Name: isolation of adipose tissue immune cells
Uploaded: 2013-05-22T13:00:00
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JSO é apoiado por um NIH Ruth L. Kirschstein NRSA (F32 DK091040), AK é apoiado por uma bolsa de pós-doutorado da American Diabetes Association (7-10-MI-05), e AHH é apoiado por um Heart Association Award americano Investigator Fundada (12EIA8270000). Experimentos de citometria de fluxo foram realizadas no VMC Citometria de Fluxo de Recursos Compartilhados. O VMC Citometria de Fluxo de recursos partilhada é apoiado pelo Digestive Disease Research Center Vanderbilt (DK058404).

1. Reagentes e Suprimentos Antes de se iniciar este protocolo experimental, preparar os seguintes reagentes: <ol><li> 70% de etanol </li><li> PBS 1X </li><li> 1X DPBS (sem Ca e Mg), suplementado com 0,5% de BSA </li><li> FACS buffer: 1X DPBS (sem Ca e Mg), EDTA 2 mM, e 1% de FCS </li><li> ACK tampão: 150 mM de NH4Cl, 10 mM KHCO 3, e 0,1 mM Na 2 EDTA em água </li></ol> 2. A colheita e preparação do tecido adiposo <ol><li> Eutan?...

<ol>
	<li>Rodbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolism+of+Isolated+Fat+Cells.+I.+Effects+of+Hormones+on+Glucose+Metabolism+and+Lipolysis.">Metabolism of Isolated Fat Cells. I. Effects of Hormones on Glucose Metabolism and Lipolysis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 239, 375-380 (1964).</li><li>Danse, L. H., Verschuren, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fish+oil-induced+yellow+fat+disease+in+rats.+III.+Lipolysis+in+affected+adipose+tissue.">Fish oil-induced yellow fat disease in rats. III. Lipolysis in affected adipose tissue.</a> Veterinary Pathology. 15, 544-548 (1978).</li><li>Weisberg, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+is+associated+with+macrophage+accumulation+in+adipose+tissue.">Obesity is associated with macrophage accumulation in adipose tissue.</a> The Journal of Clinical Investigation. 112, 1796-1808 (2003).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+inflammation+in+fat+plays+a+crucial+role+in+the+development+of+obesity-related+insulin+resistance.">Chronic inflammation in fat plays a crucial role in the development of obesity-related insulin resistance.</a> The Journal of Clinical Investigation. 112, 1821-1830 (2003).</li><li>Mathis, D., Shoelson, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunometabolism:+an+emerging+frontier.">Immunometabolism: an emerging frontier.</a> Nature Reviews. Immunology. 11, 81 (2011).</li><li>Stefanovic-Racic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+promote+macrophage+infiltration+and+comprise+a+substantial+proportion+of+obesity-associated+increases+in+CD11c++cells+in+adipose+tissue+and+liver.">Dendritic cells promote macrophage infiltration and comprise a substantial proportion of obesity-associated increases in CD11c+ cells in adipose tissue and liver.</a> Diabetes. 61, 2330-2339 (2012).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+deficiency+and+pharmacological+stabilization+of+mast+cells+reduce+diet-induced+obesity+and+diabetes+in+mice.">Genetic deficiency and pharmacological stabilization of mast cells reduce diet-induced obesity and diabetes in mice.</a> Nature Medicine. 15, 940-945 (2009).</li><li>Feuerer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lean,+but+not+obese,+fat+is+enriched+for+a+unique+population+of+regulatory+T+cells+that+affect+metabolic+parameters.">Lean, but not obese, fat is enriched for a unique population of regulatory T cells that affect metabolic parameters.</a> Nature Medicine. 15, 930-939 (2009).</li><li>Nishimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8++effector+T+cells+contribute+to+macrophage+recruitment+and+adipose+tissue+inflammation+in+obesity.">CD8+ effector T cells contribute to macrophage recruitment and adipose tissue inflammation in obesity.</a> Nature Medicine. 15, 914-920 (2009).</li><li>Winer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalization+of+obesity-associated+insulin+resistance+through+immunotherapy.">Normalization of obesity-associated insulin resistance through immunotherapy.</a> Nature Medicine. 15, 921-929 (2009).</li><li>Winer, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cells+promote+insulin+resistance+through+modulation+of+T+cells+and+production+of+pathogenic+IgG+antibodies.">B cells promote insulin resistance through modulation of T cells and production of pathogenic IgG antibodies.</a> Nature Medicine. 17, 610-617 (2011).</li><li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+by+lipid+excess+promotes+tissue+inflammation,+insulin+resistance,+and+hepatic+steatosis+in+obese+mice.">Activation of invariant natural killer T cells by lipid excess promotes tissue inflammation, insulin resistance, and hepatic steatosis in obese mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109. , 1143-1152 (2012).</li><li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eosinophils+sustain+adipose+alternatively+activated+macrophages+associated+with+glucose+homeostasis.">Eosinophils sustain adipose alternatively activated macrophages associated with glucose homeostasis.</a> Science. 332, 243-247 (2011).</li><li>Elgazar-Carmon, V., Rudich, A., Hadad, N., Levy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+transiently+infiltrate+intra-abdominal+fat+early+in+the+course+of+high-fat+feeding.">Neutrophils transiently infiltrate intra-abdominal fat early in the course of high-fat feeding.</a> Journal of Lipid Research. 49, 1894-1903 (2008).</li><li>Talukdar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+mediate+insulin+resistance+in+mice+fed+a+high-fat+diet+through+secreted+elastase.">Neutrophils mediate insulin resistance in mice fed a high-fat diet through secreted elastase.</a> Nature Medicine. 18, 1407-1412 (2012).</li><li>Hagman, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+and+quantifying+leukocyte+populations+in+human+adipose+tissue:+impact+of+enzymatic+tissue+processing.">Characterizing and quantifying leukocyte populations in human adipose tissue: impact of enzymatic tissue processing.</a> Journal of Immunological Methods. 386, 50-59 (2012).</li><li>Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+specific+cell+population+by+fluorescence+activated+cell+sorting+(FACS).">Purification of specific cell population by fluorescence activated cell sorting (FACS).</a> J. Vis. Exp. (41), e1546 (2010).</li><li>Kotecha, N., Krutzik, P. O., Irish, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Web-based+analysis+and+publication+of+flow+cytometry+experiments.">Web-based analysis and publication of flow cytometry experiments.</a> Current Protocols in Cytometry. Chapter 10, Unit 10 (2010).</li><li>Cho, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+role+of+LYVE-1-positive+macrophages+in+adipose+tissue.">Angiogenic role of LYVE-1-positive macrophages in adipose tissue.</a> Circulation Research. 100, e47-e57 (2007).</li><li>Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+compensation+for+flow+cytometry:+visualization+artifacts,+limitations,+and+caveats.">Spectral compensation for flow cytometry: visualization artifacts, limitations, and caveats.</a> Cytometry. 45, 194-205 (2001).</li></ol>

O interesse crescente no papel do sistema imunológico nas consequências metabólicas da obesidade levou à utilização generalizada de citometria de fluxo para caracterizar as células imunes do TA. Embora o protocolo exacto irá variar entre laboratórios com base na sua experiência e equipamentos disponíveis, os passos críticos incluem digestão com colagenase, a centrifugação diferencial, e o antigénio da superfície da célula de rotulagem. O objetivo do presente artigo é fornecer um protocolo detalhado e ...

Historicamente, o tecido adiposo (TA) tem sido visto como um órgão inerte de armazenamento de lípidos, a qual expande e contrai em resposta ao equilíbrio de energia. Agora entendemos que a AT representa um órgão endócrino dinâmico que secreta ativamente uma série de hormônios que influenciam diretamente no comportamento alimentar e homeostase da glicose sistêmica. Além disso, durante a última década tem havido uma apreciação crescente para as numerosas populações de células do sistema imunológico que residem na fracção vascular do estroma EM (SVF), bem como a sua contribuição para a AT homeostase. A capacidade para separar o EM adipócito e SVF utilizando uma digest de colagenase seguido de centrifugação diferencial foi descrita pela primeira vez em 1964 por Rodbell 1. Colagenase II é mais frequentemente usado para a separação dos adipócitos e SVF devido à manutenção de receptores de insulina adipócitos 1. Logo no início, fracionamento enzimática da AT foi utilizada principalmente para estudar Adipocyte metabolismo e para isolar pré-adipócitos. Mais recentemente, essa técnica, combinada com a ampla disponibilidade de cytometers fluxo eo número cada vez maior de anticorpos a fluoróforos, disponíveis comercialmente, tem facilitado a caracterização da AT células do sistema imunológico. Embora a presença de células imunes em inflamada no tinha sido descrita anteriormente 2, os papéis seminais de Weisberg et al. e Xu et al. publicado em 2003, foram os primeiros a documentar o acúmulo de AT macrófagos (ATMs) em obesidade, que secretam citocinas inflamatórias e correlacionar com a resistência à insulina AT específica e sistêmica 3,4. Estas observações serviu como a base de um novo campo de investigação recentemente inventado, &quot;immunometabolism&quot; 5, e foram acompanhados por estudos que implicam diferentes populações de células imunitárias, incluindo as células dendríticas, 6 7, mastócitos, células T 8 -10, as células B, células NK 11 12 13, eosinófilos e neutrófilos 14,15 no desenvolvimento da resistência à insulina associada a obesidade. O objetivo deste artigo é a de proporcionar uma descrição pormenorizada da técnica de digestão de colagenase usada para isolar células da EM SVF e caracterizar ATMs e AT células T através de citometria de fluxo. Este protocolo foi otimizado para mouse AT, no entanto, os telespectadores podem se beneficiar da leitura de um excelente artigo que fornece muitos detalhes sobre a otimização da técnica para o ser humano aos 16 anos. O público-alvo deste artigo inclui investigadores com pouca experiência de trabalho com o mouse AT e realizando citometria de fluxo. Várias considerações práticas para equilibrar o rendimento ea viabilidade celular com o tempo e os recursos são apresentados, bem como os controles de citometria de fluxo ideais para a caracterização de populações de células imunes. Além do nosso protocolo, os leitores são remetidoed com um artigo recente da Jove Basu et al. uma excelente discussão de alguns dos aspectos técnicos da citometria de fluxo para incluir controles e compensações 17 adequadas.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog #</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DPBS (no Ca or Mg) 10 x 500 ml</td>
 <td>Life Technologies</td>
 <td>14190-250</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DAPI</td>
 <td>Life Technologies</td>
 <td>D3571</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>BSA</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A2153-100G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>collagenase</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>C6885-5G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>propidium iodide solution</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>P4864-10 ml</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>stable stack 20 microliter</td>
 <td>Rainin</td>
 <td>SS-L10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>20 microliter filter tips</td>
 <td>Rainin</td>
 <td>SRL10F</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>stable stack 250 microliter tips</td>
 <td>Rainin</td>
 <td>SS-L250</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1000 microliter tips</td>
 <td>Rainin</td>
 <td>GPS-L1000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1000 microliter filter tips</td>
 <td>Rainin</td>
 <td>GP-L1000F</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>250 microliter Filter Tips</td>
 <td>Rainin</td>
 <td>SR-L200F</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>FC Block</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553142</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>fisher 100mn strainers</td>
 <td>Fisherbrand</td>
 <td>22-363-549</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>medium weigh dish</td>
 <td>Fisherbrand</td>
 <td>02-202B</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>aluminum foil</td>
 <td>Fisherbrand</td>
 <td>1213100</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>mincing scissors</td>
 <td>Fisherbrand</td>
 <td>089531B</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vortex</td>
 <td>Fisherbrand</td>
 <td>2215365</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 ml conical tubes</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>14-959-49A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>filter top FACS tubes</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>352235</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 ml pipette case 200</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>1367520</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>round bottom tubes</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>352058</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5 ml syringe</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>309646</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>V Bottom Plates</td>
 <td>Costar</td>
 <td>07-200-107</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>transfer bulb pipette</td>
 <td>Thermo Scientific</td>
 <td>13-711-22</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Shaker</td>
 <td>Thermo Scientific</td>
 <td>11 676 071</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Adhesive mat</td>
 <td>Thermo Scientific</td>
 <td>1368750</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cell Culture Centrifuge</td>
 <td>Sorvall</td>
 <td>75253839</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Adapters</td>
 <td>Sorvall</td>
 <td>75003723</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rat anti-mouse CD16/CD32</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553142</td>
 <td>Concentration: 0.5 - 1 &mu;g/ 106 cells</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rat anti-mouse F4/80</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>17-4801</td>
 <td>Fluorophore conjugate: APC 
 Concentration: 0.2 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: 17-4321</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rat anti-mouse CD11b</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>11-0112</td>
 <td>Fluorophore conjugate: FITC 
 Concentration: 0.5 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: 11/1/4031</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Armenian Hamster anti-mouse CD11c</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>12-0114</td>
 <td>Fluorophore conjugate: PE 
 Concentration: 0.8 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: Dec-88</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Goat anti-mouse MGL1/2</td>
 <td>R&amp;D Systems</td>
 <td>FAB4297P</td>
 <td>Fluorophore conjugate: PE 
 Concentration: 0.1 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: IC108P</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Goat anti-mouse CD206</td>
 <td>R&amp;D Systems</td>
 <td>FAB2535P</td>
 <td>Fluorophore conjugate: PE 
 Concentration: 0.1 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: IC108P</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rat anti-mouse CCR2</td>
 <td>R&amp;D Systems</td>
 <td>FAB5538P</td>
 <td>Fluorophore conjugate: PE 
 Concentration: 0.1 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: IC013P</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Armenian Hamster anti-mouse TCR&beta;</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553174</td>
 <td>Fluorophore conjugate: APC 
 Concentration: 0.2 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: 553956</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rat anti-mouse CD8a</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>552877</td>
 <td>Fluorophore conjugate: PE-Cy7 
 Concentration: 0.8 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: 552784</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rat anti-mouse CD4</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>557956</td>
 <td>Fluorophore conjugate: Alexa Fluor 700 
 Concentration: 0.2 &mu;g/ 106 cells 
 Isotype control catalog number: 557963</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>
Table 1. List of Materials and Reagents.

isolation of adipose tissue immune cells

A descoberta de aumento de infiltração de macrófagos no tecido adiposo (TA) de roedores obesos e humanos conduziu a um interesse em intensificação da contribuição de células imunes à resistência à insulina local e sistémica. O isolamento e quantificação de populações de células imunitárias diferentes nos magros e obesos AT é agora uma técnica vulgarmente utilizada em laboratórios immunometabolism; Ainda extremo cuidado deve ser feita tanto no isolamento das células vasculares do estroma e na análise de citometria de fluxo, de modo que os dados obtidos são fiáveis ​​e podem ser interpretados . Neste vídeo demonstramos como picar, digerir, e isolar a fração de células enriquecido estroma vascular imunológico. Posteriormente, vamos mostrar como anticorpos rótulo macrófagos e linfócitos T e como fazer corretamente portão los em experimentos de citometria de fluxo. Representante de citometria de fluxo de parcelas provenientes de gordura alimentados com ratos obesos alimentados com gordura de baixa magra e alta são fornecidos. Um elemento crítico da presente análise é o uso de anticorpos que fazemnão fluorescência nos canais onde a AT macrófagos são naturalmente autofluorescent, bem como o uso de controles de compensação adequados.

A colagenase seguido de digestão de EM por centrifugação diferencial foi usado para isolar o SVF de almofadas de gordura epididimal de ratos C57BL/6J machos alimentados com baixo teor de gordura (10% kcal de gordura) ou rica em gorduras (60% kcal de gordura), dieta (LFD e HFD , respectivamente) durante 16 semanas. Células do SVF foram então marcadas com anticorpos primários fluoróforos para quantificar a percentagem de ATMs viável (Figura 1) e AT células T (Figura 2) através d...

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Isolation of Adipose Tissue Immune Cells

O tecido adiposo (TA) é um site de ativação imune celular intensa e interação. Quase todas as células do sistema imune estão presentes em AT e as suas proporções são alteradas pela obesidade. Isolamento adequado, quantificação e caracterização de populações de células imunes são fundamentais para a compreensão do seu papel na doença immunometabolic.

Isolamento de tecido adiposo de células imunes

The discovery of increased macrophage infiltration in  the adipose tissue (AT) of obese rodents and humans has led to an  intensification of interest in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Medir a atividade das calpaínas em células fixas e Vivendo por citometria de fluxo

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Imunologia e Infecção

Quantitative Assessment of Immune Cells in the Injured Spinal Cord Tissue by Flow Cytometry:  a Novel Use for a Cell Purification Method

Avaliação quantitativa das células imunes no tecido medula lesionada por Citometria de Fluxo: um novo uso para um método de purificação celular

Detection of immune cells in the injured central nervous system (CNS) using morphological or histological techniques has not always provided true ...

Seven Steps to Stellate Cells

Sete Passos para Stellate Células

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Análise por Citometria de fluxo das células imunológicas Dentro aortas murino

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

Isolamento de células do sistema imunológico funcional cardíaca

Cardiac immune cells are gaining interest for the roles they play in the pathological remodeling in many cardiac diseases.1-5  These immune cells, which ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

Imagem intravital da Thymus rato usando 2-Photon Microscopia

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

Isolamento de citometria de fluxo de células primárias Murino Tipo II epiteliais alveolares de Estudos funcionais e Molecular

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolamento e análise de citometria de fluxo de células imunes do cérebro isquêmico Rato

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Isolamento, caracterização e exploração funcional da célula de rede gengival Imune

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Reliable and High Efficiency Extraction of Kidney Immune Cells

Extração Eficiência confiável e alta de rim células imunes

Immune system activation occurs in multiple kidney diseases and pathophysiological processes.  The immune system consists of both adaptive and innate ...