Name: a seed coat bedding assay to genetically explore in vitro how the endosperm controls seed germination in arabidopsis thaliana
Uploaded: 2013-11-09T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Seed Coat Bedding Assay to Genetically Explore In Vitro How the Endosperm Controls Seed Germination in Arabidopsis thaliana at JoVE.com

Bu çalışma, İsviçre Ulusal Bilim Vakfı tarafından hibe ve Cenevre Devlet tarafından desteklenmiştir.

SCBA monte sonra, embriyoların büyümesi birkaç gün boyunca izlenir. Bu nedenle, SCBA&#39;daki tohum diseksiyon işlemi ve montaj önce, bir embriyo gelişimi üzerinde tohum kaplama malzemesinin etkisine uygun bir değerlendirme engelleyebilir gelecek kirletmesini önlemek için tohum sterilize etmek gerekmektedir. 1.. Tohum Sterilizasyon <ol><li> Bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içinde, olgun ve kuru Arabidopsis tohum 50-60 ul dökün ve% 70 etanol solüsyon hazırlanır. ...

<ol>
	<li>Debeaujon, I., Leon-Kloosterziel, K. M., Koornneef, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+the+testa+on+seed+dormancy,+germination,+and+longevity+in+Arabidopsis.">Influence of the testa on seed dormancy, germination, and longevity in Arabidopsis.</a> Plant Physiol. 122, 403-414 (2000).</li><li>Baroux, C., Spillane, C., Grossniklaus, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+origins+of+the+endosperm+in+flowering+plants.">Evolutionary origins of the endosperm in flowering plants.</a> Genome Biol. 3, reviews1026 (2002).</li><li>Debeaujon, I., Lepiniec, L., Pourcel, L., Routaboul, J. -. M., Bradford, K., Nonogaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Seed development, dormancy and germination. , 25-43 (2007).</li><li>Finch-Savage, W. E., Leubner-Metzger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seed+dormancy+and+the+control+of+germination.">Seed dormancy and the control of germination.</a> New Phytol. 171, 501-523 (2006).</li><li>Bethke, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Arabidopsis+aleurone+layer+responds+to+nitric+oxide,+gibberellin,+and+abscisic+acid+and+is+sufficient+and+necessary+for+seed+dormancy.">The Arabidopsis aleurone layer responds to nitric oxide, gibberellin, and abscisic acid and is sufficient and necessary for seed dormancy.</a> Plant Physiol. 143, 1173-1188 (2007).</li><li>Lee, K. P., Piskurewicz, U., Tureckova, V., Strnad, M., Lopez-Molina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+seed+coat+bedding+assay+shows+that+RGL2-dependent+release+of+abscisic+acid+by+the+endosperm+controls+embryo+growth+in+Arabidopsis+dormant+seeds.">A seed coat bedding assay shows that RGL2-dependent release of abscisic acid by the endosperm controls embryo growth in Arabidopsis dormant seeds.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19108-19113 (2010).</li><li>Reed, J. W., Nagatani, A., Elich, T. D., Fagan, M., Chory, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phytochrome+A+and+Phytochrome+B+Have+Overlapping+but+Distinct+Functions+in+Arabidopsis+Development.">Phytochrome A and Phytochrome B Have Overlapping but Distinct Functions in Arabidopsis Development.</a> Plant Physiol. 104, 1139-1149 (1994).</li><li>Shinomura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+spectra+for+phytochrome+A-+and+B-specific+photoinduction+of+seed+germination+in+Arabidopsis+thaliana.">Action spectra for phytochrome A- and B-specific photoinduction of seed germination in Arabidopsis thaliana.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 8129-8133 (1996).</li><li>Lee, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatially+and+genetically+distinct+control+of+seed+germination+by+phytochromes+A+and+B.">Spatially and genetically distinct control of seed germination by phytochromes A and B.</a> Genes Dev. 26, 1984-1996 (2012).</li><li>Lee, K. P., Lopez-Molina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+seed+germination+in+the+shade.">Control of seed germination in the shade.</a> Cell Cycle. 11, 4489-4490 (2012).</li><li>Piskurewicz, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gibberellic+acid+signaling+repressor+RGL2+inhibits+Arabidopsis+seed+germination+by+stimulating+abscisic+acid+synthesis+and+ABI5+activity.">The gibberellic acid signaling repressor RGL2 inhibits Arabidopsis seed germination by stimulating abscisic acid synthesis and ABI5 activity.</a> Plant Cell. 20, 2729-2745 (2008).</li><li>Piskurewicz, U., Tureckova, V., Lacombe, E., Lopez-Molina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Far-red+light+inhibits+germination+through+DELLA-dependent+stimulation+of+ABA+synthesis+and+ABI3+activity.">Far-red light inhibits germination through DELLA-dependent stimulation of ABA synthesis and ABI3 activity.</a> EMBO J. 28, 2259-2271 (2009).</li><li>Debeaujon, I., Koornneef, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gibberellin+requirement+for+Arabidopsis+seed+germination+is+determined+both+by+testa+characteristics+and+embryonic+abscisic+acid.">Gibberellin requirement for Arabidopsis seed germination is determined both by testa characteristics and embryonic abscisic acid.</a> Plant Physiol. 122, 415-424 (2000).</li><li>Sun, T. P., Kamiya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Arabidopsis+GA1+locus+encodes+the+cyclase+ent-kaurene+synthetase+A+of+gibberellin+biosynthesis.">The Arabidopsis GA1 locus encodes the cyclase ent-kaurene synthetase A of gibberellin biosynthesis.</a> Plant Cell. 6, 1509-1518 (1994).</li><li>Alonso, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+insertional+mutagenesis+of+Arabidopsis+thaliana.">Genome-wide insertional mutagenesis of Arabidopsis thaliana.</a> Science. 301, 653-657 (2003).</li><li>Rook, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+sucrose-induction+mutants+reveal+the+modulation+of+sugar-induced+starch+biosynthetic+gene+expression+by+abscisic+acid+signalling.">Impaired sucrose-induction mutants reveal the modulation of sugar-induced starch biosynthetic gene expression by abscisic acid signalling.</a> Plant J. 26, 421-433 (2001).</li></ol>

Burada açıklanan çiğit yatak deneyi (SCBA) prosedürü prensip olarak Arabidopsis tohum çimlenme bloke (ya da sonra) ve endosperm, bu tutuklama uygulamaya şüphelenilen herhangi bir durum için geçerlidir. İkincisi, tohum kabuğunu (testa ve endosperm) kaldırılması ve embriyolar, tohum kaplama ile çevrili zaman bu göre daha hızlı bir büyüme embriyonik ilerler gözlemlenen gözlemleyerek kanıtlanabilir. Çimlenme özellikle çevresel, fiziksel parametrelere (örneğin su ya da potansiy...

Arabidopsis olgun tohumlarda, tohum kabuğu testa, maternal kökenli ölü doku bir dış tabaka, ve endosperm, embriyo doğrudan 1 çevredeki canlı doku tek bir hücre tabakası oluşmaktadır. Endosperm ve embriyo ayrı fertilizasyon olaylardan türetilmiştir: embriyo, bir anne ve bir baba genomu 2 ile diploid doku ise endosperm anne ve bir baba genom iki ile bir triploid dokudur. Geleneksel olarak endosperm atanan ana işlevi bir besleyici doku olmasıdır. Bununla birlikte, aynı zamanda endosperm tohum çimlenmesi kontrol etmek için merkezi bir rol oynadığını giderek daha belirgin hale gelmektedir. Bu kavram, uyuşukluk durumunda yeni üretilen tohumlar tarafından sergilenen bir özellik birinci belli oldu. Uyuyan tohumlar çimlenme elverişli koşulların varlığına rağmen çimlenmeye başarısız. Tohumlar bir olgunlaşma döneminden sonra kendi uyuşukluğuna kaybeder ve nondorman halineuygun çimlenme koşullarına maruz kaldığında t, yani çimlenir. Model bitki Arabidopsis dahil olmak üzere birçok bitki türünün içinde, tohum kabuğu kesinlikle çiğit kaldırma embriyonik büyüme ve 3,4 yeşillendirme tetikler beri uykuda tohumların çimlenmesini önlemek için gereklidir. Arabidopsis&#39;te, Bethke et al. Çimlenme endosperm 5 çevreleyen endosperm korurken testa çıkardıktan sonra bastırılmış kaldığı görülmektedir. Bu gözlemler, güçlü endosperm, embriyo üzerinde baskı uygulayarak aktivitesi tohum kabuğu içindeki doku olduğunu belirtti. Ancak, tohum kabuğu kaldırma deneyleri zorunlu tohum kat tarafından sağlanan çimlenme baskıcı faaliyetin doğasını açıklığa kavuşturulması ne de bunu uygulamak genlerin belirlenmesi yardım yok. Biz son zamanlarda tohum kabukları ve embriyolar fiziksel olarak ayrılmış ama yakın proxi tutulur bir tohum kat yatak tahlili (SCBA) tanıttımity endosperm sağladığı çimlenme baskıcı aktivitesi 6 korunur, böylece. SCBA, uyuyan nondormant ve genetiği değiştirilmiş tohum ceket ve embriyonik malzemelerin birleştirici kullanımına izin verir. Bunun bir sonucu olarak, çimlenme ve özellikle endosperm ve embriyoda işletim kontrol genetik yolları çıkarılmasına olanak sağlar. SCBA endosperm 6 büyümesini bastırmak için embriyo doğru fitohormon absisik asit (ABA) serbest bırakır göstermek için uyuşukluk bağlamında kullanılmıştır. Ayrıca biz Dormantlığı tanıtmak için sinyal endosperminde faaliyet yollar ve embriyonik doku tanımlamak için SCBA&#39;yı kullanabilirsiniz. Çimlenme kontrol endospermin rolü daha çok kırmızı (FR) ışık darbesine maruz nondormant tohumların davayı dikkate alarak güçlendi. Erken tohumun çekilmesi üzerine bir FR ışık palsı çimlenme 7,8 inhibe ettiği bilinmektedir. Tohum kat tohumlardan FR bir ışık nabız kaldırıldığındaşiddetle endosperm de nondormant tohumların 9 çimlenmesini ezemez düşündüren, çimlenme inhibe edemedi. Dikkate değer olarak, bağımsız solunum aparatı da çimlenme FR-bağımlı inhibisyonu özetlemek için kullanılabilir. Bu tohum çimlenme bu FR-bağımlı inhibisyonu da endosperm 9 ABA salınmasını içeren bir süreç olduğunu göstermektedir bırakıldı. Ayrıca, bağımsız solunum aparatı endosperm ve hafif ipuçları 9,10 cevaben nondormant tohum çimlenmesi kontrol etmek için embriyo faaliyet gösteren farklı ışıklı sinyal yollarını tespit izin verdi. SCBA tohum çimlenme kontrolü bağlamında endosperm işlevini keşfetmek için güvenilir bir teknik olduğu, bu nedenle görünüyor. Ayrıca, çimlenme kontrol şüphelenilen genler endosperm, embriyo ya da her ikisi dokularda faaliyet olup olmadığını değerlendirmek için in vitro güçlü bir araçtır. Burada bir ayrıntı SCBA&#39;yı birleştirmek için gereken çeşitli adımları biz.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>To refer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermomixer Comfort</td>
			<td>Eppendorf AG</td>
			<td>5355 000.011</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacusafe Comfort</td>
			<td>INTEGRA Biosciences AG</td>
			<td>158 310</td>
			<td>Integra Biosciences AG, Zizers, Switzerland</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish plate (100 mm x 20 mm)</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH</td>
			<td>664 102</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murashige and Skoog</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M5524</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar (plant agar)</td>
			<td>Duchefa Biochemie B.V.</td>
			<td>P1001</td>
			<td>Duchefa Biochemie, Haarlem, Netherlands</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH</td>
			<td>11251-10</td>
			<td>Fine Science Tools GmbH, Heidelberg Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe needle</td>
			<td>BD Micro-Fine</td>
			<td>324827</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ USA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh (SEFAR NYTEX)</td>
			<td>SEFAR AG</td>
			<td>03-50/31</td>
			<td>Sefar AG, Heiden, Switzerland</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth chamber</td>
			<td>CLF Plant Climatics</td>
			<td>Percival I-30BLLX</td>
			<td>CLF plant Climatics, Wertingen, Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paclobutrazol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46046</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a seed coat bedding assay to genetically explore in vitro how the endosperm controls seed germination in arabidopsis thaliana

Arabidopsis endosperm olgun embriyoyu çevreleyen ve uyuyan tohumların çimlenmesini veya (FR) uzak kırmızı ışık atımı ile ışınlanmış nondormant tohumların bunu önlemek için önemli bir rol oynayan bir tek hücre tabakası oluşur. Ayrıca endosperm tarafından uygulanan çimlenme baskıcı aktivitesi altında yatan moleküler genetik mekanizmaları anlamak için, bir &quot;tohum kat yatak&quot; deneyi (SCBA) icat edildi. SCBA fiziksel tohum kat altta yatan bir katman üzerinde embriyo gelişimini izleme sağlar tohumlardan tohum mont ve embriyolar ayıran bir diseksiyon işlemdir. Dikkate değer, SCBA tohum dinlenmesi ve tohum çimlenme FR-bağımlı kontrolü bağlamında tohum kat çimlenme baskıcı faaliyetlerini yeniden oluşturulmasını. SCBA, atıl nondormant ve genetik olarak değiştirilmiş tohum kabuğu ve embriyo malzemeleri, çimlenme kontrol genetik yollarının kombinasyon kullanımına izin verir ve özel olarak op yanaendosperm ve embriyo aşmayınız disseke edilebilir. Burada bir ayrıntı SCBA&#39;yı monte prosedürü biz.

Önceki iş GA sentezlemek mümkün mutant tohum tohum 11,12 yüksek ABA birikiminin bir sonucu olarak çimlenme koyamadık olduğunu gösterdi. Onun kaldırma embriyonik büyüme 13 tetikler Ancak, çimlenmeye yetersizlik tohum kat gerektirir. Bu durum kuvvetle GA sentezlenmesi için mümkün tohumların endosperm embriyonik büyümesini bloke etmek ABA serbest olduğunu göstermiştir. Bu nedenle GA ve ABA sentezlemek mümkün tohum kat aksine SCBA&#39;daki embriyoların gelişimini engellemek i?...

Watch this Scientific Journal Video about A Seed Coat Bedding Assay to Genetically Explore In Vitro How the Endosperm Controls Seed Germination in Arabidopsis thaliana at JoVE.com

A Seed Coat Bedding Assay to Genetically Explore In Vitro How the Endosperm Controls Seed Germination in Arabidopsis thaliana

Genetiği keşfedin A Tohum Kabuğunun Yatak Deneyi<em&gt; In Vitro</em&gt; Nasıl Endosperminde Denetimler Çimlenme içinde<em&gt; Arabidopsis thaliana</em

Biz Arabidopsis thaliana tohum tohum kat yatak tahlili (SCBA) monte prosedürü sunuyoruz. SCBA genetik ve in vitro keşfetmek için güçlü bir araç olduğu gösterilmiştir nasıl uyuyan tohum ve hafif uyaranlara yanıt olarak endosperm kontrolleri tohum çimlenme. SCBA endosperm embriyonik büyümeyi etkilemek için şüphelenilen her durumda altında uygulanabilir prensip olarak.

The Arabidopsis endosperm consists of a single cell layer surrounding the mature embryo and playing an essential role to prevent the germination of ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Seed Coat Bedding Assay to Genetically Explore In Vitro How the Endosperm Controls Seed Germination in Arabidopsis thaliana

Use of Arabidopsis eceriferum Mutants to Explore Plant Cuticle Biosynthesis

Bitki Tırnak biyosentezi keşfedin Arabidopsis eceriferum Mutants

The plant cuticle is a waxy outer covering on plants that has a primary role in water conservation, but is also an important barrier against the entry of ...

Determination of DNA Methylation of Imprinted Genes in Arabidopsis Endosperm

Determination of DNA Methylation of Imprinted Genes in Arabidopsis Endosperm

Baskılı Genler DNA metilasyon Belirlenmesi Arabidopsis Endosperm

Arabidopsis thaliana is an excellent model organism for studying epigenetic mechanisms. One of the reasons is the loss-of-function null mutant of DNA ...

A High-content Imaging Workflow to Study Grb2 Signaling Complexes by Expression Cloning

İfade Klonlama tarafından Grb2 Sinyal Kompleksi Eğitim için bir Yüksek içerik Görüntüleme İş Akışı

Signal  transduction by growth factor receptors is essential for cells to maintain  proliferation and differentiation and requires tight control. Signal  ...

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Farklı ışık nitelikleri Arabidopsis thaliana büyüme davranış analizi

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light ...

A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications

Tam Tohum Lu Reişin Elde Edilmesinde Basit Bir Kuru Kesit Yöntemi ve Uygulamaları

The morphology, size and quantity of cells, starch granules&#160;and protein bodies in seed determine the weight and quality of seed. They are ...

Analysis of Effect of Compound Salt Stress on Seed Germination and Salt Tolerance Analysis of Pepper (Capsicum annuum L.)

Analysis of Effect of Compound Salt Stress on Seed Germination and Salt Tolerance Analysis of Pepper Capsicum annuum L.

Bileşik Tuz Gerilmesinin Tohum Çimlenmesine Etkisinin Analizi ve Karabiberin Tuz Toleransı Analizi (Capsicum annuum L.)

To determine the salt tolerance and physiological mechanism of pepper (Capsicum annuum L.) at the germination stage, the Hongtianhu 101 and Xinxiang 8 ...

Spatiotemporal Investigation of ERL1 Dynamics via Confocal Imaging

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells (Video) | JoVE 

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane ...

Investigating Zinc Transport Mechanism in Mammalian Cells with FluoZin-3 Assay

Characterizing Mammalian Zinc Transporters Using an In Vitro Zinc Transport Assay

Exploring Cellular Zinc Regulation Through ZnT1 Functionality (Video) | JoVE

İn Vitro Çinko Taşıma Testi Kullanılarak Memeli Çinko Taşıyıcılarının Karakterize Edilmesi

Transition metals such as Zn2+ ions must be tightly regulated due to their cellular toxicity. Previously, the activity of Zn2+ transporters was measured ...

An Improved Method to Measure Pollen Hydration Profiles in Arabidopsis thaliana

A High-Resolution, Single-Grain, In Vivo Pollen Hydration Bioassay for Arabidopsis thaliana

A High-Resolution, Single-Grain, In Vivo Pollen Hydration Bioassay for Arabidopsis thaliana (Video) | JoVE 

Arabidopsis thaliana için Yüksek Çözünürlüklü, Tek Taneli, In Vivo Polen Hidrasyon Biyotahlili

Sexual reproduction in flowering plants requires initial interaction between the pollen grain and the stigmatic surface, where a molecular dialog is ...

Pollen Hydration Assay in Arabidopsis thaliana: Raw Data Acquisition and its Measurements

Pollen Hydration Assay in Arabidopsis thaliana: Raw Data Acquisition and its Measurements (Video) | JoVE 

Arabidopsis thaliana'da Polen Hidrasyon Testi: Ham Veri Toplama ve Ölçümleri