mAb (0,2%) / 2-MEA (10%). Para fazer isso, a mistura de 5 ml de 200 nmol de mAb 3400-PEG-MAL de 50 mg (P / mPEG 5000 / LOEt/2-MEA) no tampão de pH acima de 5,5, ajustar a concentração de sulfhydryl a 2 mM e incuba-se a 20 ° C durante 3 horas (rendimento de 98%). </li><li> Solubiliza-3&#39;-H2N-AON em DMF / PBS (pH 7,2) e reagem com N-succinimidil-3-(2-piridilditio) propionato (SPDP), em (1:1, v / v) de DMF / metanol (teste da ninidrina ) e purificar AON-PDP sobre Sephadex-LH20 em metanol, em seguida, em água e Liofilizar. </li><li> Incubar 800 nmol AONs activados no tampão de pH 5,5 com o acima preparado Mal-PEG 3400-Mal-Acm-preconjugate durante a noite, até a reacção de permuta de dissulfureto é terminada. </li><li> Incorporar fluorescente Alexa Fluor 680-maleimide formando tioer com polímero-2-MEA-SH. Bloqueie sulfídrilos excesso com 3-piridiltio-propionato (PDP) e purificar sobre Sephadex G75. Armazenar a 4 ° C ou congelados rapidamente à temperatura de -80 ° C até à sua utilização. </li></ol> 3. Ensaios e Propriedades <ol><li> Realizar testes de pureza e estabilidade em PBS e soro a 4 ° C e 37 ° C por meio de análise de SEC-HPLC. Use sulfonato de poliestireno como MolecOs padrões de peso Ular. Medir a distribuição de tamanho de nano-zeta e potenciais. Utilizar sistemas comerciais. </li><li> Adicionar a 320 mL de amostra 160 mL de 10% (w / v) de cloreto de hidroxilamónio e 160 mL de 10% (w / v) de NaOH. Depois de 10-15 minutos, se misturar com 160 ul de 5% (w / v), Fe (III) Cl 3 em 12% (v / v) de HCl e 540 de ler um hidroxamato / Fe (III). Calcular PMLA assumindo 1 mg / ml PMLA corresponde a 2,5 A 540. </li><li> Hidrolisar a droga nano durante a noite em HCl 2M a 110 ° C e de ácido málico no ensaio de cromatografia em fase inversa, com referência a amostras contendo padrões de ácido málico. Cleave a droga nano com 100 mM ditiotreitol e medir Morfolino-AON por HPLC de fase reversa quantitativa em relação aos padrões Morfolino AON. </li><li> Tome drogas nano sem clivagem e medir anticorpo usando um kit de ensaio de proteína. Quantificar mPEG, permitindo sua reação com ferrothiocyanate de amônio, em seguida, extrair com clorofórmio e ler a absorvância a 510 nm de comprimento de onda de 10 </sup&gt;. </li><li> Realize ELISA com 5 mL de droga nano (1-10 mg mAb) por poço testar atividade de anticorpos e coligação. Use 0,5 ug / poço receptor de transferrina e de HER2, respectivamente, como os antigénios revestidos por placa e anticorpos secundários acoplados com peroxidase. </li><li> Calcule% obtidos para AON, MPEG e mAb no que diz respeito ao ácido málico (100%) e comparar com o% pretendida pelo projeto (ver exemplos Tabelas 1 e 2). </li></ol> 4. Testes in vitro <ol><li> Incubar a droga nano com células cancerígenas cultivadas e medida de células sobreviventes ao longo do tempo, pela sua actividade para reduzir amarelo reagente [3 - (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5 - (3-carboximetoxifenil) -2 - (4-sulfofenil )-2H-tetrazólio, sal interno] (MTS) de um corante azul e ler a absorbância em relação com um fotómetro. Siga as instruções do fornecedor kit. </li><li> Preparar extractos de células in vitro ou ex vivo para a transferência de Western. Use gelada extração bpode ser prejudicado que contém SDS e cocktail inibidor de protease. Proteínas separadas por electroforese em gel de redução de SDS-poliacrilamida. </li><li> Do western blotting para as proteínas de interesse nos extratos das amostras. Use anticorpos secundários conjugados com a fosfatase alcalina. </li><li> Use microscopia confocal para demonstrar a captação celular e co-localização de nano plataforma polímero de drogas, AON e endosomes usando rotulagem de fluorescência. Anexar Alexa Fluor 680 para a plataforma conjugado nano e Lissamine para AONs como rótulos de fluorescência. Usar um scanner de 5X espectral microscópio e as células cancerosas vivas para visualizar a distribuição das moléculas marcadas </li><li> Membranas endossoma mancha com tinta fluorescente Estiril Red e demonstrar co-localização endosome ou liberação. </li></ol> 5. Testes in vivo <ol><li> Prepare o modelo do rato de câncer de mama HER2-positivo humano (Tac nu mouse: Cr: (MCR)-Foxnnm). Insira um 0,72 mg 17β-estradiol liberando pellet (liberação de 90 dias) subcutaneously no pescoço de cada rato. </li><li> Em seguida, injetar 1 x 10 7 células tumorais BT-474 por via subcutânea no flanco direito e deixar o tumor crescer. </li><li> Iniciar o tratamento quando os tumores são de 120 mm 3 de tamanho através da injecção na veia da cauda de 150 conjugado nano ul contendo 2,5 mg / kg de AON e / ou 4,5 mg / kg de cada anticorpo. Para o tratamento injetar duas vezes por semana, num total de seis vezes. </li><li> Meça o tamanho do tumor com pinças de duas vezes o fraco e calcular volumes usando a fórmula (comprimento x largura x profundidade) x (π / 6). Eutanásia animais 2 semanas após a última injecção e após sedação com uma solução de cetamina e dexmedetomidina, seguido por deslocação cervical. </li><li> Isolar tumores e seções mancha com H &amp; E para análise morfológica. </li><li> Para avaliar a distribuição de medicamentos em escala animal, usar um sistema de imagens de fluorescência. Injectar a Alexa Fluor 680 nano rotulado de drogas e de imagem em 24 e 48 horas. </li><li> Eutanásia do animal e detectar o fluorescence em tumores e órgãos isolados e perfundidos. </li></ol>

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	<li>Koboldt, D. C., Fulton, R. S., McLellan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumors.+Cancer+Genome+Atlas+Network.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumors. Cancer Genome Atlas Network.</a> Nature. 490, 61-70 (2012).</li><li>Kwong, L. N., Costello, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncogenic+NRAS+signaling+differentially+regulates+survival+and+proliferation+in+melanoma.">Oncogenic NRAS signaling differentially regulates survival and proliferation in melanoma.</a> Nat. Med. 18, 1503-1510 (2012).</li><li>Gerlinger, M., Rowan, A. J., Gerlinger, M., Rowan, A. 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Os autores Julia Y. Ljubimova, Keith L. Preto, e Eggehard Holler são acionistas da Arrogene Technology Inc.

A via experimental para a preparação de medicamentos de nano a partir de um polímero natural biodegradável é apresentado que possa ser usado na síntese de medicina personalizada. A descrição inicia-se com a produção controlada e purificação de ácido polymalic, que é uma plataforma versátil para a síntese de drogas nano. Usando técnicas reprodutíveis, o polímero é obtido com elevado peso molecular e em extrema pureza adequada para a síntese de produtos farmacêuticos. A síntese é descrita para uma droga nano que é mostrada para o tratamento eficaz do cancro da mama HER2-positivos. A descrição pode ser traduzida em síntese da maioria dos outros medicamentos nano para o tratamento de cancro. Direccionamento envolve anticorpos, tais como Herceptin que se ligam a um antigénio específico de tumor, tais como a proteína HER2 ou qualquer outro marcador de tumor que é eficientemente interiorizado. A droga nano proporciona uma selecção de oligonucleótidos anti-sentido e quimioterápicos que irá inibir eficientemente o crescimento do cancro sob tretamento. No exemplo, a ligação Herceptin para HER2 e recozimento oligonucleotídeo antisense específico com mRNA resultou no bloqueio sustentada de HER2-sinalização e redução grave de câncer de mama HER2-positivo de codificação HER2. Com base no princípio subjacente de segmentação tumor ea inibição da expressão gênica por oligonucleotídeos antisense temos a data sintetizados vários outros medicamentos nano e com sucesso inibido glioblastoma humano pré-clínico e triplo-negativo câncer de mama 11,14-18. O trabalho de síntese começa com a preparação de altamente purificada plataforma droga nano, que é ácido polymalic do sobrenadante da cultura de Physarum polycephalum (uma espécie de família &quot;fungo&quot;). A preparação enfatiza elevados pesos moleculares do polímero, permitindo que, em princípio, a ligação de vários anticorpos, péptidos, oligonucleótidos e outras moléculas que funcionam na entrega da droga activa e inibição do crescimento do tumor. Following a cultura controlada e purificação, qualidade reprodutível de polímero em rendimentos previsíveis foi produzido. O polímero é armazenado em condições convenientes para a qualquer momento. A síntese de conjugados de PMLA nano começando com a activação química dos carboxilatos de polímero-pendentes é realizada em alguns passos de síntese. Entre passos, a síntese pode ser opcionalmente colocados em espera que permite a preparação de quantidades arbitrárias de intermediários e, assim, pode ser utilizado na extrapolação. O progresso da síntese é seguida por TLC e os seg-HPLC, e tanto a composição e actividade da droga nano é controlado por ensaios específicos para grupos químicos quantitativo, ELISA, e uma variedade de medições físicas. Nossa experiência é que essas sínteses foram progrediu bem e reproduzível com excelentes rendimentos e pureza. Ao escolher a especificidade de anticorpos e anti-sentido oligonucleótidos qualquer variante de droga nano é sintetizado favoravelmente como necessário em eprsonalized medicina. As modalidades do sucesso do tratamento do câncer de mama HER2-positivo humano são representantes válidos para elaboração de modelos de câncer mouse, aplicação de medicamentos nano, imagem e análise do crescimento do tumor. Os resultados dos testes de viabilidade in vitro são úteis na escolha da linha de células e o líder da droga a ser utilizada na experiência animal. Xenogen imagiologia in vivo confirma que a droga nano é efectivamente entregues no tumor. Os resultados de western blotting revela se o nível de certas proteínas respondeu da maneira prevista durante o tratamento do câncer. Medição do tamanho do tumor informa sobre o sucesso do tratamento, ou seja, cerca de inibição, recessão ou de regressão. O exemplo descrito reflecte a nossa experiência com outras polymalic à base de ácido nano drogas indicando um elevado grau de previsibilidade e reprodutibilidade notável ausência de toxicidade. Os resultados recentes sobre a toxicidade ea eficácia de vários targeted conjugados de ácido polymalic para o tratamento triplo-negativo câncer de mama estão em forte apoio a esta hipótese 18. Uma característica fundamental é que nossa droga nano é capaz de penetrar bio-barreiras: a barreira endotelial por extravasamento para o interstício tumoral, a membrana da célula tumoral por captação endosome e ruptura da membrana endosome pela ação dos grupos etílico leucina ou trileucina. Extravasamento e absorção endosome são realizadas de forma confiável pelos anticorpos específicos associados à droga nano. Anticorpo para o receptor da transferrina anti-ratinho medeia influxo eficiente para o tumor por transcitose, provavelmente, porque o receptor está sobre-expresso na maioria dos vasos do tumor. Um anticorpo diferente ligado nas mesmas funções da molécula de conjugado em nano especificamente dirigir a droga nano na célula tumoral destinatário. A presença de ambos os anticorpos, o outro para a transcitose e o outro para a absorção do endossoma, é essencial para o funcionamento óptimo. A análise quantitativa de mácido álicos e anticorpo é altamente recomendado, a fim de controlar a composição ótima da droga nano. Finalmente, deve notar-se que a droga covalente nano tudo-em-um liberta o fármaco na forma quimicamente ligada rota através da vasculatura para o hospedeiro de células de tumor receptor. Fixação química torna a maioria das drogas inativo (pró-fármacos), até que sejam reconstituídos como medicamentos gratuitos por clivagem da plataforma conjugado nano no local alvejado. Isto é importante porque a modalidade reactivação fornece um alto grau de segurança durante a distribuição e a oportunidade mínima de evocar efeitos secundários nocivos. Versatilidade, eficácia e segurança são atributos indispensáveis ​​de um bom remédio personalizado.

Na era pós-genômica quando genomas de câncer já foram desvendados (Centro Nacional de Biotecnologia e The Cancer Genome Atlas), o tratamento futuro de câncer serão responsáveis ​​pela diversidade genética dos tumores, muitas vezes dentro de um mesmo tumor 1-4. Bioinformática e rápido, não é caro sequenciamento de DNA permite a aquisição de genes malignos / mutações em um nível pessoal 2,4,5. Uma vez que os genes foram identificados, os pacientes serão tratados com a medicina personalizada para modificar ou silenciar a expressão de genes malignas 6. A necessidade de atingir as células cancerosas e entregar drogas para essas células exige sistemas de entrega polifuncionais. Obviamente, as drogas nano pode atender a essa exigência 7. Em uma onda de afluência de descobertas as nanopartículas têm provado adequado para trazer cargas de fármacos quimioterapêuticos, proteínas e / ou de material geneticamente activa para células cancerosas. No entanto, os efeitos adversos continuam a ser advestida. Um deles relacionado com a ausência de biodegradabilidade pode causar deposição de material no tecido e órgãos saudáveis ​​com o risco de provocar doenças. Para minimizar a deposição, é introduzido ácido polymalic não-tóxico e não imunogénico, o que é de origem microbiana e biodegradável a H 2 O e CO 2 8. Nós usamos o polímero para sintetizar um tipo de droga nano covalente tudo-em-um. Ela contém substâncias quimioterápicas quimicamente ligados, como Temozolomida, doxorrubicina, ou oligonucleótidos anti-sentido e os grupos funcionais que servem extravasamento, segmentação do tecido, entrega endosomolytic. As drogas estão intrinsecamente separado da plataforma nano quando chegaram na célula tumoral alvo, regenerando assim a sua actividade farmacêutica integral. Descreve-se o método de produção microbiana da plataforma nano polímero, a sua purificação, e a síntese química de um fármaco que contém nano Trastuzumab (Herceptin) para o cancroA segmentação e um oligonucleótido anti-sentido para a inibição da sobreprodução de HER2. Ao aplicar o medicamento nano para HER2-positivo câncer de mama humano xenogénicos em camundongos nude, demonstramos alta eficácia do tratamento do câncer. Os princípios de direccionamento de tumor e o silenciamento do gene introduzido aqui para polymalic drogas nano ácido pode ser aplicado no tratamento de outros casos de cancro.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="935">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:263px;">Company</td>
			<td style="width:187px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:79px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-Mercapto-1-ethylamine (Cysteamine (2MEA)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">30078-25G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td colspan="2">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">90-Day release 17&#946;-estradiol pellet&#160;</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 680 C2 maleimide</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">A20344</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amberlite IR 120H</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">6428</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Antifoam Y-30 Emulsion</td>
			<td style="width:263px;">Sigam-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">A5758</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-laminin-411 chain mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-59980</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-pAkt mAb</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">9271S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-PARB mAb</td>
			<td style="width:263px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">556494</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-von Willebrand Factor antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td style="width:187px;">AB6994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Bacto Yeast Extract</td>
			<td style="width:263px;">Bacto, Dickinson/Sparks, MD</td>
			<td style="width:187px;">212720</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beta-actin</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">3700</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BT-474&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-20</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Calcium Carbonate</td>
			<td style="width:263px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:187px;">36337</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Proliferation Assay kit</td>
			<td>Promega, Madison, WI, USA</td>
			<td>PR-G3580</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centriplus 100&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td style="width:187px;">4414</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dicyclohexylcarbodimide</td>
			<td style="width:263px;">Fluka</td>
			<td style="width:187px;">36650</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">D5796</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eosin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-4</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Galardin (MMP-inhibitors)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling&#160;</td>
			<td style="width:187px;">2118</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxilin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-3</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Hemin from porcine</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">51280</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin</td>
			<td style="width:263px;">Genentech</td>
			<td style="width:187px;">15534</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin (Western blotting)</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">2165S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">IgG2a-kappa murine malignoma</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">M77695X5m</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-Star AP Substrate Pack</td>
			<td style="width:263px;">Biorad</td>
			<td style="width:187px;">170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-StarTM AP Substrate Pack&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">LAL Reagent water&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Lonza, MD</td>
			<td style="width:187px;">W50-1000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminin-411 mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leucine ethyl ester (LOEt)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">61850-10G-F</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Limulus Amebocyte Lysate (LAL) PYROGENT-5000 tests</td>
			<td style="width:263px;">Cambrex BioScience</td>
			<td style="width:187px;">N384</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Lissamin-Morpholino AON</td>
			<td style="width:263px;">Gene Tools</td>
			<td style="width:187px;">Custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-malic acid&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M6413</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Malate dehydrogenase&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M2634</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mal-PEG-Mal</td>
			<td style="width:263px;">Laysan</td>
			<td style="width:187px;">mal-PEG-mal-3400</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">354248</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Milk, nonfat powdered&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Proteomics</td>
			<td>M203-10G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Morpholino oligonucleotides&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GeneTools</td>
			<td style="width:187px;">custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">mPEG5000</td>
			<td style="width:263px;">Lysan</td>
			<td style="width:187px;">mPEG-NH2-5000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-hydroxysuccinimde (NHS)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ACROS Organics</td>
			<td style="width:187px;">15727100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Ninhydrin</td>
			<td style="width:263px;">Merck</td>
			<td style="width:187px;">1.06762.0100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich, 0.45 &#181;m&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Novex &#174; Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC3675</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Nude Mice [Tac:Cr:(MCr)-Foxnnm]&#160;</td>
			<td>Taconic</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 10x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">10010-49</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 1x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">70013</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PD-10 desalting columns</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0851</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Physarum polycephalum M3CVII</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>204388</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce BCA protein assay&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:187px;">23225</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:263px;">Roche</td>
			<td style="width:187px;">1.18362E+11</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protein Detector ELISA Kit</td>
			<td style="width:263px;">KPL</td>
			<td style="width:187px;">54-62-18</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-25 superfine</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0031</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-75&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0050</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex-LH20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0090</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SKBR-3&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-30</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPDP</td>
			<td style="width:263px;">Proteochem&#160;</td>
			<td style="width:187px;">C1116</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streamline-DEAE</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Styryl Red FM 1-43&#160;</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:187px;">T-3163</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TBS 10x</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-6435</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCEP</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">C4706-2G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TLC, silica coated aluminia sheets</td>
			<td style="width:263px;">Merck, Darmstadt, DE</td>
			<td style="width:187px;">60F254</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trileucine (LLL)</td>
			<td style="width:263px;">Bachem</td>
			<td style="width:187px;">H-3915</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-114&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">X114</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween&#174;20&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vivaspin 20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">VWR</td>
			<td style="width:187px;">14005-302</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:407px;">DAPI</td>
			<td style="width:263px;">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexmedetomidine</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Atipamezole</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carprofen</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine</td>
			<td style="width:263px;">Foster and Smith, Wisconsin</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polymalic acid-based nano biopolymers for targeting of multiple tumor markers: an opportunity for personalized medicine?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this diversity, personalized medicine is developed for silencing malignancy associated genes. Nano drugs fit these needs by targeting tumor and delivering antisense oligonucleotides for silencing of genes. As drugs for the treatment are often administered repeatedly, absence of toxicity and negligible immune response are desirable. In the example presented here, a nano medicine is synthesized from the biodegradable, non-toxic and non-immunogenic platform polymalic acid by controlled chemical ligation of antisense oligonucleotides and tumor targeting molecules. The synthesis and treatment is exemplified for human Her2-positive breast cancer using an experimental mouse model. The case can be translated towards synthesis and treatment of other tumors.

Watch this Scientific Journal Video about Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine? at JoVE.com

Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

À base de ácido Polymalic Nano Biopolímeros para Segmentação de múltiplos marcadores tumorais: uma oportunidade para a medicina personalizada?

Um exemplo de uma droga baseada em nano ácido polymalic é apresentado para o desenho racional de medicina personalizada que é aplicável para o cancro. Ela descreve a síntese de um fármaco nano para tratar o cancro da mama humano HER2-positivos em um ratinho nu.

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

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Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While ...

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