Name: dissection and lateral mounting of zebrafish embryos: analysis of spinal cord development
Uploaded: 2014-02-28T13:00:00
Duration: 5 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development at JoVE.com

Skidmore Fakultet Development Grant finansiert utarbeidelse og publisering av dette manuskriptet.

En. Montering embryo (ved gjennomføring av Selected Visualisering Technique, som Immunocytochemistry, in situ hybridisering, etc.) <ol><li> Plasser embryo i en 35 mm petriskål fylt med buffer av valg (figur 1A). Valget av buffer er basert på merkningsmetode. Vanligvis PBS-basert buffere er egnet. </li><li> Under en dissekere mikroskop, og ved hjelp av tang, sikre hodet med en pinsett mens du trekker plommen unna med det andre paret (Figur 1B). Alternativt kan du bruke et insekt pin i et insekt pin holder å dra forsiktig bort plommen. </li><li> Ved hjelp av embryoet poker (fiskesnøre (0,41 mm diameter) festet til enten et kapillarrør eller en Pasteur-pipette) beveger embryoene som en del av petriskålen som ikke har mye plomme rusk (figurene 1C-D). </li><li> Ved hjelp av et glass Pasteur pipette, aspirer embryoene i så lite væske som mulig, og gently pipettere dem inn på et lysbilde (figur 1E). </li><li> Forsiktig veken vekk overflødig væske ved hjelp av et laboratorium tørk. Unngå kontakt med embryoer. </li><li> Tilsett en dråpe av monteringsmedium til embryoer. For fluorescerende etiketter, bruke en antifade reagens av valget. For kolorimetriske signaler, kan 70% glyserol anvendes som et monteringsmedium. </li><li> Bruk av embryo poker, orientere embryoene på sine sider i rader (Figur 1F). </li><li> Legg en &quot;skvett&quot; med vaselin eller høyt vakuum fett til hvert hjørne av et dekkglass (figur 1G). Dette forhindrer skade av embryo fra overdreven komprimering. </li><li> Plasser dekkglass (vaselin side ned) på toppen av embryoer (Figur 1H). </li><li> Forsiktig på dekkglass på hvert hjørne før montering media (70% glyserol eller anti-fade montering reagens) berører dekkglass (figur 1H). </li><li> Tilsett om nødvendig mer montering media ved å pipettere rett ved siden av coverslip, ved hjelp av en pipette i området fra 20 til 200 ml. Det vil veke etter. </li><li> Ved hjelp av et laboratorium tørk, helt rent rundt dekkglass. Vær sikker på å ikke legge trykk på dekkglass, da dette vil skade fostre. Dette området må være tørre og har ingen vaselin eller montering media på det. </li><li> Bruk neglelakk for å forsegle rundt kanten av dekkglasset (Figur 1I). </li></ol>

<ol>
	<li>Gribble, S. L., Nikolaus, O. B., Dorsky, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+function+of+Dbx+genes+in+the+zebrafish+spinal.">Regulation and function of Dbx genes in the zebrafish spinal.</a> Dev. Dyn. 236 (12), 3472-3483 (2007).</li><li>Bonner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midline+crossing+is+not+required+for+subsequent+pathfinding+decisions+in+commissural+neurons.">Midline crossing is not required for subsequent pathfinding decisions in commissural neurons.</a> Neural Dev. 7 (1), 18 (2012).</li><li>Ross, A. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Wnt+signaling+using+Lithium+Chloride:+Inquiry-Based+Undergraduate+Laboratory+Exercises.">Activation of Wnt signaling using Lithium Chloride: Inquiry-Based Undergraduate Laboratory Exercises.</a> Zebrafish. , (2012).</li><li>Bonner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+and+patterning+are+mediated+independently+in+the+dorsal+spinal+cord+downstream+of+canonical+Wnt+signaling.">Proliferation and patterning are mediated independently in the dorsal spinal cord downstream of canonical Wnt signaling.</a> Dev. Biol. 313 (1), 398-407 (2008).</li><li>Gribble, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tcf3+inhibits+spinal+cord+neurogenesis+by+regulating+sox4a+expression.">Tcf3 inhibits spinal cord neurogenesis by regulating sox4a expression.</a> Development. 136 (5), 781-789 (2009).</li><li>England, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+Hedgehog+pathway+components+and+retinoic+acid+signalling+in+specifying+zebrafish+ventral+spinal+cord+neurons.">Roles of Hedgehog pathway components and retinoic acid signalling in specifying zebrafish ventral spinal cord neurons.</a> Development. 138 (23), 5121-5134 (2011).</li><li>Challa, A. K., Beattie, C. E., Seeger, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+roundabout+orthologs+in+zebrafish.">Identification and characterization of roundabout orthologs in zebrafish.</a> Mech Dev. (1-2), 101-101 (2001).</li><li>Lee, J. S., Ray, R., Chien, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+expression+of+three+zebrafish+roundabout+homologs+suggest+roles+in+axon+guidance+and+cell.">Cloning and expression of three zebrafish roundabout homologs suggest roles in axon guidance and cell.</a> 221 (2), 216-230 (2001).</li><li>Downes, G. B., Waterbury, J. A., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+in+vivo+labeling+of+identified+zebrafish+neurons.">Rapid in vivo labeling of identified zebrafish neurons.</a> Genesis. 34 (3), 196-202 (2002).</li><li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch-regulated+oligodendrocyte+specification+from+radial+glia+in+the+spinal+cord+of+zebrafish+embryos.">Notch-regulated oligodendrocyte specification from radial glia in the spinal cord of zebrafish embryos.</a> Dev. Dyn. 237 (8), 2081-2089 (2008).</li><li>Sylvain, N. J., Brewster, D. L., Ali, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryos+exposed+to+alcohol+undergo+abnormal+development+of+motor+neurons+and+muscle+fibers.">Zebrafish embryos exposed to alcohol undergo abnormal development of motor neurons and muscle fibers.</a> Neurotoxicol. Teratol. 32 (4), 472-480 (2010).</li><li>de Soysa, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macondo+crude+oil+from+the+Deepwater+Horizon+oil+spill+disrupts+specific+developmental+processes+during+zebrafish+embryogenesis.">Macondo crude oil from the Deepwater Horizon oil spill disrupts specific developmental processes during zebrafish embryogenesis.</a> BMC Biol. 10 (40), (2012).</li><li>Langenberg, T., Brand, M., Cooper, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+brain+development+and+organogenesis+in+zebrafish+using+immobilized+embryonic+explants.">Imaging brain development and organogenesis in zebrafish using immobilized embryonic explants.</a> Dev Dyn. 228 (3), 464-474 (2003).</li><li>Deschene, E. R., Barresi, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Targeted+Embryonic+Chimeras:+Zebrafish+Gastrula+Cell+Transplantation.">Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation.</a> J. Vis. Exp. (31), (2009).</li></ol>

Ingen konkurrerende økonomiske interesser eksisterer for enten forfatter.

Lateral montering av faste sebrafisk embryo hjelpemidler visualisering av ryggmarg utvikling. Ved fjerning av plomme ball, er arbeidsavstanden som kreves for eksepsjonell mikroskopisk avbildning reduseres. Våre representative resultater ble begrenset til 24 HPF stadium, kan imidlertid denne teknikken benyttes så tidlig som 18 HPF, skjønt tidligere embryoer er vanskeligere å dissekere på grunn av størrelsen av embryoet og skjørheten av vevet. Denne teknikken er også aktuelt å fostre eldre enn 24 HPF. Med hjelp av den optiske klarhet i embryonale sebrafisk, evnen til å utføre termin genetiske skjermer, revers genetikk, og transgene nærmer seg, kan flere utviklingsprosesser bli undersøkt. Dette inkluderer mitotiske indekser av nevrale stamceller med markører som BrdU og anti-fosfor-histone 4 til 6 mars og mønster gjennom uttrykk for nevronale og gliaceller progenitor markører i pax, nkx, dbx, og olig Familiers 1,4-6. Reagenser som rapporterer glial og neuronal-bestemmelse (eksempel glial fibrillary syreprotein (GFAP) og HUC / D) 1,4,5,10 kan benyttes. Nevronale subtype differensiering kan analyseres gjennom uttrykk for holme, VSX, engrailed, og gata gener 1,4-6. Og til slutt, er analyse av axon veiledning mulig gjennom antistoffer som anti-acetylert tubulin, 3A10, og znp-en 2,11,12. Selv om andre vertebrate modellsystemer (mus og kylling) blir brukt til å studere ryggmarg utvikling, bare den sebrafisk tillater samtidig visning av alle utviklings akser i intakt embryo. Den åpenbare begrensningen for denne tilnærmingen er at embryoene er løst, noe som utelukker direkte avbildning. Faktisk fjernet (eller skade) eggeplomme fører til hurtig død embryonale, og dermed er det ikke mulig å redusere arbeidsavstanden i levende embryoer ved hjelp av denne teknikk. Men høy forstørrelse spinal cord bildebehandling i levende embryoer er mulig. For å bevare plommen under live bildebehandling, kan embryo plasseres i depresjon lysbilder, som gir et større mellomrom mellom prøven og dekkglass. Alternativt kan flere 22 mm x 22 mm Dekk limes på enten lysbilde av et tre i x 1 i mikroskopisk lysbilde. Dekk tjene som en &quot;bro&quot; for den overliggende dekkglass. Hvis embryoer er eldre enn 18 HPF, er Tricaine brukt til å bedøve embryoer for å hindre bevegelse. Mens en arbeidsavstand på 0.288 mm er nødvendig for deyolked embryoer på 24 HPF, når du arbeider med levende embryoer innebygd i agarose, med intakte plommer, er nok et mikroskopisk linse med en arbeidsavstand på 3,3 mm. Alternativt kan eksplantering kulturer som stammer fra deyolked embryoer bli visualisert ved hjelp av en plasma blodpropp immobiliseringsteknikken 13. Forskjellige grupper av celler kan observeres ved bruk av genetisk kodede fluorescerende proteiner som GFP, mCherry eller Photoconkonvertible fargestoff Kaede (for å nevne noen). Videre kan fluorescensmerkede celler i løpet av kimære embryoer også sees med denne tilnærmingen 14. En konsekvent monteringsteknikk som er stabil i flere måneder er et kritisk verktøy for utviklings-og cellebiologer. Denne enkle teknikken er reproduserbar, noe som gir enkel sammenligning mellom ulike eksperimentelle studier. Videre justering av embryoer i rader lett tillater identifisering av spesifikke embryoer for senere analyse.

Visualisering av ryggmargen i sebrafisk hemmes av en rekke faktorer. På grunn av tykkelsen av de overliggende somites og den indre beliggenheten av ryggmargen, er en betraktelig lang arbeidsavstand som kreves for høy cellulær oppløsning. Plomme ball (som fortsatt er til stede under tidlige stadier av neurogenesis) ytterligere øker arbeidsavstanden som kreves, og blir lett skadet etter press fra et dekkglass. I tillegg, rusk fra skadede plomme forbyr klar visualisering av vev. Selv om tverrsnitt i dorso-ventral (DV) aksen er mulig, har de ikke lett tillate samtidig visualisering i anterior-posterior (AP) aksen en. For å overvinne disse hindringene, er embryoer dissekert og montert på lysbilder. Denne fremgangsmåten gir flere fordeler. Først, sebrafisk embryo lett ligge med den laterale siden vendt oppover, noe som letter AP aksen visualisering. For det andre, fjerning av plomme ball reduserer den nødvendige arbeidsavstand, og begrenser rusk. Tredje, gir dette monteringsprosedyre for både fluorescerende og lysfelt mikroskopi. Fjerde, montert embryoer er stabil i flere måneder ved 4 ° C, slik at langvarig prøven visualisering. Endelig forekommer progresjon av utviklingen ved at fremre segmenter er mer modne enn bakre segmenter. For å sikre at iscenesatt matchet spinal hemisegments sammenlignes mellom embryoer, er liggende somitt vev som brukes som en veiledning. For eksempel ligger over den tiende mest posterior somitt den tiende spinal hemisegment, som er utviklingsmessig tilsvarende i scene-matchet embryoer. Denne monteringsmåten av intakte fostre gir enkel identifisering av somites. Vi bruker genetikk og gen knock-down teknologier for å studere mekanismene for axon veiledning i utviklingsryggmargen. Spesielt har vi fastslått at robo2, robo3 og DCC er nødvendig for commissural Primær ascending (COPA) axon pathfinding. Bruke påsettingsprosedyren beskrevet her, var vi i stand til å undersøke ventral vekst, midtlinjen krysset, commissure bredde, rygg-og anterior vekst 2,3. Denne monteringsmåten kan også anvendes på DV-eller AP mønster av ryggmargen. Vi har brukt denne fremgangsmåten for å finne ut ulike roller nedstrøms Wnt effektorer i DV fordelingen av ryggmargen. Ved hjelp av denne montering, var vi i stand til å oppnå en løsning på DV-markører på celle-nivå, og bestemme minutt mønster skift som følge av endrede Wnt signalmottak 4,5. Denne monteringsmåten gir også mulighet for mitotiske indeksen beregningen gjennom anti-phosphohistone tre eller BrdU merking (stamfar spredning) differensiering fem.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			Petri dishes 35mm X 10mm
			</td>
			<td style="width:115px;">
			VWR
			</td>
			<td style="width:116px;">
			25373-041
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			Dumont Forceps #3
			</td>
			<td style="width:115px;">
			Fisher Scientific
			</td>
			<td style="width:116px;">
			NC9839169
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			Cover glass
			</td>
			<td style="width:115px;">
			Fisher Scientific
			</td>
			<td style="width:116px;">
			12-541-B22X22-1.5
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			Slides
			</td>
			<td style="width:115px;">
			Fisher Scientific
			</td>
			<td style="width:116px;">
			12-550-343
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			SlowFade Gold
			</td>
			<td style="width:115px;">
			Fisher Scientific
			</td>
			<td style="width:116px;">
			S36936
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			ProLong Gold
			</td>
			<td style="width:115px;">
			Life Technologies
			</td>
			<td style="width:116px;">
			P36934
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			Petroleum Jelly
			</td>
			<td style="width:115px;">
			Any grocery store
			</td>
			<td style="width:116px;">
			 
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			Loop Holders
			</td>
			<td style="width:115px;">
			VWR
			</td>
			<td style="width:116px;">
			80094-482
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			Insect Pins
			</td>
			<td style="width:115px;">
			Fine Science Tools
			</td>
			<td style="width:116px;">
			26002-10
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:132px;">
			Nickel Plated Pin Holders
			</td>
			<td style="width:115px;">
			Fine Science Tools
			</td>
			<td style="width:116px;">
			26016-12
			 
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
 
 
 
 
 
 
<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:118px;">
			Name of Equipment
			</td>
			<td style="width:118px;">
			Company
			</td>
			<td style="width:118px;">
			Catalog number
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:118px;">
			Olympus Stereo microscope
			</td>
			<td style="width:118px;">
			Olympus
			</td>
			<td style="width:118px;">
			SZ61
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and lateral mounting of zebrafish embryos: analysis of spinal cord development

Den sebrafisk ryggmargen er en effektiv unders modell for nervesystemet undersøkelser av flere grunner. For det første kan genetisk, transgene og genet knockdown tilnærminger benyttes for å undersøke de molekylære mekanismer som ligger til grunn nervesystemet utvikling. For det andre, store klørne til utviklingshemmede synkronisert embryoer gir store eksperimentelle utvalgsstørrelser. Tredje, den optiske klarhet i sebrafisk embryo tillater forskere å visualisere stamfar, glial, og nevronale populasjoner. Selv om sebrafisk embryo er gjennomsiktige, kan prøven tykkelse hindre effektiv mikroskopisk visualisering. En årsak til dette er den tandem utvikling av ryggmargen og liggende somitt vev. En annen grunn er den store eggeplomme ball, som fortsatt er til stede i perioder med tidlig neurogenesis. I denne artikkelen viser vi microdissection og fjerning av eggeplomme i faste embryoer, som tillater mikroskopisk visualisering samtidig bevare rundt somitt vev. Vi also demonstrere semipermanent montering av embryoer sebrafisk. Dette tillater observasjon av neurodevelopment i dorso-ventrale og anterior-posterior akser, som det bevarer tredimensjonalitet av vevet.

Når belyse mekanismene som ligger til grunn for ulike utviklings arrangementer som cellular mønster, differensiering, og axon veiledning, er det viktig å være i stand til å visualisere celler innenfor rammen av deres vev. Dorsoventral mønster defekter typisk stede som en ventral eller rygg skift i uttrykket domenet av transkripsjonsfaktorer i pax, nkx, eller dbx familier fire. Til tider kan endringer være subtile, bestående av bare noen få celle diameter 4. Tverrsnitt-analyse tillater denne type analyse. Imidlertid kan reagenser med svakere signaler, eller tverrsnitt som ikke er vinkelrett på AP aksen begrense tolkning. Videre betyr tverrsnittsanalyse ikke lett ta hensyn til om endringene vedvarer i AP-aksen, og er avhengig av tilgjengeligheten av en kryostat. Denne begrensningen er omgått ved sidevisninger i ryggmargen. Som vist i figur 2B, er nkx6.1 mRNA distributed i omtrent ventral halvparten av ryggmargen på 24 timers post-fertilisering (HPF), innenfor stamfar domenet. Stamceller kan skjelnes fra stolpen mitotiske celler på grunn av tilstedeværelsen av gulvplaten, som er funnet i den mediale del av ryggmargen. Sett med DIC optikk, individuelle celler skiller seg klart, og en definert grense mellom å uttrykke og nonexpressing celler er tydelig. Stamcellesyklus utgang er ledsaget av endringer i genekspresjon. For eksempel, alle post-mitotiske nevroner uttrykke HUC / D som er synlig med immunocytochemistry 1,5. mRNA prober for holme, gata, og VSX familier merke spesifikke post-mitotiske nevroner av konsekvent posisjon og nummer innenfor hver ryggmarg hemisegment seks. I tillegg er axon lede reseptorer slik som de i robo familien uttrykt i begrensede populasjoner av postmitotic neuroner (figur 2C) <sup&gt; 2,7,8. Lateral montering av embryo gir nøyaktige tellinger av post-mitotiske nevroner. På samme måte kan progenitorer som fortsetter å dele seg kvantifiseres med anti-fosfo-histon-3 immunocytokjemi og BrdU-merking. Videre kan celledød vurderes med TUNEL merking 4-6. På 24 HPF, kan axons av følgende postmitotic nevroner bli visualisert med ulike metoder, og er gjenkjennelig på celle-nivå: Dorsal Lateral Stigende (Døla), commissural Primary Stigende (COPA), commissural Sekundær Stigende (Cosa), ventral Langsgående Synkende (Veld), Kolmer-Agdur (KA), commissural bifurcating / Langsgående (COB / L), Omkrets Stigende (CiA), Omkrets Synkende (CID) og unipolar commissural Synkende (UCoD), Rohon-Beard (RB), motoneurons ( M) 9. Axoner strekker seg fra disse nevronene i rygg, ventral, anterior og posterior retninger. De gren, krysser midtlinjen, og gå ut av både ryggog ventral ryggmargen. Når dette kombineres med konfokal laser scanning mikroskopi, disse varierte cellulære atferd er tydelig i sideveis montert embryoer, bruker immunocytochemistry og genetisk kodet fluorescerende proteiner som GFP to. I figur 2D, ble znp-en immunocytochemistry brukes til å merke utviklings motoneurons. Motoneurons ut av ryggmargen ventrally å innerverer den omkringliggende utvikle muskulaturen. <img alt="Figur 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50703/50703fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50703/50703fig1.jpg" width="500px" /> Figur 1. Disseksjon og lateral montering av sebrafisk embryoer. (A) Etter behandling for immunfluorescens, in situ hybridisering, etc., blir embryoene plassert i en 35 mm petriskål fylt med PBT (PBS med 0,5% Triton X-100) eller Ptw (PBS med 0,1% Tween-20). Eggeplommeball (YB) er tydelig. (B) Den plomme fjernet ved å sikre at hodet av embryoet, etterfulgt av forsiktig disseksjon. (C) Et embryo poker (snøret limt til en Pasteur-pipette) blir brukt til å skille befruktede egg og eggeplomme avfall (D). Rensede embryoer blir pipettert på et objektglass (E) og innrettet (F). (G) Vaselin brukes på hjørnene av dekkglass. (H) for dekkglass plasseres forsiktig på toppen av embryoene i monteringsmedium. (I) Neglelakk brukes til å forsegle kantene av dekkglass. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/50703/50703fig1highres.jpg" target="_blank">Klikk her for å se større bilde</a> . <img alt="Fig. 2" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50703/50703fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50703/50703fig2.jpg" width="500px" /> &lt;<html> strong&gt; Figur 2. Analyse av genuttrykk mønstre og axon pathfinding i lateralt montert sebrafisk embryo. (A) Tegning av en sebrafisk embryo ved 24 HPF. I BD, er omtrent fire hemisegments over plommesekken forlengelse visualisert (eske området). (B) nkx6.1 er uttrykt i ventral ryggmarg, inklusive bunnplaten (FP). (C) robo3 er uttrykt i postmitotic nevroner (PMN). En gulvplate og stamfar sone er ikke tydelig i denne mer lateral fokusplan. I B, C, er ryggmargen er avgrenset av en brakett på den venstre side av bildet. (D) Konfokalmikroskopi ble brukt til bilde znp-en immunfluorescens, hvilke etiketter motoriske axoner spennende ryggmargen ventrally. I alle bildene, er anterior til venstre og rygg er opp. En 40X lang arbeidsavstand, nedsenking i vann (NA 0,8) objektiv ble brukt (3,3 mm).oad/50703/50703fig2highres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; Klikk her for å se større bilde.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development at JoVE.com

Dissection and Lateral Mounting of Zebrafish Embryos: Analysis of Spinal Cord Development

Utviklingsprosesser som spredning, mønster, differensiering, og axon veiledning kan lett modellert i sebrafisk ryggmargen. I denne artikkelen beskriver vi en monteringsprosedyre for sebrafisk embryo, som optimaliserer visualisering av disse hendelsene.

Disseksjon og Lateral Montering av sebrafisk embryo: Analyse av ryggmargs Development

The zebrafish spinal cord is an effective investigative model for nervous system research for several reasons. First, genetic, transgenic and gene ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

Disseksjon og kultur av Chick Statoacoustic ganglion og Spinal Cord explants i Collagen Gels for neurite utvekst Assays

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

Spinal Cord Transection in the Larval Zebrafish

Spinal Cord tran i Larve Sebrafisk

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Komplett ryggmargsskade og Brain Dissection Protokoll for Følgende Wholemount<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering i Larve Sea Lamprey

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

RNA-Seq Analysis of Differential Gene Expression in Electroporated Chick Embryonic Spinal Cord

RNA-Seq Analyse av Differential Gene Expression i elektroporerte Chick Embryonic Spinal Cord

In ovo electroporation of the chick neural tube is a fast and inexpensive method for identification of gene function during neural development. Genome ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

sebrafisk<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Forberedelse til Elektrofysiologiske Opptak fra Spinal sensoriske og motoriske nevroner

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Isolation of Adult Spinal Cord Nuclei for Massively Parallel Single-nucleus RNA Sequencing

Isolasjon av voksen ryggmargen kjerner for massivt parallelle Single-kjernen RNA sekvensering

Probing an individual cell&#39;s gene expression enables the identification of cell type and cell state. Single-cell RNA sequencing has emerged as a ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

I Vivo kalsium bildebehandling av Lateral linje hårcellene i larver sebrafisk

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Intraarteriell levering av nevrale stamceller til rotte- og mushjernen: Søknad om cerebral iskemi

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...