Name: live cell imaging of alphaherpes virus anterograde transport and spread
Uploaded: 2013-08-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread at JoVE.com

LWE og RK støttes av det amerikanske National Institutes of Health tilskudd R37 NS033506-16 og R01 NS060699-03. MPT ble støttet av en American Cancer Society Postdoktor Research Fellowship (PF-10-057-01-MPC). Råd og kunnskap om Dr. Matthew Lyman og Dr. Oren Kobiler var instrumental i å utforme mikroskopet konfigurasjon og live celle imaging metoder. Vi utvider også takket være Neal Barlow og Brian T. Kain av Nikon Instruments for sin teknisk bistand i anskaffelse, installasjon og performance av mikroskopet.

§ 1 - miljøkontroll betingelser for Live-cell fluorescensmikroskopi <ol><li> 30 min før enhver tenkelig eksperiment koble til og begynne oppvarmingen mikroskopet scenen toppen kuvøse. <ol><li> Slå på mikroskop, overføres og epifluorescent lyskilder, og automatiserte hardware kontroller. Åpne mikroskop kontroll programvare, NIS Elements, for å koble til mikroskopet og begynne kjøling av EM-CCD-kamera. </li><li> Fest Lens varmere til riktig mål (enten 60X eller 100X oljeimmersjon). Merk: Velg...

<ol>
	<li>Johnson, D. C., Baines, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesviruses+remodel+host+membranes+for+virus+egress.">Herpesviruses remodel host membranes for virus egress.</a> Nature reviews. Microbiology. 9 (5), 382-394 (2011).</li><li>Mettenleiter, T. C., Klupp, B. G., Granzow, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesvirus+assembly:+a+tale+of+two+membranes.">Herpesvirus assembly: a tale of two membranes.</a> Current Opinion in Microbiology. 9 (4), 423-429 (2006).</li><li>Saksena, M. M., Wakisaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+type+1+accumulation,+envelopment,+and+exit+in+growth+cones+and+varicosities+in+mid-distal+regions+of+axons.">Herpes simplex virus type 1 accumulation, envelopment, and exit in growth cones and varicosities in mid-distal regions of axons.</a> Journal of Virology. 80 (7), 3592-3606 (2006).</li><li>Snyder, A., Wisner, T. W., Johnson, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+Simplex+Virus+Capsids+Are+Transported+in+Neuronal+Axons+without+an+Envelope+Containing+the+Viral+Glycoproteins.">Herpes Simplex Virus Capsids Are Transported in Neuronal Axons without an Envelope Containing the Viral Glycoproteins.</a> Journal of Virology. 80 (22), 11165-11177 (2006).</li><li>Snyder, A., Polcicova, K., Johnson, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+gE/gI+and+US9+proteins+promote+transport+of+both+capsids+and+virion+glycoproteins+in+neuronal+axons.">Herpes simplex virus gE/gI and US9 proteins promote transport of both capsids and virion glycoproteins in neuronal axons.</a> Journal of Virology. 82 (21), 10613-10624 (2008).</li><li>Tomishima, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conserved+alpha-herpesvirus+protein+necessary+for+axonal+localization+of+viral+membrane+proteins.">A conserved alpha-herpesvirus protein necessary for axonal localization of viral membrane proteins.</a> The Journal of Cell Biology. 154 (4), 741-752 (2001).</li><li>Schnell, U., Dijk, F., Sjollema, K. A., Giepmans, B. N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunolabeling+artifacts+and+the+need+for+live-cell+imaging.">Immunolabeling artifacts and the need for live-cell imaging.</a> Nature Methods. 9 (2), 152-158 (2012).</li><li>Kratchmarov, R., Taylor, M. P., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+the+case:+Married+versus+Separate+models+of+alphaherpes+virus+anterograde+transport+in+axons.">Making the case: Married versus Separate models of alphaherpes virus anterograde transport in axons.</a> Reviews in Medical Virology. 22 (6), 378-391 (2012).</li><li>Antinone, S. E., Smith, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+herpesvirus+trafficking+in+neurons:+membrane+acquisition+directs+motion.">Two modes of herpesvirus trafficking in neurons: membrane acquisition directs motion.</a> Journal of Virology. 80 (22), 11235-11240 (2006).</li><li>Del Rio, T., Ch'ng, T. H., Flood, E. A., Gross, S. P., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+a+fluorescent+tegument+component+in+single+pseudorabies+virus+virions+and+enveloped+axonal+assemblies.">Heterogeneity of a fluorescent tegument component in single pseudorabies virus virions and enveloped axonal assemblies.</a> Journal of Virology. 79 (7), 3903-3919 (2005).</li><li>Taylor, M. P., Kramer, T., Lyman, M. G., Kratchmarov, R., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+an+alphaherpesvirus+membrane+protein+that+is+essential+for+anterograde+axonal+spread+of+infection+in+neurons.">Visualization of an alphaherpesvirus membrane protein that is essential for anterograde axonal spread of infection in neurons.</a> mBio. 3 (2), (2012).</li><li>Taylor, M. P., Kobiler, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alphaherpesvirus+axon-to-cell+spread+involves+limited+virion+transmission.">Alphaherpesvirus axon-to-cell spread involves limited virion transmission.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2012).</li><li>Kobiler, O., Brodersen, P., Taylor, M. P., Ludmir, E. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesvirus+replication+compartments+originate+with+single+incoming+viral+genomes.">Herpesvirus replication compartments originate with single incoming viral genomes.</a> mBio. 2 (6), (2011).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins:+a+cell+biologist's+user+guide.">Fluorescent proteins: a cell biologist's user guide.</a> Trends in Cell Biology. 19 (11), 649-655 (2009).</li><li>Ch'ng, T. H., Flood, E. A., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+primary+and+transformed+neuronal+cells+for+studying+pseudorabies+virus+infection.">Culturing primary and transformed neuronal cells for studying pseudorabies virus infection.</a> Methods in molecular biology (Clifton, N.J.). , 292-299 (2005).</li><li>Curanovic, D., Ch'ng, T. H., Szpara, M., Enquist, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmented+neuron+cultures+for+directional+infection+by+alpha+herpesviruses.">Compartmented neuron cultures for directional infection by alpha herpesviruses.</a> Current protocols in cell biology. Chapter 26 (Unit 26.4), (2009).</li><li>Zareen, N., Greene, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+culturing+sympathetic+neurons+from+rat+superior+cervical+ganglia+(SCG).">Protocol for culturing sympathetic neurons from rat superior cervical ganglia (SCG).</a> J. Vis. Exp. (23), e988 (2009).</li><li>Ch'ng, T. H., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-to-Cell+Spread+of+Pseudorabies+Virus+in+a+Compartmented+Neuronal+Culture+System.">Neuron-to-Cell Spread of Pseudorabies Virus in a Compartmented Neuronal Culture System.</a> Journal of Virology. 79 (17), 10875-10889 (2005).</li><li>Campenot, R. B., Lund, K., Mok, S. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+compartmented+cultures+of+rat+sympathetic+neurons.">Production of compartmented cultures of rat sympathetic neurons.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1869-1887 (2009).</li><li>Kramer, T., Greco, T. M., Taylor, M. P., Ambrosini, A. E., Cristea, I. M., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin-3+Mediates+Axonal+Sorting+and+Directional+Transport+of+Alphaherpesvirus+Particles+in+Neurons.">Kinesin-3 Mediates Axonal Sorting and Directional Transport of Alphaherpesvirus Particles in Neurons.</a> Cell Host &amp; Microbe. 12 (6), 806-814 (2012).</li><li>Smith, G. A., Gross, S. P., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesviruses+use+bidirectional+fast-axonal+transport+to+spread+in+sensory+neurons.">Herpesviruses use bidirectional fast-axonal transport to spread in sensory neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (6), 3466 (2001).</li><li>Kramer, T., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alphaherpesvirus+Infection+Disrupts+Mitochondrial+Transport+in+Neurons.">Alphaherpesvirus Infection Disrupts Mitochondrial Transport in Neurons.</a> Cell Host &amp; Microbe. 11 (5), 504-514 (2012).</li><li>Swedlow, J. R., Platani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+cell+imaging+using+wide-field+microscopy+and+deconvolution.">Live cell imaging using wide-field microscopy and deconvolution.</a> Cell Structure and Function. 27 (5), 335-341 (2002).</li><li>Kaech, S., Huang, C. F., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-Term+High-Resolution+Imaging+of+Developing+Hippocampal+Neurons+in+Culture.">Short-Term High-Resolution Imaging of Developing Hippocampal Neurons in Culture.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (3), (2012).</li><li>Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+microscopy+-+tips+and+tools.">Live-cell microscopy - tips and tools.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).</li></ol>

Målet med levende celle bildebehandling er å observere biologiske prosesser som de oppstår uten vesentlig endring av loven av observasjon. Dette målet oppnås ved å optimalisere tre variabler: miljøkontroll, hastighet på bildebehandling, og fluorescens belysning. Disse inter-avhengige variabler må balanseres for å oppnå levedyktige bildebehandling forhold. Protokollene som presenteres utnytte spesifikke forhold for å produsere de representative resultater. Vi vil kort diskutere miljø-kontroller og observeren...

Infeksjon i det perifere nervesystemet (PNS) ved alphaherpes virus som herpes simplex virus (HSV) -1, -2, og pseudorabies virus (PRV) involverer flere intrikate og svært regulert skritt hele viral livssyklus. Transport i nevroner av PNS er kritisk under hendelsene i både primær viral infeksjon og påfølgende inter-host spredning. De molekylære mekanismene som modulerer to komponentene i den virale livssyklus, rettet transport av virale forsamlinger unna celle organer innenfor axoner (anterograd transport) og påfølgende overføring av virions til mottakelige celler (anterograd spread) er viktig for å forstå herpesvirus patogenesen. Transport-og avstigning av virale partikler i nevroner er avhengig av montering av en moden infeksiøs virion 1,2. Tidligere faste analyser, inkludert immunfluorescens (IF) og elektronmikroskopi (EM), ble brukt til å studere partikkel forsamlingen staten og protein interaksjoner forbundet med virion transport og spredning 3-6. Men de dynamiske egenskapene til transport av viruspartikler og eksperimentelle gjenstander introdusert av kjemisk fiksering forvirret tolkning av faste bilder 7,8. Nylig har en rekke viral-fluorescerende fusjonsproteinene blitt beskrevet for HSV og PRV som har ubetydelig effekt på protein funksjon. Grønt fluorescerende protein (GFP) og røde fluorescerende proteiner (mCherry eller mRFP) fluoroforer blir ofte koblet sammen for å tillate avbildning av to av de tre strukturelle komponenter i en moden virion: kapsid, tegument, og glykoprotein 9-11. Levende celle avbildning av anterograd transport ved hjelp av dual-merket virus visualiserer forsamlingen staten viruspartikler under transport. Lignende fluorofor uttrykke virusstammer brukes til å visualisere antallet og mangfoldet av virale genomer etter spredning 12,13. Egenskapene til de fluorescerende proteiner (gjennomgått i 14,15) i stor grad påvirkeevnen til å visualisere virale eller cellulære sammenstillinger. De iboende egenskapene til den fluorescerende protein, inkludert selv-interaksjoner og stabilitet, bør vurderes ved utforming og testing romanen protein fusjoner for bevaring av vill-type funksjonalitet. I forbindelse med fluorescerende protein fusjoner, to godt karakterisert in vitro cellekultur-systemer er ansatt for live cell imaging av herpes virus infeksjon: dissociated 16 og compartmentalized 17 (figur 1A) rotte overlegne cervical ganglia (SCG) nerveceller. I begge systemer, er embryonale SCG er dissekert, dissosiert til én celle organer, og belagt for in vitro dyrkning 18. SCG nevroner er en del av det autonome nervesystemet og kan lett dyrkes og differensiert av neuronal vekstfaktor (NGF) til en moden polarisert tilstand ex vivo. Dissosiert SCG nevroner danner et utvidet nettverk av axoner som gjør at feller visualisering av virale partikler etter hvert som de gjennomgår anterograde transport 6.. Compartmentalized SCG kulturer gi fluidic isolering av neuronal celle kroppen (S-rom) og distale axon termini (N kupé) 19. En rekke detaljerte protokoller for bygging og bruk av compartmentalized nevroner bruker originale 20 eller modifisert Campenot kamre 17 har blitt publisert tidligere. Fluidic isolasjon tillater selektiv infeksjon av nevrale celle organer og påvisning av avkom virions etter transport til isolerte axon Termini. Plettering epitelceller i de termini før infeksjon gir mottakercellene for spredningen av virusinfeksjon. Det er mange viktige elementer viktig for alle levende celle bildebehandling eksperimentering, men det mest relevante for våre protokoller er: automatisert image oppkjøpet, fluorescerende belysning, hastighet på bildebehandling, og miljøkontroll. For alle bildebehandling eksperimenter, bruker vien invertert, automatisert, epifluorescence belysning mikroskop (figur 1B). Mikroskopet er bygget rundt Nikon Eclipse Ti base og sysselsetter en rekke datastyrte motoriserte systemer for å raskt konfigurere mikroskop under automatisert image oppkjøpet. For fluorescens belysning, bruker vi et bredspektret kvikksølv arc lampe som kan dempes med nøytral tetthet filter langs belysning banen. Eksitasjon filtre begrense spekteret av fluorescerende belysning og da sammen med multi-pass dichroic speil og fluorescens emisjonsfiltre visualisere spesifikke fluorescerende forbindelser. De eksitasjon og emisjon er montert filtre i uavhengige, rask veksling filter hjul å muliggjøre rask sekvensiell oppkjøp av ulike fluorescerende kanaler. Hastigheten på bildet oppkjøpet er ytterligere forbedret med en sensitiv og rask EM-CCD-kamera, nyttig for påvisning av lav intensitet signaler og korte bilde lesehastigheten. Miljøkontroll på microscope oppnås med en scene topp oppvarmet inkubator, og en objektivlinse ovn for å holde prøvene på forhøyet temperatur mens en fuktet og CO2 anrikede atmosfære føres inn i inkubatoren. Mikroskopet er holdt i et mørkt rom med omgivelsestemperatur holdt tett til 25 ° C og utelys minimert med blendingsgardiner på alle vinduer. De følgende protokoller beskriver bruken av dette system for anterograde transport og spredning analyser. En rekke alternativer finnes for å kontrollere for variabler av levende celle bildebehandling. Kontrollen av mikroskopi innstillinger kan utføres manuelt eller ved hjelp av automatiserte systemer avhengig av proprietær programvare. Fluorescens belysning kan oppnås med halogen, LED eller laser kilder. Hastigheten på avbildning er modifisert ved hastigheten på filteret svitsjing og tiden for å visualisere signalet med den parede deteksjonssystem. Miljøkontroll kan oppnås med spesialisert maskinvare på microscope stadium, innelukking av hele eller deler av mikroskopet i en oppvarmet og fuktet boks, eller ved å heve temperaturen i rommet hvor mikroskopi vil bli utført. Hver av disse alternativer har fordeler og ulemper knyttet til kostnad og ytelse. I den etterfølgende protokollen, detalj vi bruken av levende celle bildebehandling for å studere hurtig anterograde transport og spredning av anterograde alphaherpes virus gjennom bruk av rekombinante virusstammer. Real-time live-cell imaging visualiserer capsid, tegument, og / eller glykoprotein samlokalisering på dynamiske strukturer som gjennomgår transport innen axoner 11. Overnatter timelapse avbildning av compartmentalized nevrale kulturer visualiserer axonal virion utgang og infeksjon av mottakelige celler 12. Protokollene som presenteres her er optimalisert for bruk med vår spesielle imaging system, men er presentert i grove trekk i forhold til de fire elementene av levende celle bildebehandling. I diskusjonen vivil ytterligere detalj noen optimalisering av den som er nødvendig for vellykket eksperimentering.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>35 mm glass bottom culture dish</td>
 <td>MatTek Corporation; Ashland, MA </td>
 <td>P35G-1.5-20-C</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>35 mm &mu;-Dish </td>
 <td>Ibidi USA LLC, Verona, WI </td>
 <td>81156</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope body </td>
 <td>Nikon Instruments Inc. </td>
 <td>Nikon Eclipse Ti</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Motorized microscope X-Y stage</td>
 <td>Prior Scientific; Rockland, MA </td>
 <td>H117 ProScan Flat Top</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Motorized filter wheels</td>
 <td>Prior Scientific</td>
 <td>HF110 10 position filter wheel</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorescent illumination source </td>
 <td>Lumen Dynamics; Mississauga, Ontario Canada </td>
 <td>X-Cite 120Q </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Multi-band Fluorescence filter sets</td>
 <td>Chroma Technology Corp.; Bellows Falls, VT</td>
 <td>89000 Sedat Quad - ET 89006 ECFP/EYFP/mCherry - ET</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EM-CCD camera</td>
 <td>Andor Technology USA; South Windsor, CT</td>
 <td>iXon3 897 </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Chamlide stage top environmental incubator</td>
 <td>Live Cell Instruments; Seoul, South Korea</td>
 <td>TC-L-10</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Objective lens heater</td>
 <td>Bioptecs; Butler, PA</td>
 <td>150803 Controller 150819-12-08 Heater</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Analysis software</td>
 <td>Nikon Instruments Inc.; Melville, NY</td>
 <td>NIS Elements </td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

live cell imaging of alphaherpes virus anterograde transport and spread

Fremskritt i live celle fluorescens mikroskopi teknikker, samt bygging av rekombinant virusstammer som uttrykker fluorescerende fusjon proteiner har aktivert sanntids visualisering av transport og spredning av alphaherpes virus infeksjon av nerveceller. Nytten av nye fluorescerende fusjon proteiner til viral membran, tegument, og capsids, sammen med levende celle bildebehandling, identifisert viral partikkel forsamlinger gjennomgår transport innen axoner. Lignende verktøy har blitt ansatt for analyser av celle-celle spredning av viruspartikler å kvantifisere antall og mangfold av virions overføres mellom cellene. Viktigere, teknikker for live-cell imaging av anterograd transport og spredning produsere et vell av informasjon, inkludert partikkel transport hastigheter, utdeling av partikler, og timelige analyser av protein lokalisering. Ved siden av klassiske viral genetiske teknikker, har disse metodene gitt kritisk innsikti viktige mekanistiske spørsmål. I denne artikkelen beskriver vi i detalj imaging metoder som ble utviklet for å svare på grunnleggende spørsmål om alphaherpes virus transport og spredning.

Anterograd Transport Anvendelse av denne protokollen til infeksjoner i dissosiert SCG kulturer med PRV 348, har en rekombinant PRV belastning uttrykker GFP-US9 og GM-mCherry membran fusjon proteiner, til rette for visualisering av anterograd transport av virions (figur 3 og Supplemental Movie 4). Innlemmelse av disse fusjon proteiner i viruspartikler resultater i sin oppdagelse på transport puncta, og de nevnte bildebehandling betingelser minimere oppveid av h...

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread at JoVE.com

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

Live-cell imaging av alphaherpes virusinfeksjoner gjør analyse av dynamiske hendelser rettet transport og intercellulært spredning. Her presenterer vi metoder som benytter rekombinant virusstammer uttrykker fluorescerende fusjonsproteinene å lette visualisering av virale forsamlinger under infeksjon av primære nevroner.

Live Cell Imaging av Alphaherpes Virus Anterograd Transport og Spread

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

Real-time Live Imaging av T-celle signalisering Complex Formation

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Nøytrofile Isolering og analyse for å fastslå deres rolle i lymfom Cell Følsomhet for Terapeutiske midler

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

Evaluering av effekt og toksisitet av RNA Targeting HIV-1 Produksjon for bruk i Gene eller Medikamentell behandling

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

Bildebehandling celle interaksjon i Tracheal Mucosa under influensa Virus smitte med to-fotonet Intravital mikroskopi

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA Test for å evaluere Rabies vaksine styrke

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

En luciferase-fluorescerende reporter influensa virus for Live Imaging og kvantifisering av viral infeksjon

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Intravital Widefield Fluorescence Microscopy of Pulmonary Microcirculation in Experimental Acute Lung Injury Using a Vacuum-Stabilized Imaging System

Intravital widefield fluorescensmikroskopi av lungemikrosirkulasjon i eksperimentell akutt lungeskade ved hjelp av et vakuumstabilisert bildebehandlingssystem

Intravital imaging of leukocyte-endothelial interactions offers valuable insights into immune-mediated disease in live animals. The study of acute lung ...

Virus Propagation and Cell-Based Colorimetric Quantification

Virusforplantning og cellebasert kolorimetrisk kvantifisering

Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne virus belonging to the genus Flavivirus. ZIKV infection has been associated with congenital brain abnormalities and ...