Name: live cell imaging of alphaherpes virus anterograde transport and spread
Uploaded: 2013-08-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread at JoVE.com

LWE och RK stöds av amerikanska National Institutes of Health bidrag R37 NS033506-16 och R01 NS060699-03. MPT stöddes av ett American Cancer Society Postdoctoral Research Fellowship (PF-10-057-01-MPC). De råd och kunskap om Dr Matthew Lyman och Dr Oren Kobiler bidrog utformningen mikroskopet konfiguration och levande cell imaging metoder. Vi utökar också tack vare Neal Barlow och Brian T. Kain av Nikon Instrument för sitt tekniska bistånd i förvärv, installation och performance av mikroskopet.

Avsnitt 1 - Omgivningskontroll Villkor för Live-cell Fluorescensmikroskopi <ol><li> 30 min före varje avbildning experiment ansluta och börja värma mikroskop inkubator scenen toppen. <ol><li> Slå på mikroskop, överförs och epifluorescent ljuskällor, och automatiserade kontroller hårdvara. Öppna mjukvaran mikroskop kontroll, NIS Elements, för att ansluta till mikroskopet och börja kyla EM-CCD-kamera. </li><li> Bifoga Lens varmare till lämpligt mål (antingen 60X eller 100X oljeimmersion) Anmärkni...

<ol>
	<li>Johnson, D. C., Baines, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesviruses+remodel+host+membranes+for+virus+egress.">Herpesviruses remodel host membranes for virus egress.</a> Nature reviews. Microbiology. 9 (5), 382-394 (2011).</li><li>Mettenleiter, T. C., Klupp, B. G., Granzow, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesvirus+assembly:+a+tale+of+two+membranes.">Herpesvirus assembly: a tale of two membranes.</a> Current Opinion in Microbiology. 9 (4), 423-429 (2006).</li><li>Saksena, M. M., Wakisaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+type+1+accumulation,+envelopment,+and+exit+in+growth+cones+and+varicosities+in+mid-distal+regions+of+axons.">Herpes simplex virus type 1 accumulation, envelopment, and exit in growth cones and varicosities in mid-distal regions of axons.</a> Journal of Virology. 80 (7), 3592-3606 (2006).</li><li>Snyder, A., Wisner, T. W., Johnson, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+Simplex+Virus+Capsids+Are+Transported+in+Neuronal+Axons+without+an+Envelope+Containing+the+Viral+Glycoproteins.">Herpes Simplex Virus Capsids Are Transported in Neuronal Axons without an Envelope Containing the Viral Glycoproteins.</a> Journal of Virology. 80 (22), 11165-11177 (2006).</li><li>Snyder, A., Polcicova, K., Johnson, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+gE/gI+and+US9+proteins+promote+transport+of+both+capsids+and+virion+glycoproteins+in+neuronal+axons.">Herpes simplex virus gE/gI and US9 proteins promote transport of both capsids and virion glycoproteins in neuronal axons.</a> Journal of Virology. 82 (21), 10613-10624 (2008).</li><li>Tomishima, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conserved+alpha-herpesvirus+protein+necessary+for+axonal+localization+of+viral+membrane+proteins.">A conserved alpha-herpesvirus protein necessary for axonal localization of viral membrane proteins.</a> The Journal of Cell Biology. 154 (4), 741-752 (2001).</li><li>Schnell, U., Dijk, F., Sjollema, K. A., Giepmans, B. N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunolabeling+artifacts+and+the+need+for+live-cell+imaging.">Immunolabeling artifacts and the need for live-cell imaging.</a> Nature Methods. 9 (2), 152-158 (2012).</li><li>Kratchmarov, R., Taylor, M. P., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+the+case:+Married+versus+Separate+models+of+alphaherpes+virus+anterograde+transport+in+axons.">Making the case: Married versus Separate models of alphaherpes virus anterograde transport in axons.</a> Reviews in Medical Virology. 22 (6), 378-391 (2012).</li><li>Antinone, S. E., Smith, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+herpesvirus+trafficking+in+neurons:+membrane+acquisition+directs+motion.">Two modes of herpesvirus trafficking in neurons: membrane acquisition directs motion.</a> Journal of Virology. 80 (22), 11235-11240 (2006).</li><li>Del Rio, T., Ch'ng, T. H., Flood, E. A., Gross, S. P., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+a+fluorescent+tegument+component+in+single+pseudorabies+virus+virions+and+enveloped+axonal+assemblies.">Heterogeneity of a fluorescent tegument component in single pseudorabies virus virions and enveloped axonal assemblies.</a> Journal of Virology. 79 (7), 3903-3919 (2005).</li><li>Taylor, M. P., Kramer, T., Lyman, M. G., Kratchmarov, R., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+an+alphaherpesvirus+membrane+protein+that+is+essential+for+anterograde+axonal+spread+of+infection+in+neurons.">Visualization of an alphaherpesvirus membrane protein that is essential for anterograde axonal spread of infection in neurons.</a> mBio. 3 (2), (2012).</li><li>Taylor, M. P., Kobiler, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alphaherpesvirus+axon-to-cell+spread+involves+limited+virion+transmission.">Alphaherpesvirus axon-to-cell spread involves limited virion transmission.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2012).</li><li>Kobiler, O., Brodersen, P., Taylor, M. P., Ludmir, E. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesvirus+replication+compartments+originate+with+single+incoming+viral+genomes.">Herpesvirus replication compartments originate with single incoming viral genomes.</a> mBio. 2 (6), (2011).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins:+a+cell+biologist's+user+guide.">Fluorescent proteins: a cell biologist's user guide.</a> Trends in Cell Biology. 19 (11), 649-655 (2009).</li><li>Ch'ng, T. H., Flood, E. A., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+primary+and+transformed+neuronal+cells+for+studying+pseudorabies+virus+infection.">Culturing primary and transformed neuronal cells for studying pseudorabies virus infection.</a> Methods in molecular biology (Clifton, N.J.). , 292-299 (2005).</li><li>Curanovic, D., Ch'ng, T. H., Szpara, M., Enquist, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmented+neuron+cultures+for+directional+infection+by+alpha+herpesviruses.">Compartmented neuron cultures for directional infection by alpha herpesviruses.</a> Current protocols in cell biology. Chapter 26 (Unit 26.4), (2009).</li><li>Zareen, N., Greene, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+culturing+sympathetic+neurons+from+rat+superior+cervical+ganglia+(SCG).">Protocol for culturing sympathetic neurons from rat superior cervical ganglia (SCG).</a> J. Vis. Exp. (23), e988 (2009).</li><li>Ch'ng, T. H., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-to-Cell+Spread+of+Pseudorabies+Virus+in+a+Compartmented+Neuronal+Culture+System.">Neuron-to-Cell Spread of Pseudorabies Virus in a Compartmented Neuronal Culture System.</a> Journal of Virology. 79 (17), 10875-10889 (2005).</li><li>Campenot, R. B., Lund, K., Mok, S. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+compartmented+cultures+of+rat+sympathetic+neurons.">Production of compartmented cultures of rat sympathetic neurons.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1869-1887 (2009).</li><li>Kramer, T., Greco, T. M., Taylor, M. P., Ambrosini, A. E., Cristea, I. M., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin-3+Mediates+Axonal+Sorting+and+Directional+Transport+of+Alphaherpesvirus+Particles+in+Neurons.">Kinesin-3 Mediates Axonal Sorting and Directional Transport of Alphaherpesvirus Particles in Neurons.</a> Cell Host &amp; Microbe. 12 (6), 806-814 (2012).</li><li>Smith, G. A., Gross, S. P., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesviruses+use+bidirectional+fast-axonal+transport+to+spread+in+sensory+neurons.">Herpesviruses use bidirectional fast-axonal transport to spread in sensory neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (6), 3466 (2001).</li><li>Kramer, T., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alphaherpesvirus+Infection+Disrupts+Mitochondrial+Transport+in+Neurons.">Alphaherpesvirus Infection Disrupts Mitochondrial Transport in Neurons.</a> Cell Host &amp; Microbe. 11 (5), 504-514 (2012).</li><li>Swedlow, J. R., Platani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+cell+imaging+using+wide-field+microscopy+and+deconvolution.">Live cell imaging using wide-field microscopy and deconvolution.</a> Cell Structure and Function. 27 (5), 335-341 (2002).</li><li>Kaech, S., Huang, C. F., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-Term+High-Resolution+Imaging+of+Developing+Hippocampal+Neurons+in+Culture.">Short-Term High-Resolution Imaging of Developing Hippocampal Neurons in Culture.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (3), (2012).</li><li>Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+microscopy+-+tips+and+tools.">Live-cell microscopy - tips and tools.</a> Journal of Cell Science. 122 (6), 753-767 (2009).</li></ol>

Målet för levande cell imaging observerar biologiska processer när de inträffar utan väsentlig förändring av lagen för observation. Detta mål uppnås genom att optimera tre variabler: miljökontroll, hastighet av att avbilda, och fluorescens belysning. Dessa inter-beroende variabler måste balanseras för att uppnå livskraftiga avbildningsbetingelser. De presenterade protokoll utnyttjar särskilda villkor för att producera de representativa resultat. Vi kommer att kort diskutera miljö-kontroller och observat...

Infektion av det perifera nervsystemet (PNS) genom alphaherpes virus, såsom herpes simplex-virus (HSV) -1, -2 och pseudorabiesvirus (PRV) involverar flera invecklade och starkt reglerat steg under hela virusets livscykel. Transport inom nervceller i PNS är kritiskt under händelserna av både primär virusinfektion och efterföljande inter-host spridning. De molekylära mekanismerna som modulerar två komponenter i virusets livscykel, riktad transport av virala församlingar bort från cell organ inom axoner (anterograd transporter) och därpå följande överföring av virioner till mottagliga celler (anterograd spread) är viktiga för förståelsen herpesvirus patogenes. Transporten och avstigning av viruspartiklar i nervceller är beroende av montering av en mogen infektiös virion 1,2. Tidigare fasta analyser, inklusive immunofluorescens (IF) och elektronmikroskopi (EM), användes för att studera den statliga partikel montering och protein interaktioner förknippade med virion transport och spridning 3-6. Men den dynamiska karaktären av transport virioner och experimentella artefakter införts av kemisk fixering försvårade tolkningen av fasta bilder 7,8. Nyligen har ett antal virus-fluorescerande fusionsproteiner beskrivits för HSV och PRV som har försumbara effekter på proteiners funktion. Grönt fluorescerande protein (GFP) och rött fluorescerande proteiner (mCherry eller mRFP) fluoroforer är ofta ihopkopplade för att tillåta avbildning av två av de tre strukturella delarna av en mogen virion: kapsid, inneragnen, och glykoprotein 9-11. Levande cell imaging av anterograd transporter med dual-märkta virus visualiserar församling tillstånd av viruspartiklar under transport. Liknande fluorofor uttrycker virusstammar används för att visualisera antalet och mångfalden av virala genom följande uppslag 12,13. Egenskaperna hos fluorescerande proteiner (översikt i 14,15) har stor inverkanförmågan att visualisera virala eller cellulära aggregat. De inneboende egenskaper fluorescerande proteinet, inklusive sluten interaktioner och stabilitet, bör beaktas när man utformar och testar fusioner nya proteinet för bevarandet av vild-typ funktionalitet. I samband med fluorescerande proteinfusioner, två välkarakteriserade in vitro cellkultursystem används för levande cell imaging av herpes virus infektion: dissocierade 16 och fack 17 (Figur 1A) Superior Cervikal ganglierna (SCG) neuroner. I båda systemen är embryonala SCG: s dissekeras, dissocierade till encelliga organ, och ströks för in vitro-odling 18. SCG neurons är en del av det autonoma nervsystemet och kan lätt odlas och differentieras genom neuronal tillväxtfaktor (NGF) till en mogen polariserade tillstånd ex vivo. Dissocierade SCG nervceller bildar ett omfattande nätverk av axoner som tillåter feller visualisering av viruspartiklar som de genomgår anterograd transporter 6. Compartmentalized SCG kulturer ger fluidisk isolering av neuronal cell organ (S fack) och distala Termini axon (N fack) 19. Ett antal detaljerade protokoll för konstruktion och användning av compartmentalized nervceller som använder original 20 eller modifierad Campenot kamrarna 17 har publicerats tidigare. Fluidic isolering möjliggör selektiv infektion av neuronala cellkroppar och detektering av avkomma virioner efter transport till isolerade axon terminaler. Plätering epitelceller över terminalerna före infektion ger recipientceller för spridning av virusinfektion. Det finns många viktiga faktorer viktiga för alla levande cell imaging experiment, men den mest relevanta för våra protokoll är: automatisk bildtagning, fluorescerande belysning, hastighet avbildning, och miljökontroll. För alla imaging experiment, använder vien inverterad, automatiserat, epifluorescens belysning mikroskop (Figur 1B). Mikroskopet är uppbyggd kring Nikon Eclipse Ti bas och sysselsätter ett antal dator motoriserade styrda system för att snabbt konfigurera om mikroskopet under automatisk bildtagning. För fluorescensbelysning, använder vi ett brett spektrum kvicksilverbåglampa som kan dämpas med neutral densitet filter längs belysning vägen. Excitationsfilter begränsa det spektrum av fluorescerande belysning och när det paras ihop med flera pass dikroiskt speglar och fluorescens filter utsläpp visualisera specifika fluorescerande föreningar. Excitation och emission filter är monterade i fristående, snabbt byte filter hjul för att möjliggöra snabb sekventiell förvärv av olika fluorescerande kanaler. Hastigheten på bilden förvärvet förstärks ytterligare med en känslig och snabb EM-CCD-kamera, användbar för detektering av låg intensitet signaler och korta image Läs gånger. Miljö kontroll på Microscopa uppnås med en scen topp uppvärmd inkubator och en objektivlins värmare för att bibehålla prov vid förhöjda temperaturer medan en fuktad och CO 2 anrikad atmosfär passerar in i inkubatorn. Mikroskopet förvaras i ett mörkt rum med rumstemperatur konstant nära 25 ° C och utanför ljus minimeras med mörkläggningsgardiner på alla fönster. Följande protokoll beskriver användningen av detta system för anterograd transport och analyser spridning. Ett antal alternativ finns för att kontrollera för de variabler för levande cell imaging. Styrningen av mikroskopi inställningar kan utföras manuellt eller med hjälp av automatiserade system är beroende av proprietär programvara. Fluorescensbelysning kan uppnås med halogen, LED eller laser källor. Hastigheten på avbildning modifieras av hastigheten filtret omkoppling och tiden för att visualisera signalen med den parade detektionssystem. Miljökontroll kan uppnås med specialiserad hårdvara på mimikroskop skede, inneslutning av hela eller en del av mikroskopet i ett uppvärmt och befuktad låda, eller genom att höja temperaturen i det rum där mikroskopi kommer att utföras. Vart och ett av dessa alternativ har fördelar och nackdelar relaterade till kostnad och prestanda. I det påföljande protokoll, detalj vi användning av levande cell imaging att studera snabba anterograd transport och anterograd spridning av alphaherpes virus genom användning av rekombinanta virala stammar. Realtids levande cell imaging visualiserar kapsid, inneragnen, och / eller glykoprotein samlokalisering på dynamiska strukturer genomgår transporter inom axoner 11. Övernattning Timelapse avbildning av compartmentalized neuronala kulturer visualiserar axonal virion avstigning och infektion av mottagliga celler 12. De protokoll som presenteras här har optimerats för användning med våra särskilt imaging system, men presenteras i stora drag i förhållande till de fyra elementen i levande cell imaging. I den diskussion som vikommer att ytterligare detalj några av optimeringen som är nödvändig för en framgångsrik experimentering.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>35 mm glass bottom culture dish</td>
 <td>MatTek Corporation; Ashland, MA </td>
 <td>P35G-1.5-20-C</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>35 mm &mu;-Dish </td>
 <td>Ibidi USA LLC, Verona, WI </td>
 <td>81156</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope body </td>
 <td>Nikon Instruments Inc. </td>
 <td>Nikon Eclipse Ti</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Motorized microscope X-Y stage</td>
 <td>Prior Scientific; Rockland, MA </td>
 <td>H117 ProScan Flat Top</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Motorized filter wheels</td>
 <td>Prior Scientific</td>
 <td>HF110 10 position filter wheel</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorescent illumination source </td>
 <td>Lumen Dynamics; Mississauga, Ontario Canada </td>
 <td>X-Cite 120Q </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Multi-band Fluorescence filter sets</td>
 <td>Chroma Technology Corp.; Bellows Falls, VT</td>
 <td>89000 Sedat Quad - ET 89006 ECFP/EYFP/mCherry - ET</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EM-CCD camera</td>
 <td>Andor Technology USA; South Windsor, CT</td>
 <td>iXon3 897 </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Chamlide stage top environmental incubator</td>
 <td>Live Cell Instruments; Seoul, South Korea</td>
 <td>TC-L-10</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Objective lens heater</td>
 <td>Bioptecs; Butler, PA</td>
 <td>150803 Controller 150819-12-08 Heater</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Analysis software</td>
 <td>Nikon Instruments Inc.; Melville, NY</td>
 <td>NIS Elements </td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

live cell imaging of alphaherpes virus anterograde transport and spread

Framsteg i levande celler fluorescens mikroskopi tekniker, liksom byggandet av rekombinanta virusstammar som uttrycker fluorescerande fusionsproteiner har aktiverat realtid visualisering av transport och spridning av alphaherpes virusinfektion av nervceller. Nyttan av nya fluorescerande fusionsproteiner till virusmembranet, inneragnen och capsids, tillsammans med levande cell imaging, identifierade virus partikel församlingar genomgår transporter inom axoner. Liknande verktyg har framgångsrikt använts för analyser av cell-cell spridning av viruspartiklar för att kvantifiera antalet och mångfalden av virioner överförs mellan celler. Huvudsakligen de metoder för levande cell imaging av anterograd transport och spridning ger en mängd information, inklusive hastigheter partikel transport, fördelningar av partiklar, och temporala analyser av protein lokalisering. Vid sidan av klassiska virala genetiska tekniker har dessa metoder förutsatt kritiska insiktertill viktiga mekanistiska frågor. I den här artikeln beskriver vi i detalj imaging metoder som utvecklats för att svara på grundläggande frågor om alphaherpes virus transport och spridning.

Anterograd Transport Tillämpningen av detta protokoll till infektioner av dissocierade SCG kulturer med PRV 348, har en rekombinant PRV stam som uttrycker GFP-US9 och GM-mCherry membranproteiner fusion, underlättade visualisering av anterograd transport av virioner (Figur 3 och Supplemental Movie 4). Införlivandet av dessa fusionsproteiner i virala partiklar resulterar i deras upptäckt på transport puncta och ovan nämnda villkor imaging minimera förskjut...

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread at JoVE.com

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

Levande cell imaging av alphaherpes virusinfektioner möjliggör analys av dynamiska händelser riktad transport och intercellulär spridning. Här presenterar vi metoder som utnyttjar rekombinanta virusstammar som uttrycker fluorescerande fusionsproteiner att underlätta visualisering av virala församlingar under infektion av primära neuroner.

Levande cell imaging av Alphaherpes Virus Anterograd Transport och Spread

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Användning av en optisk fälla för studier av Host-patogen interaktioner för Dynamic levande cell imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Levande cell imaging av Bacillus subtilis Och Streptococcus pneumoniae Med hjälp av automatiserade Time-lapse Mikroskopi

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

Real-time Live avbildning av T-cellsignalering Complex Formation

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofil Isolering och analys för att fastställa deras roll i lymfom Cell Känslighet för terapeutiska medel

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

Utvärdering av effekt och toxicitet av RNA Targeting HIV-1-produktion för användning i Gene eller Drug Therapy

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

Imaging Cell interaktion i luftrör slemhinna under influensa virusinfektion med två-photon Intravital mikroskopi

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA Test för att utvärdera rabiesvaccin potens

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

En Luciferase-fluorescerande reporter influensa virus för levande avbildning och kvantifiering av virusinfektion

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Intravital Widefield Fluorescence Microscopy of Pulmonary Microcirculation in Experimental Acute Lung Injury Using a Vacuum-Stabilized Imaging System

Intravital widefield fluorescensmikroskopi av lungmikrocirkulation vid experimentell akut lungskada med hjälp av ett vakuumstabiliserat bildsystem

Intravital imaging of leukocyte-endothelial interactions offers valuable insights into immune-mediated disease in live animals. The study of acute lung ...

Virus Propagation and Cell-Based Colorimetric Quantification

Virusförökning och cellbaserad kolorimetrisk kvantifiering

Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne virus belonging to the genus Flavivirus. ZIKV infection has been associated with congenital brain abnormalities and ...