Name: dithranol as a matrix for matrix assisted laser desorption/ionization imaging on a fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometer
Uploaded: 2013-11-26T19:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dithranol as a Matrix for Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Imaging on a Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أنوه الجينوم كندا وكولومبيا البريطانية الجينوم للتمويل منصة، والدعم. نشكر أيضا الدكتور كارول E. باركر لمراجعة نقدية للمساعدة مخطوطة والتحرير. شيلي أيضا بفضل كولومبيا البريطانية البروتيوميات الشبكة للحصول على الدعم.

1. الأنسجة باجتزاء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فلاش تجميد العينات المسألة، مرة واحدة تحصد، وذلك باستخدام النيتروجين السائل، وشحنها على الثلج الجاف (إذا كنت بحاجة الشحن)، وتخزينها في -80 درجة مئوية حتى باجتزاء الأنسجة. (إذا تم استخدام العينات التج?...

أهم الاعتبارات لنجاح MALDI MSI هي: 1) إعداد الأنسجة؛ 2) اختيار مصفوفة، 3) تطبيق مصفوفة؛ و 4) تفسير البيانات وتحليلها. عندما يتم إعداد العينة والمصفوفة بشكل مناسب، هو الآلي والحصول على البيانات MS. تحليل البيانات من هذا النوع من التجربة هو تماما كثيفة العمالة. <p class="jove_content" sty...

الطيف الكتلي التصوير (MSI) هو تقنية تحليلية لتحديد توطين وتوزيع الأنماط المكانية من المركبات على سطح قسم الأنسجة 1،2. وقد استخدمت مصفوفة بمساعدة الليزر الامتزاز / التأين (MALDI) MSI لتحليل الببتيدات والبروتينات لأكثر من عقد من الزمان، وكانت هناك تحسينات كبيرة في طرق تحضير العينة، حساسية الكشف، القرار المكانية، استنساخ ومعالجة البيانات 3،4. من خلال الجمع بين المعلومات من أقسام ملطخة تشريحيا والتجارب MSI، الأطباء قادرون على ربط توزيع مركبات معينة مع ميزات مثيرة للاهتمام pathophysiologically 5. كما تم استجواب أنماط توزيع جزيئات صغيرة، بما في ذلك الأدوية الخارجية ونواتج تفاعلاتها 6،7 8-10 بواسطة MALDI MS-الأنسجة التصوير 11. الدهون هي ربما الأكثر دراسة القانون المدني على نطاق واسعSS من المركبات مع التصوير MALDI، سواء في MS 12-17 و MS / MS 18 وسائط. وقد تم استخدام MALDI MSI للتصوير جزيء صغير محدودة بسبب عدة عوامل: 1) المصفوفات MALDI هم أنفسهم جزيئات صغيرة (عادة م / ض &lt;500)، والتي تولد إشارات أيون فيرة. هذه الإشارات وفيرة يمكن قمع التأين من analytes الصغيرة جزيء وتتداخل مع 19،20 الكشف عنها. الخالية من المذيبات مصفوفة طلاء 21، مصفوفة التسامي 22، ومصفوفة precoated MALDI MS 23، من بين أمور أخرى، وضعت لتحسين MSI جزيئات صغيرة. المصفوفات الجديدة التي يمكن أن تحسن تحليل مركبات منخفضة ميغاواط ذات أهمية كبيرة في جزيء صغير MSI. وينبغي توفير هذه المصفوفات زيادة إشارات الحليلة مع إشارات مصفوفة انخفضت. في وضع إيجابي أيون، 2،5-dihydroxybenzoic حمض (DHB) وα-سيانو-4-hydroxycinnamic حمض (CHCA) هي التي تستخدم عادة اثنين من المصفوفات MALDI MS لMSI 24 </سوب&gt;. إن مصفوفة مثالية تشكل بلورات صغيرة، وذلك للحفاظ على توطين المكاني للالتحاليل. DHB يميل إلى تشكل بلورات أكبر، لذلك تم تطوير تطبيق المصفوفة باستخدام التسامي للتغلب على هذه المشكلة جزئيا، وسمحت استخدام هذه المصفوفة للتصوير الحساسة من الدهون الفوسفاتية 22،25. وقد استخدمت 9-Aminoacridine لMSI من analytes بروتيتش في وضع إيجابي أيون 26 والنيوكليوتيدات والدهون الفوسفاتية في سلبية ايون وضع 26-29. تم العثور على 2-Mercaptobenzothiazole لإعطاء الكشف MALDI كفاءة من الدهون 30، واستخدمت لتصوير الدماغ الماوس gangliosides 31. قرار عالية جدا من تحويل فورييه ايون سيكلوترون صدى (FTICR) الطيف الشامل يمكن أن يخفف إلى حد ما حل هذه المشكلة عن طريق إشارات من إشارات الحليلة مصفوفة 32. ميزة أخرى لاستخدام FTICR-MS هو أن كثافة من كتل مصفوفة متبدل الاستقرار هي احمرارالطبعة 33، مما يقلل أيضا هذه التدخلات 27. استخدام أنثرالين (DT؛ 1،8 ثنائي هيدروكسي-9 ،10-dihydroanthracen-9-واحد) في شكل مصفوفة MALDI للتصوير الأنسجة قد سبق وذكرت 34. في هذا العمل الحالية، يتم توفير بروتوكول مفصلة لاستخدام DT لMSI الدهون الذاتية على أسطح أقسام الأنسجة عدسة الأبقار، في وضع إيجابي أيون.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Liver</td>
			<td>Pel-Freez Biologicals</td>
			<td>56023-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Calf Lens</td>
			<td>Pel-Freez Biologicals</td>
			<td>57114-2</td>
			<td>Sample should be decapsulated29 before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithranol (DT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10608</td>
			<td>MALDI Matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-Cyano-4-hydroxy-cinnamic Acid (CHCA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>70990</td>
			<td>MALDI Matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,5-Dihydroxybenzoic Acid (DHB)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>85707</td>
			<td>MALDI Matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reserpine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>83580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terfenadine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>14265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Formate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>14266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>320145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trifluoroacetic Acid (TFA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>302031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>39253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34967</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34965</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>366927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Commercial Alcohols</td>
			<td></td>
			<td>95%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ES Tuning Mix</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G2431A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITO Coated Glass Slides</td>
			<td>Hudson Surface Technology</td>
			<td>PSI1207000</td>
			<td>Ensure that samples are placed on the electrically conductive side</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wite-Out Shake-N-Squeeze Correction Pen</td>
			<td>Bic</td>
			<td>WOSQP11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airbrush Sprayer</td>
			<td>Iwata</td>
			<td>Eclipse HP-CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImagePrep</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>249500-LS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MALDI adapter</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>235380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dithranol as a matrix for matrix assisted laser desorption/ionization imaging on a fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometer

الطيف الكتلي التصوير (MSI) يحدد توطين وتوزيع الأنماط المكانية من المركبات على سطح قسم الأنسجة، وذلك أساسا باستخدام MALDI (مصفوفة بمساعدة الليزر الامتزاز / التأين) القائم على التقنيات التحليلية. وهناك حاجة إلى مصفوفات جديدة للمشاريع الصغيرة جزيء MSI، والتي يمكن تحسين تحليل منخفضة الوزن الجزيئي (MW) مركبات،. وينبغي توفير هذه المصفوفات زيادة إشارات تحليلها، بينما تتناقص إشارات خلفية MALDI. بالإضافة إلى ذلك، استخدام الأدوات عالية جدا دقة، مثل تحويل فورييه ايون سيكلوترون صدى (FTICR) الطيف الشامل، لديه القدرة على حل الحليلة إشارات من إشارات المصفوفة، وهذا يمكن التغلب على العديد من المشاكل المرتبطة جزئيا مع الخلفية مصدرها MALDI المصفوفة. الانخفاض في شدة مجموعات مصفوفة متبدل الاستقرار من قبل FTICR MS يمكن أيضا أن يساعد على التغلب على بعض التدخلات المرتبطة قمم مصفوفة على غيرها من الصكوك. عالية الدقةصكوك مثل الطيف الشامل FTICR هي مفيدة لأنها يمكن أن تنتج أنماط توزيع العديد من المركبات في وقت واحد في حين لا يزال توفير الثقة في هويات الكيميائية. أنثرالين (DT؛ 1،8 ثنائي هيدروكسي-9 ،10-dihydroanthracen-9-واحد) قد سبق وذكرت في شكل مصفوفة MALDI للتصوير الأنسجة. في هذا العمل، على هجين رباعي عالية جدا دقة وقدمت FTICR أداة بروتوكول لاستخدام DT لMALDI التصوير الدهون الذاتية من أسطح أقسام الأنسجة الثديية، من خلال إيجابية أيون MALDI إلى MS.

<html> يجب أن عينات الأنسجة التي يتم مقطوع وذوبان الجليد التي شنت على الشرائح الزجاجية ايتو المغلفة تكون سليمة، ودون تمزق مرئية. بالنسبة للعديد من الأنسجة، والأنسجة ذوبان الجليد المباشر على تركيب شريحة الزجاج المطلي ايتو هو مقبول. بالنسبة لبعض أنسجة معينة مثل عدسة الأب...

Watch this Scientific Journal Video about Dithranol as a Matrix for Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Imaging on a Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer at JoVE.com

Dithranol as a Matrix for Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Imaging on a Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer

أنثرالين (DT؛ 1،8 ثنائي هيدروكسي-9 ،10-dihydroanthracen-9-واحد) قد سبق وذكرت في شكل مصفوفة MALDI للتصوير الأنسجة من الجزيئات الصغيرة؛ البروتوكولات لاستخدام DT للتصوير MALDI من الدهون الذاتية على يتم توفير سطح أقسام الأنسجة التي كتبها إيجابية أيون MALDI-MS على دقة عالية جدا رباعي-FTICR الصك هنا.

أنثرالين كما مصفوفة لمصفوفة بمساعدة الليزر الامتزاز / التأين التصوير على تحويل فورييه ايون السيكلوترون الرنين مطياف الكتلة

Mass spectrometry imaging (MSI) determines the spatial localization and distribution patterns of compounds on the surface of a tissue section, mainly ...

Research

JoVE Journal

Biology

MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method

MALDI تحضير العينة : الترا أسلوب طبقة رقيقة

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption ...

Quantifying Mixing using Magnetic Resonance Imaging

خلط الكمي باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي

Mixing is a unit operation that combines two or more components into a homogeneous mixture.  This work involves mixing two viscous liquid streams using an ...

Improving the Success Rate of Protein Crystallization by Random Microseed Matrix Screening

تحسين نسبة نجاح تبلور البروتين بواسطة عشوائية Microseed ماتريكس فحص

Random microseed matrix screening  (rMMS) is a protein crystallization technique in which seed crystals are added  to random screens. By increasing the ...

Enrichment of Extracellular Matrix Proteins from Tissues and Digestion into Peptides for Mass Spectrometry Analysis

إثراء خارج الخلية مصفوفة البروتينات من الأنسجة والهضم في الببتيدات لتحليل الطيف الكتلي

The extracellular matrix (ECM) is a complex meshwork of cross-linked proteins that provides biophysical and biochemical cues that are major regulators of ...

Laser-assisted Microdissection (LAM) as a Tool for Transcriptional Profiling of Individual Cell Types

Laser-assisted Microdissection LAM as a Tool for Transcriptional Profiling of Individual Cell Types

بمساعدة الليزر تسليخ مجهري (لام) كأداة للالترانسكربتي التنميط من أنواع الخلايا الفردية

The understanding of developmental processes at the molecular level requires insights into transcriptional regulation, and thus the transcriptome, at the ...

Implementation of a Coherent Anti-Stokes Raman Scattering (CARS) System on a Ti:Sapphire and OPO Laser Based Standard Laser Scanning Microscope

Implementation of a Coherent Anti-Stokes Raman Scattering CARS System on a Ti:Sapphire and OPO Laser Based Standard Laser Scanning Microscope

تنفيذ نظام متماسك مكافحة ستوكس رامان نثر (CARS) على تي: الياقوت وOPO بالليزر القائم ستاندرد الليزر الضوئي مجهر

Laser scanning microscopes combining a femtosecond Ti:sapphire laser and an optical parametric oscillator (OPO) to duplicate the laser line have become ...

MRM Microcoil Performance Calibration and Usage Demonstrated on Medicago truncatula Roots at 22 T

MRM Microcoil Performance Calibration and Usage Demonstrated on Medicago truncatula Roots at 22 T

MRM Microcoil معايرة الأداء والاستخدام أظهرت على جذور طاعون Medicago في 22 T

This protocol describes a signal-to-noise ratio (SNR) calibration and sample preparation method for solenoidal microcoils combined with biological ...

Cryogenic Sample Loading into a Magic Angle Spinning Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer that Preserves Cellular Viability

تحميل عينة المبردة في زاوية سحرية الغزل مطياف الرنين المغناطيسي النووي الذي يحافظ على الجدوى الخلوية

Dynamic nuclear polarization (DNP) can dramatically increase the sensitivity of magic angle spinning (MAS) nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy. ...

Sample Preparation for Rapid Lipid Analysis in Drosophila Brain Using Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging

Sample Preparation for Rapid Lipid Analysis in Drosophila Brain Using Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Imaging

إعداد العينات للتحليل السريع للدهون في دماغ ذبابة الفاكهة باستخدام التصوير الطيفي الكتلي للارتزاز / التأين بالليزر بمساعدة المصفوفة

Lipid profiling, or lipidomics, is a well-established technique used to study the entire lipid content of a cell or tissue. Information acquired ...

Simplifying Angiogenesis Studies with a Modified Matrix Gel Plug Assay

Modified In Vivo Matrix Gel Plug Assay for Angiogenesis Studies

Author Spotlight: Investigating Angiogenesis and Vessel Permeability Through a Modified Matrix Gel Plug Assay

تعديل في الجسم الحي مصفوفة هلام المكونات مقايسة لدراسات تولد الأوعية

Several models have been developed to investigate angiogenesis in vivo. However, most of these models are complex and expensive, require specialized ...