Name: large-scale gene knockdown in c. elegans using dsrna feeding libraries to generate robust loss-of-function phenotypes
Uploaded: 2013-09-25T19:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes at JoVE.com

Эта работа была поддержана за счет средств Национального института здравоохранения MH097163. Некоторые штаммы были предоставлены CGC, который финансируется по NIH Управления научно-исследовательских программ в области инфраструктуры (P40-OD010440).

Примечание: Этот протокол может быть использован, чтобы идентифицировать гены, необходимые для различных биологических процессах в различных типах тканей. В качестве контроля необходимо качества во время экрана, животные питаются как положительные, так и отрицательные контроль?...

<ol>
	<li>Mello, C. C., Conte, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revealing+the+world+of+RNA+interference.">Revealing the world of RNA interference.</a> Nature. 431 (7006), 338-342 (2004).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391 (6669), 806-811 (1998).</li><li>Tabara, H., Grishok, A., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+in+C.+elegans:+soaking+in+the+genome+sequence.">RNAi in C. elegans: soaking in the genome sequence.</a> Science. 282 (5388), 430-431 (1998).</li><li>Timmons, L., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+interference+by+ingested+dsRNA.">Specific interference by ingested dsRNA.</a> Nature. 395, 854 (1998).</li><li>Jose, A. M., Smith, J. J., Hunter, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Export+of+RNA+silencing+from+C.+elegans+tissues+does+not+require+the+RNA+channel+SID-1.">Export of RNA silencing from C. elegans tissues does not require the RNA channel SID-1.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 106, 2283-2288 (2009).</li><li>Kamath, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi.">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421 (6920), 231-237 (2003).</li><li>Rual, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+improving+Caenorhabditis+elegans+phenome+mapping+with+an+ORFeome-based+RNAi+library.">Toward improving Caenorhabditis elegans phenome mapping with an ORFeome-based RNAi library.</a> Genome Res. 14, 2162-2168 (2004).</li><li>Simmer, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+RNAi+of+C.+elegans+using+the+hypersensitive+rrf-3+strain+reveals+novel+gene+functions.">Genome-wide RNAi of C. elegans using the hypersensitive rrf-3 strain reveals novel gene functions.</a> PLoS Biol. 1, 77-84 (2003).</li><li>Lee, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+RNAi+screen+identifies+a+critical+role+for+mitochondria+in+C.+elegans+longevity.">A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity.</a> Nat. Genet. 33 (1), 40-48 (2003).</li><li>Sieburth, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+analysis+of+genes+required+for+synapse+structure+and+function.">Systematic analysis of genes required for synapse structure and function.</a> Nature. 436 (7050), 510-517 (2005).</li><li>Kamath, R. S., Martinez-Campos, M., Zipperlen, P., Fraser, A. G., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+specific+RNA-mediated+interference+through+ingested+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Effectiveness of specific RNA-mediated interference through ingested double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Biol. 2 (1), (2001).</li><li>Hodgkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotype,+ploidy,+and+gene+dosage.">Karyotype, ploidy, and gene dosage.</a> WormBook. , 1-9 (2005).</li><li>Kennedy, S., Wang, D., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conserved+siRNA-degrading+RNase+negatively+regulates+RNA+interference+in+C.+elegans.">A conserved siRNA-degrading RNase negatively regulates RNA interference in C. elegans.</a> Nature. 427 (6975), 645-649 (2004).</li><li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+misexpression+of+germline+P+granules+and+enhanced+RNA+interference+in+retinoblastoma+pathway+mutants.">Somatic misexpression of germline P granules and enhanced RNA interference in retinoblastoma pathway mutants.</a> Nature. 436 (7050), 593-597 (2005).</li><li>Lackner, M. R., Nurrish, S. J., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facilitation+of+synaptic+transmission+by+EGL-30+Gqalpha+and+EGL-8+PLCbeta:+DAG+binding+to+UNC-13+is+required+to+stimulate+acetylcholine+release.">Facilitation of synaptic transmission by EGL-30 Gqalpha and EGL-8 PLCbeta: DAG binding to UNC-13 is required to stimulate acetylcholine release.</a> Neuron. 24 (2), 335-346 (1999).</li><li>Bastiani, C. A., Gharib, S., Simon, M. I., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+Galphaq+regulates+egg-laying+behavior+via+a+PLCbeta-independent+and+serotonin-dependent+signaling+pathway+and+likely+functions+both+in+the+nervous+system+and+in+muscle.">Caenorhabditis elegans Galphaq regulates egg-laying behavior via a PLCbeta-independent and serotonin-dependent signaling pathway and likely functions both in the nervous system and in muscle.</a> Genetics. 165 (4), 1805-1822 (2003).</li><li>Lickteig, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neurotransmitter+vesicles+by+the+homeodomain+protein+UNC-4+and+its+transcriptional+corepressor+UNC-37/groucho+in+Caenorhabditis+elegans+cholinergic+motor+neurons.">Regulation of neurotransmitter vesicles by the homeodomain protein UNC-4 and its transcriptional corepressor UNC-37/groucho in Caenorhabditis elegans cholinergic motor neurons.</a> J. Neurosci. 21 (6), 2001-2014 (2001).</li><li>Terami, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+organization,+expression,+and+analysis+of+the+troponin+C+gene+pat-10+of+Caenorhabditis+elegans.">Genomic organization, expression, and analysis of the troponin C gene pat-10 of Caenorhabditis elegans.</a> J Cell Biol. 146 (1), 193-202 (1999).</li><li>Novelli, J., Page, A. P., Hodgkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C+terminus+of+collagen+SQT-3+has+complex+and+essential+functions+in+nematode+collagen+assembly.">The C terminus of collagen SQT-3 has complex and essential functions in nematode collagen assembly.</a> Genetics. 172 (4), 2253-2267 (2006).</li><li>Brundage, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+a+C.+elegans+Gqalpha+gene+disrupt+movement,+egg+laying,+and+viability.">Mutations in a C. elegans Gqalpha gene disrupt movement, egg laying, and viability.</a> Neuron. 16 (5), 999-1009 (1996).</li><li>G&#246;nczy, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomic+analysis+of+cell+division+in+C.+elegans+using+RNAi+of+genes+on+chromosome+III.">Functional genomic analysis of cell division in C. elegans using RNAi of genes on chromosome III.</a> Nature. 408 (6810), 331-336 (2000).</li><li>Miller, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=elegans+unc-4+gene+encodes+a+homeodomain+protein+that+determines+the+pattern+of+synaptic+input+to+specific+motor+neurons.">elegans unc-4 gene encodes a homeodomain protein that determines the pattern of synaptic input to specific motor neurons.</a> Nature. 355, 841-845 (1992).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+Caenorhabditis+elegans+unc-4+gene+alter+the+synaptic+input+to+ventral+cord+motor+neurons.">Mutations in the Caenorhabditis elegans unc-4 gene alter the synaptic input to ventral cord motor neurons.</a> Nature. 355, 838-841 (1992).</li><li>Johnson, N. M., Behm, C. A., Trowell, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heritable+and+inducible+gene+knockdown+in+C.+elegans+using+Wormgate+and+the+ORFeome.">Heritable and inducible gene knockdown in C. elegans using Wormgate and the ORFeome.</a> Gene. 359, 26-34 (2005).</li><li>Wani, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=D1+dopamine+receptor+signaling+is+modulated+by+the+R7+RGS+protein+EAT-16+and+the+R7+binding+protein+RSBP-1+in+Caenoerhabditis+elegans+motor+neurons.">D1 dopamine receptor signaling is modulated by the R7 RGS protein EAT-16 and the R7 binding protein RSBP-1 in Caenoerhabditis elegans motor neurons.</a> PLoS One. 7 (5), e37831 (2012).</li><li>Beifuss, K. K., Gumienny, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+screening+to+identify+postembryonic+phenotypes+in+C.+elegans.">RNAi screening to identify postembryonic phenotypes in C. elegans.</a> J. Vis. Exp. (60), e3442 (2012).</li></ol>

Мы описали протокол, который использует имеющийся в продаже библиотеку подачи дсРНК выполнять крупномасштабные экраны в С. Элеганс. Мы предоставляем все инструкции, чтобы дублировать библиотеку и использовать ее эффективно. Показано, что этот подход может идентифицировать гены, ...

Исторически, генетические экраны в С. Элеганс были выполнены лечении животных с химическим мутагеном, таким как этиловый метансульфонат, чтобы создать случайные мутации в ДНК. Потомство или grandprogeny из мутагенизированных животных затем выделяют, которые проявляют желаемую аномальный фенотип. Мутация ответственность за причинение фенотип затем определены в ходе процедуры отображения трудоемкого или путем секвенирования всего генома мутантного червя. Есть много преимуществ для выполнения таких экранов химического мутагенеза, поскольку они создают постоянные поражения в червя генома, которые могут привести в обоих усиления из-функции и с потерей функции фенотипов, но процедура отображение медленный и дорогой. Двухцепочечная РНК-интерференция (dsRNAi) предоставляет альтернативный способ для выявления генов, участвующих в важных биологических процессов. В этом методе, дцРНК соответствующие кодирующую последовательность эндогенного гена вводят в червя.ДсРНК обрабатывается в естественных условиях для создания небольших (21-22 нуклеотидов) РНК, которые служат направляющие, чтобы найти и связать подходящие эндогенных мРНК, ориентации их для уничтожения 1. Эта процедура является относительно быстро, а потому, что дсРНК цели мРНК, а не ДНК, только сокращение-из-функции фенотипы наблюдаются при использовании этого подхода. Введение дцРНК в животное может быть достигнуто путем прямой инъекции дцРНК 2, путем замачивания животных в дцРНК 3, или по кормлению животных бактерий, которые экспрессируют дцРНК 4. Каждый из этих способов доставки вызывать системные нокдаун эффекты как большинство клетки животного выразить SID-1, трансмембранный канал, способный импорта дсРНК 5. Первоначально использовалась как обратной генетики подхода к нокдаун экспрессию отдельных генов по одному, развитие двух библиотек кормления теперь разрешает масштабные генетические экраны. В коммерчески доступные дцРНК библиотеки содержат баcterial клоны, представляющие либо 55% или 87% всех С. Элеганс гены 6, 7. К сожалению, крупномасштабные экраны dsRNAi кормления часто приводят к эффективности переменных бросовым 8-10. В то время как абсолютный уровень нокдауна по RNAi не так легко измерить, уменьшается эффективность наблюдается в нокдаун больших экранов шкала должна быть вызвана остаточных Гено-специфические мРНК, которые ускользают от деградации РНК-интерференции. Это, в свою очередь, может быть прямым результатом дсРНК потери плазмиды от бактерий, подаваемых на животных в этих экранов. Подтверждением этой идеи, животных, которых кормили смеси бактерий, в котором только 50% бактерий выразить дцРНК против гена-мишени, показывают резко сократилось (если таковые имеются) нокдаун эффекты по сравнению с контрольными кормили животных 11. Степень гена нокдаун становится критической проблемой при выполнении экраны dsRNAi как большинство генов в С. Элеганс являются haplosufficient и, таким образом экспрессия гена должна быть снижена не менее чем на 50% то вызвать с потерей функции фенотипы 12. Мы использовали ранее опубликованные протоколы кормления для выполнения крупномасштабных экраны и обнаружили те же самые изменяющиеся эффекты нокдаун, сообщенные другим 8-10. В поисках возможных причин, мы обнаружили, что почти 60% бактерий, подаваемых на животных в экране потерял плазмиды дсРНК. Мы разработали библиотеку дублирования и скрининга протокол, который резко уменьшает или устраняет потери плазмиды и значительно улучшает нокдаун эффективность. Этот протокол подходит для выполнения больших экранов масштабные в С. Элеганс и могут быть использованы для скрининга любой из коммерчески доступных библиотек дцРНК. Используя этот протокол, мы находим, что практически 100% бактерий, подаваемых на животных во время отображения экрана сохранить дсРНК-кодирования плазмиды и вызвать надежную и высоко проникающей потеря функции фенотипов во всех исследованных тканях.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagent/Material</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>96-well Falcon flat bottom plate </td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>353072</td>
 <td>sterile</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>adhesive foil</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>2923-0100</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nunc omniplate</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>267060</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2.0 ml deep 96-well polypropylene Masterblock</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>5678-0285</td>
 <td>autoclavable</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lids for deep well plates</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>5665-6101</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 ml combitips</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>4796-5000</td>
 <td>individually wrapped</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Reservoir</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>2977-8500</td>
 <td>autoclavable</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>12-well plates</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>CC7682-7512</td>
 <td>individually wrapped</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>dsRNA feeding library</td>
 <td>OpenBiosystems</td>
 <td>RCE1181</td>
 <td>store -80 &deg;C</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ampicillin</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>BP1760-5</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tetracycline</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>BP912-100</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Carbenicillin</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>allow 2-4 weeks for delivery <a href="http://www.biochemicaldirect.com" target="_blank">www.biochemicaldirect.com</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bacteriolgical Agar Ultrapure grade A </td>
 <td>Affymetrix</td>
 <td>10906</td>
 <td>for worm plates</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Brayer roller</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>9127-2940</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Boekel 96-pin replicator</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>05-450-9</td>
 <td>autoclavable</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>microshaker</td>
 <td>Thomas Scientific</td>
 <td>1231A93</td>
 <td>3 mm orbit</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>12 channel multichannel pipet (0.5-10 &mu;l)</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>7112-0510</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>12 channel multichannel pipet (30-300 &mu;l)</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>7112-3300</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Repeater Plus manual pipettor</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>4026-0201</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>

large-scale gene knockdown in c. elegans using dsrna feeding libraries to generate robust loss-of-function phenotypes

РНК-интерференция путем подачи черви бактерии, выражающие дцРНК был полезным инструментом для оценки функции гена в С. Элеганс. Хотя эта стратегия хорошо работает, когда небольшое число генов ориентированы на нокдаун, крупномасштабные экраны кормления показать эффективность переменных нокдаун, что ограничивает их полезность. Мы разобрали ранее опубликованные протоколы нокдаун RNAi и обнаружили, что основным источником уменьшенного нокдауна можно отнести к потере дцРНК-кодирующих плазмиды из бактерии, подаваемых на животных. На основании этих наблюдений, мы разработали протокол кормления дсРНК, что значительно уменьшает или устраняет потери плазмиды для достижения эффективного, высокую пропускную нокдаун. Мы показываем, что этот протокол будет производить надежные, воспроизводимые сбить из С. Элеганс гены в нескольких типов тканей, в том числе нейронов, и позволит эффективно нокдаун в больших экранах масштабных. Этот протокол использует имеющийся в продаже дсРНК кормлениебиблиотека и описывает все шаги, необходимые, чтобы дублировать библиотеку и выполнять экраны дцРНК. Протокол не требует использования какого-либо сложного оборудования и, следовательно, может быть выполнена любым С. Элеганс лабораторию.

P0 нокдаун фенотип начнут появляться через 2-3 дней кормления животных дсРНК выражая бактерии. Некоторые ранние фенотипы включают личинок арест и летальность и должны наблюдаться в 2-3% всех питающих скважин. Эти же фенотипы будут наблюдаться в поколения F1. Наличие F1 яйца, которые не вылуп...

Watch this Scientific Journal Video about Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes at JoVE.com

Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes

В то время как дсРНК кормления в С. Элеганс является мощным инструментом для оценки функции гена, настоящие протоколы для крупномасштабных экранов кормления привести к эффективности переменных бросовым. Мы описываем улучшенный протокол для выполнения крупномасштабных RNAi кормления экраны, что приводит к высокоэффективным и воспроизводимым нокдаун экспрессии генов.

Крупномасштабная Нокдаун гена в<em&gt; С. Элеганс</em&gt; Использование дцРНК кормления библиотек для генерации Прочные с потерей функции фенотипов

RNA interference by feeding worms bacteria expressing dsRNAs has been a useful tool to assess gene function in C. elegans. While this strategy works well ...

Research

JoVE Journal

Biology

Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries

Крупномасштабная Экраны метагеномных библиотеки

Metagenomic libraries archive large fragments of contiguous genomic sequences from microorganisms without requiring prior cultivation.  Generating a ...

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Генерация Стабильный Трансгенные Элеганс C. Использование Микроинъекция

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Использование автоматизированных счетчиков сотовый для упрощения исследования экспрессии генов: миРНК Нокдаун ИЛ-4 зависимости экспрессии генов в клетках Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Крупномасштабные данио рерио основе В естественных условиях Малый экран Молекула

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi скрининга для выявления Постэмбриональное фенотипы в С. Элеганс</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

Использование МЭСМ последовательности арест как средство изолировать Рибосома связанных полипептидов

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Использование РНК-опосредованного вмешательства стратегии кормления для выявления генов, участвующих в размерах тела регулированию в Нематода<em&gt; C. Элеганс</em

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

C. Элеганс Анализ хемотаксиса

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Antibody Staining in C. Elegans Using &quot;Freeze-Cracking&quot;

Antibody Staining in C. Elegans Using "Freeze-Cracking"

Антитела Окрашивание в<em&gt; С. Элеганс</em&gt; Использование &quot;Freeze-Крекинг&quot;

To stain C.  elegans with antibodies, the relatively impermeable cuticle must be  bypassed by chemical or mechanical methods.  "Freeze-cracking" is one ...

Methods to Assess Subcellular Compartments of Muscle in C. elegans

Methods to Assess Subcellular Compartments of Muscle in C. elegans

Методы оценки субклеточных отсеков Muscle в<em&gt; С. Элеганс</em

Muscle is a dynamic tissue that responds to changes in nutrition, exercise, and disease state. The loss of muscle mass and function with disease and age ...