Name: isolation and th17 differentiation of na&iuml;ve cd4 t lymphocytes
Uploaded: 2013-09-26T21:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÂ¯ve CD4 T Lymphocytes at JoVE.com

Dette arbeidet støttes delvis av NIH / NCATS Kliniske og translasjonell forskning Awards til University of Florida TL1 TR000066 og UL1 TR000064, et mangfold supplement fra Parent Grant R01AI056152 fra National Institute of Health, en BD Biosciences reagens stipend, og universitetet av Florida.

All bruk dyret ble gjennomført i henhold til protokoller godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité. En. Utarbeidelse av blandinger og Media <ol><li> Sterile PBS pH 7,3 (1 liter) 0,23 g NaH 2 PO 4 1,15 g Na 2 HPO 4 9,0 g NaCl Ta opp volumet med DI vann. Steriliser med autoklav. </li><li> Cell Culture Media (100 ml) 89 ml RPMI 10 ml 10% FBS <br...

<ol>
	<li>Chen, Z., Lin, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxp3+and+ROR&#947;T:+transcriptional+regulation+of+Treg+and+Th17.">Foxp3 and ROR&#947;T: transcriptional regulation of Treg and Th17.</a> International Immunopharmacology. 11, 536-542 (2011).</li><li>Cua, D. J., Sherlock, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-23+rather+than+interleukin-12+is+the+critical+cytokine+for+autoimmune+inflammation+of+the+brain.">Interleukin-23 rather than interleukin-12 is the critical cytokine for autoimmune inflammation of the brain.</a> Nature. 421, 742-748 (2003).</li><li>El-Behi, M., Rostami, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+views+on+the+roles+of+Th17+and+Th17+cells+in+experimental+autoimmune+encephalitis.">Current views on the roles of Th17 and Th17 cells in experimental autoimmune encephalitis.</a> J. Neuroimmune Pharmacol. 5, 189-197 (2010).</li><li>Inaba, K., Kroide, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+memory+T+lymphocytes+isolated+from+the+mixed+leukocyte+reaction.">Properties of memory T lymphocytes isolated from the mixed leukocyte reaction.</a> Proc Natl Acad Sci. 82, 7686-7690 (1985).</li><li>L, I. v. a. n. o. v. F. r. u. t. o. s. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+microbiota+direct+the+differentiation+of+IL-17-producing+T-helper+cells+in+the+mucosa+of+the+small+intestine.">Specific microbiota direct the differentiation of IL-17-producing T-helper cells in the mucosa of the small intestine.</a> Cell Host Microbe. 16, 337-349 (2008).</li><li>Jager, L. D., Dabelic, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Kinase+Inhibitory+Region+of+SOCS-1+is+Sufficient+to+Inhibit+T+helper-17+Function+in+Experimental+Allergic+Encephalomyelitis.">The Kinase Inhibitory Region of SOCS-1 is Sufficient to Inhibit T helper-17 Function in Experimental Allergic Encephalomyelitis.</a> J. Neuroimmunol. 232, 08-18 (2011).</li><li>Kimura, A., Kishimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-6:+regulator+of+Treg/Th17+balance.">IL-6: regulator of Treg/Th17 balance.</a> Eur. J. Immunol. 40, 1830-1835 (2010).</li><li>Korn, T., Bettelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-17+and+Th17+Cells.">IL-17 and Th17 Cells.</a> Annu Rev Immunol. 27, 485-517 (2009).</li><li>Kriegel, M. A., Seflk, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+transmitted+segmented+filamentous+bacteria+segregate+with+diabetes+protection+in+nonobese+diabetic+mice.">Naturally transmitted segmented filamentous bacteria segregate with diabetes protection in nonobese diabetic mice.</a> PNAS. 108, 11548-11553 (2011).</li><li>Langrish, C. L., Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-23+drives+a+pathogenic+T+cell+population+that+induces+autoimmune+inflammation.">IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation.</a> J. Exp. Med. 201, 233-240 (2005).</li><li>Lau, K., Benitez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+type+1+diabetes+by+a+Lactobacillus+johnsonii+mediated+Th17+bias.">Inhibition of type 1 diabetes by a Lactobacillus johnsonii mediated Th17 bias.</a> J. Immunol. 186, 3538-3546 (2011).</li><li>Lee, Y., Awasthi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+molecular+signature+of+pathogenic+TH17+cells.">Induction and molecular signature of pathogenic TH17 cells.</a> Nat Immunol. 13, 991-999 (2012).</li><li>Litmann, D. R., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+and+regulatory+T+cells+in+mediating+and+restraining+inflammation.">Th17 and regulatory T cells in mediating and restraining inflammation.</a> Cell. 140, 845-858 (2010).</li><li>O'Connor, W., Kamanaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protective+function+for+interleukin+17A+in+T+cell-mediated+intestinal+inflammation.">A protective function for interleukin 17A in T cell-mediated intestinal inflammation.</a> Nat Immunol. 10, 603-609 (2009).</li><li>Picca, C. C., Larkin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+TCR+specificity+in+CD4+CD25++regulatory+T+cell+selection.">Role of TCR specificity in CD4+CD25+ regulatory T cell selection.</a> Immunol Rev. 212, 74-85 (2006).</li><li>Shah, K., Lee, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disregulated+balance+of+Th17+and+Th1+cells+in+systemic+lupus+erythematosus.">Disregulated balance of Th17 and Th1 cells in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 12, R53 (2010).</li><li>Sospedra, M., Martin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+of+Multiple+Sclerosis.">Immunology of Multiple Sclerosis.</a> Annu. Rev. Immunol. 23, 683-747 (2005).</li><li>Stockringer, B., Veldhoen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+function+of+Th17+T+cells.">Differentiation and function of Th17 T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 19, 281-286 (2007).</li><li>Veldhoen, M., Hocking, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF&#946;+in+the+context+of+an+inflammatory+cytokine+milieu+supports+de+novo+differentiation+of+IL-17-producing+T+cells.">TGF&#946; in the context of an inflammatory cytokine milieu supports de novo differentiation of IL-17-producing T cells.</a> Immunity. 24, 179-189 (2006).</li><li>Zou, Y., Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-dependent+production+of+interleukin-17/interferon-&#947;+and+matrix+remodeling-associated+genes+in+experimental+Candida+albicans+keratitis.">Strain-dependent production of interleukin-17/interferon-&#947; and matrix remodeling-associated genes in experimental Candida albicans keratitis.</a> Mol Vis. 18, 1215-1225 (2012).</li></ol>

Her har vi beskrevet protokollen for å oppnå in vitro Th17 differensiering. Studiet av Th17 differensiering er viktig, som differensiering av T-lymfocytter inn i Th17 undergruppe er avgjørende for effektiv eliminering av menneskelige patogener 13. Motsatt har IL17 produksjonen vært forbundet med autoimmune sykdomsprogresjon 13. Metoden for Th17 differensiering kan anvendes på mange forsknings innstillinger som det kan brukes på en rekke forskjellige murine modeller av immun regulerin...

CD4 + T-lymfocytter (T-celler) spiller en avgjørende rolle i immunforsvaret-mediert forsvar mot smittsomme mikroorganismer. Omvendt, er T-celler også nært forbundet med angrep og progresjon av autoimmune sykdommer slik som type 1-diabetes, systemisk lupus erythematosus og reumatoid artritt. CD4 + T-lymfocytter bli aktivert gjennom en kombinasjon av T-celle reseptor (TCR) interaksjoner med beslektet antigen / store histocompatibility kompleks II (MHCII) molekyler, og CD28 reseptor interaksjoner med B7.1/B7.2 ligands 15. I tillegg til bestemmelse av TCR stimulering og CD28 ko-stimulering, antigen-presenterende celler gir også et cytokin miljø, som bestemmer differensiering tilstand av T-lymfocytter, for derved å dirigere T-lymfocytt respons på det gitte antigen. Tydelig patogen / antigen-presentasjon celle interaksjoner skape distinkte cytokin miljøer, som skew T-lymfocytter ned forskjellige veier fokusert på elimelse av initiere patogen. Dessverre, T-lymfocytter effektor trasé, opprinnelig utviklet for å utrydde invaderende patogener, kan feilaktig rettet mot selv vev 15. Det er derfor bedre forståelse av hver distinkt CD4 + T-celle-undersett er differensiering tilstand avgjørende for forståelsen av hvordan å modulere balanse mellom eliminering av patogener og toleranse mot seg selv. I tillegg til den TM1, TM2, og induserbare regulatoriske T-celledifferensiering trasé kan naive T-lymfocytter også være drevet av cytokiner nedover Th17 pathway. Mens Th1 celler bekjempe intracellulære patogener, Th2-celler eliminere ekstracellulære patogener, og regulatoriske T-celler (Tregs) redusere inflammatoriske responser 1, 16; Th17 celler spiller en viktig rolle i eliminasjonen av ekstracellulære bakterier og sopp. Th17 celler er generelt angitt med ekspresjon av slekten-spesifikk transkripsjonsfaktor RORγT og produksjon av IL-17A, som fremmer aktiveringen av makrofager og neutrofiler 1, 7. Th17 celler har vært implisert i flere autoimmune sykdommer, og deres tilknyttede gnager-modeller. For eksempel har det blitt vist at IL-23 (som er nødvendig for å opprettholde den Th17-fenotype), men ikke IL-12, var det sentrale årsaken i eksperimentell autoimmun encefalitt (EAE), en gnager sykdomsmodellen for MS. Det har i ettertid vist seg at reduksjoner i IL-17 produksjon er korrelert til EAE forebygging 2, 6, 17. Videre har Th17-celler er assosiert med andre autoimmune sykdommer, inkludert artritt og systemisk lupus erythematosus (SLE), 10, 16. IL-23 mangel p19 - / - mus ble vist å ha svært lavt antall Th17-celler, og er motstandsdyktige mot å utvikle ikke bare EAE, men også kollagen-indusert artritt, en modell for reumatoid artritt 10, 18. I tillegg, viste mus behandlet med nøytraliserende IL-17A antistoffer akteruteh angrep av kollagen-indusert artritt ble også funnet å ha oppløsning av leddskade 18.. Det bør bemerkes at rollen til Th17-celler i progresjonen av autoimmune sykdommer som gjen karakteriseres som nyere forskning har også vist en beskyttende rolle Th17-celler i type 1 diabetes 9, 11 og intestinal inflammasjon 14.. Disse studiene bekrefter viktigheten av Th17 differensiering i autoimmunitet. In vitro Th17 differensiering er en nødvendig metode i T-celle forskning fordi det er minst to forvirrende spørsmål som krever videre undersøkelser: 1) Hvor nøyaktig gjør IL-6 regulerer balansen mellom Treg og Th17 differensiering, og 2) hva er de eksakte mekanismene bak IL-17-indusert inflammatoriske lidelser? Vår metode syssels CD4 + CD25-T-celler fra milt og lymfeknuter i C57BL / 6 mus. Det er viktig å merke seg at selv om det er mulig å indusere Th17 differensiering ved bruk av en urenbefolkningen, anskaffe minst en 80% ren CD4 + CD25-T celle befolkningen benekter enhver bekymring for forurensning og sikrer mer vellykkede Th17 differensiering resultater. For å oppnå riktig Th17 differensiering, er CD4 + CD25-T-celler inkubert i nærvær av anti-CD3 og anti-CD28, som gir aktiveringssignaler, 1 og 2, henholdsvis, og IL-6, og TGF-β. Selv om det er blitt rapportert at IL-23 alene kan brukes til å oppnå Th17 differensiering, ble det senere vist at IL-23 er nødvendig for stabiliteten av Th17 cellepopulasjon, men IL-6-og TGF-β er essensielle for Th17 differensiering 3, 18, ​​19. Murine studier har vist at IL-23 reseptoren uttrykt på CD4 + T-celler etter at de har blitt stimulert med IL-6-og TGF-β 13, 18. Dessuten vil Th17-celler med hell utvikles i nærvær av IL-23-blokkerende antistoffer, så lenge som IL-6-og TGF-β er til stede 18, 19. Som sådan, dette Th17 differensiering protokollen provIdes de riktige forhold for å lykkes indusere Th17 differensiering. Utvikling av en bedre forståelse av mekanismene bak Th17 differensiering og IL-17 produksjon presentere muligheten for utvikling av bedre legemiddelselskap rettet mot autoimmune lidelser 13.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagent/Material</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sterile Polyestrene Petri Dish</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>0875713A</td>
 <td>60 mm x 15 mm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>autoMACS Running Buffer</td>
 <td>Miltenyi Biotec</td>
 <td>130-091-221</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Premium Microscope Slides, Frosted</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>12-544-3</td>
 <td>3" x 1"1 mm</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5 ml 21G1 Latex Free Syringe and Needle</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>309632</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Corning 15 ml Centrifuge Tubes</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>CLS430791</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nylon 40 microns</td>
 <td>Miami Aquaculture</td>
 <td>Nylon 40/26</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microtest tissue culture plate 96 well U bottom </td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>35-3077</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Corning Costar 24 well cell culture plates</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>CL3524</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Eppendorf Tubes 1.5 ml</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>05-408-129</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Purified NA/LE Hamster Anti-Mouse CD3e</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553057</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Purified NA/LE Hamster Anti-Mouse CD28</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553294</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mouse IL-6 Recombinant Protein</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>14-8061-62</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TGFbeta</td>
 <td>R&amp;D Systems</td>
 <td>240-B-002</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trypan blue solution 0.4 %</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>66H2364</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Pac Blue Rat Anti-Mouse CD4</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>558107</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>APC Rat Anti-Mouse CD8a</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>553035</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PE Conjugated Anti-mouse CD25</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>E01155-516</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alexa Fluor 700 Rat Anti-mouse IL-17</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>560820</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Intracellular Cytokine Staining Starter Kit-Mouse</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>51-2041AK (559311)</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MACS CD4+CD25+ regulatory T cell isolation kit, mouse</td>
 <td>Miltenyi Biotec</td>
 <td>130-091-221</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ABAM </td>
 <td>Cellgro</td>
 <td>30-004-CI</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>RPMI</td>
 <td>Corning, Cellgro</td>
 <td>10-040-CM</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>B 2-MercaptoEthanol</td>
 <td>MP Biomedical</td>
 <td>194834</td>
 <td>Hazardous</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA)</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ionomycin Calcium Salt</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>13909-1ML</td>
 <td>Hazardous</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Brefeldin A (BFA)</td>
 <td>MP Biomedicals</td>
 <td>159027</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ELISA IL-17A Capture mAb </td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555068</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ELISA IL-17A Detection mAb </td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555067</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>ELISA IL-17A Standard</td>
 <td>eBioscience</td>
 <td>14-8171-80</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>IL-2 ELISA Kit</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555148</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>TMB Substrate Reagent Set </td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555214</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>autoMACS Pro Cell Separator</td>
 <td>Miltenyi Biotec</td>
 <td>130-092-545</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sorvall Legend RT+ Centrifuge</td>
 <td>ThermoScientific</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Napco series 8000 WJ CO2 Incubator</td>
 <td>ThermoScientific</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PTC-200 Peltier Thermal Cycler</td>
 <td>Biorad</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolation and th17 differentiation of na&iuml;ve cd4 t lymphocytes

Th17-celler er en distinkt undergruppe av T-celler som har blitt funnet å produsere interleukin 17 (IL-17), og skiller seg i funksjon fra de andre T-celle-undergrupper inkludert TM1, TM2, og regulatoriske T-celler. Th17 celler har dukket opp som en sentral skyldige i overivrig inflammatoriske immunresponser forbundet med mange autoimmune lidelser. I denne metoden renser vi T-lymfocytter fra milten og lymfeknutene av C57BL / 6 mus, og stimulere rensede CD4 + T celler under kontroll og Th17-induserende miljøer. Den Th17-induserende miljø omfatter stimulering i nærvær av anti-CD3 og anti-CD28-antistoffer, IL-6, og TGF-β. Etter inkubering i minst 72 timer og opp til fem dager ved 37 ° C, blir cellene deretter analysert for evnen til å produsere IL-17 ved flowcytometri, qPCR og ELISAs. Th17 differensiert CD4 + CD25-T-celler kan benyttes til å videre belyse den rollen som Th17 celler spiller i utbruddet og progresjon av autoimmunitet og vert defense. Videre kan Th17 differensiering av CD4 + CD25-lymfocytter fra forskjellige murine knockout / sykdom modeller bidra til vår forståelse av celle skjebne plastisitet.

Dette Th17 differensiering protokollen begynner med fjerning av milten og aksillære, brachialis, mesenterisk, cervical og inguinale lymfeknuter. En representasjon av stedene til hver kan finnes i figurene 2 og 3. Figurene 1 og 5 begge gir en visuell representasjon av de metoder som er beskrevet i denne protokollen. Dette Th17 protokollen fokuserer på differensiering fra CD4 + CD25-T lymfocyttpopulasjonen. Det er viktig å være oppmerksom ...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÂ¯ve CD4 T Lymphocytes at JoVE.com

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

Med effektorfunksjoner forskjellige fra andre T celle undergrupper, har Th17 celler er sentralt involvert i inflammatorisk autoimmunitet. Denne in vitro Th17 differensiering protokollen gir et middel for å bestemme om naive CD4 + T-lymfocytter kan differensiere til Th17-celler, og for ytterligere å undersøke deres rolle i autoimmunitet og vertsrespons.

Isolasjon og Th17 Differensiering av naive CD4 T-lymfocytter

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa

Isolering av Lymfocytter fra Mouse kjønnsorgan Mucosa

Mucosal surfaces, including in the gastrointestinal, urogenital, and respiratory tracts, provide portals of entry for pathogens, such as viruses and ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Akselerert Type 1 Diabetes Induksjon i Mus ved Adoptive Overføring av diabetogenic CD4 + T celler

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

Adenoviral Transduksjon av Naive CD4 T-celler for å studere Treg Differensiering

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

Statisk feste analysen for Study of inte Activation i T-lymfocytter

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mus naive CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Cell Isolasjon og<em&gt; In vitro</em&gt; Differensiering i T cell Subsets

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Efficient Isolation Protocol for B and T Lymphocytes from Human Palatine Tonsils

Effektiv Isolasjon Protokoll for B og T-lymfocytter fra Menneskerettighets Palatine Mandlene

Tonsils form a part of the immune system providing the first line of defense against inhaled pathogens. Usually the term &#8220;tonsils&#8221; refers to ...

Isolation and Ex Vivo Culture of V&#948;1+CD4+&#947;&#948; T Cells, an Extrathymic &#945;&#946;T-cell Progenitor

Isolation and Ex Vivo Culture of VÃƒÅ½Ã‚Â´1+CD4+ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells, an Extrathymic ÃƒÅ½Ã‚Â±ÃƒÅ½Ã‚Â²T-cell Progenitor

Isolasjon og<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Culture of Vδ1<sup&gt; +</sup&gt; CD4<sup&gt; +</sup&gt; γδ T Cells, en Extrathymic αβT-celle Progenitor

The thymus, the primary organ for the generation of &#945;&#946; T cells and backbone of the adaptive immune system in vertebrates, has long been ...

Imaging CD4 T Cell Interstitial Migration in the Inflamed Dermis

Imaging CD4 T Cell Interstitiell Migrasjon i Betente dermis

The ability of CD4 T cells to carry out effector functions is dependent upon the rapid and efficient migration of these cells in inflamed peripheral ...